柑橘大實蠅對板栗揮發性有機化合物的觸角電位及嗅覺行為反應

楊 璇 杜田華 何章章 梁 鵬 劉文茹 華登科 陳 前 王福蓮 張國輝 桂連友

（長江大學農學院/農林病蟲害預警與調控湖北省工程技術研究中心，湖北荊州 434025）

柑橘大實蠅（Bactrocera minax （Enderlein）），隸屬于雙翅目（Diptera）實蠅科（Tephritidae），是為害柑橘類果實的毀滅性害蟲，也是中國公布對外檢疫對象之一[1-3]。柑橘大實蠅1年發生1代，4—5月羽化，羽化后飛進柑橘園附近的樹林里取食補充營養；6—7月飛進柑橘園，在柑橘上產卵，導致果實未熟先黃，被害果提前脫落，對我國柑橘產業的可持續發展造成了嚴重威脅[4-6]。目前，柑橘大實蠅的防治主要采用農業防治和化學防治相結合的措施[3，7]。實際上，及時監測和準確預報在柑橘大實蠅害蟲的有效防控中尤為重要。目前，多種引誘劑已應用于柑橘大實蠅成蟲的監測[7]。然而，這些食物引誘劑配方很少誘到初羽化的成蟲[8]。這使得預測的柑橘大實蠅成蟲發生時間明顯滯后于田間實際發生時間[9]，嚴重影響該蟲預報準確性。其主要原因是對初羽化柑橘大實蠅成蟲的嗅覺敏感食物源等基礎性問題理解不夠。

植物揮發性物質是昆蟲選擇寄主植物進行取食、產卵和躲避等活動的重要依據，更是許多野生動物的重要食物來源[10]。中國板栗（Castanea mollissima）（Fagaceae：Castanea）是我國特有植物，也是長江流域部分地區森林生態系統中的重要物種之一[11]。本項目組在2013—2016年利用昆蟲諧波雷達跟蹤研究，首次發現初羽化的柑橘大實蠅成蟲在中國板栗雄花花序上活動[12]，并通過錄像觀察法證實柑橘大實蠅成蟲在中國板栗雄花花序上存在取食行為[13]。龔碧涯等[14]通過“Y”形嗅覺儀分別測定柑橘大實蠅雌、雄成蟲對橘子精油、橙葉精油、橙花精油、檸檬桉精油、薄荷素精油、梔子花精油、D-檸檬烯、芳樟醇和月桂烯的選擇率，明確其植物精油或揮發物對柑橘大實蠅具有引誘或驅避作用。杜田華等[15]通過采用頂空捕集法和氣相色譜-質譜聯用技術，對中國板栗揮發物進行初步鑒定，并利用“Y”形嗅覺儀對3種不同處理中國板栗（葉片、雄花花序、雄花花序和葉片混合）和7種板栗揮發性化合物的選擇行為反應初步測定，證明了板栗雄花和葉片揮發物和4種板栗揮發性化合物對初羽化成蟲具有顯著引誘作用。本文利用觸角電位儀和“Y”形嗅覺儀測定柑橘大實蠅成蟲對4種不同濃度的14種板栗揮發物的EAG反應相對值和嗅覺行為反應差異，篩選出對初羽化柑橘大實蠅成蟲具有引誘行為或驅避行為功能的化合物，以期為柑橘大實蠅的準確預測預報和引誘劑的研發提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試蟲源。2017年10月，在湖北松滋市陳店鎮（北緯 30°18′、東經 111°77′）未采取防控措施的柑橘園中收集落果中的柑橘大實蠅幼蟲，帶回長江大學昆蟲化學生態學實驗室，埋在厚度為5～7 cm的河沙中。幼蟲化蛹后，分期、分批收集蛹轉移到盛有河沙（厚度5～7 cm）的塑料盆（直徑17 cm、高11 cm）中，保持土壤濕度為20%左右。成蟲羽化后，收集成蟲并置于規格為35 cm×35 cm×35 cm的養蟲籠中飼養，人工飼喂的飼料為酵母菌浸粉（純味型，青島海博生物技術有限公司）和蔗糖（化學純，北京康普匯維科技有限公司），其質量比為1∶3，以飼養的1日齡和3日齡雌、雄蟲作為供試蟲源。試驗均在長江大學農學院化學生態實驗室進行，氣溫（25±2）℃，相對濕度（65±5）%，自然光照。

1.1.2 供試藥劑。供試藥劑有活性炭、正己烷、丙酮和乙醚，均為分析純級，購于天津市天力化學試劑有限公司。正己烷、丙酮和乙醚均使用旋轉蒸發儀（RE-5286A，上海亞榮生化儀器廠）重蒸3次。活性炭在使用前，先在Soxhlet提取器（JOYN-SXT-04，上海喬躍電子有限公司）中依次用重蒸正己烷、重蒸丙酮和重蒸乙醚回流72 h，然后置于恒溫箱（型號DHG-9033BS-Ⅲ，上海新苗醫療器械制造有限公司）中烘干（120℃，1 h），最后裝入玻璃棒中密封，每個碳棒含活性炭20 g。

供試的14種味源物為參考前人有關實蠅類植物引誘劑和板栗揮發性化合物研究結果選定，包括β-石竹烯[16]、檸檬烯、α-蒎烯[15]、異丁醛[17]、戊醛[18]、苯乙醛、順-3-己烯-1-醇[19]、水楊酸甲酯[20]、乙偶姻[21]、苯乙酸甲酯[22]、乙酸芐酯[23]、乙酸芳樟酯、壬醛和芳樟醇[24]。另外，正己烷作為溶劑和對照，所有的化合物（包括正己烷）均為色譜純，均購于美國Sigma公司。14種揮發物標準品分別配制成濃度為0.5、1.0、5.0、10.0 μg/μL 的溶液[15]，溶液現配現用。

1.1.3 試驗儀器。試驗儀器有QC-1S大氣采樣儀（北京市勞動保護科學研究所）、“Y”形嗅覺儀 （由“Y”形無色透明玻璃管、味源瓶、活性炭管、流量計和大氣采樣儀組成，各部件之間用Teflon管相連）?！癥”形管內徑4 cm，主臂20 cm，兩側臂20 cm，側臂間夾角為75°，主臂與大氣采樣儀相連，每個側臂與味源瓶（方柱形，規格為 30 cm×30 cm×65 cm）、活性炭管和流量計相連?！癥”形管放入獨立的暗箱（90 cm×60 cm×65 cm）內，打開暗箱內的100 W日光燈，流量計調節管中氣體流速為150 mL/min。觸角電位儀由荷蘭Syntech公司生產，由智能化數據獲取控制器IDAC-2、刺激氣流控制器（SyntechCS-55）、微動操作儀（SyntechMN-151）及Syn-tech軟件處理系統等4個部分組成。

1.2 試驗方法

1.2.1 柑橘大實蠅成蟲對板栗揮發物的EAG反應。測試方法參考宮慶濤[8]的方法并稍作修改，測試不同日齡（1、3日齡）、性別（雌、雄）柑橘大實蠅成蟲對味源（14種板栗揮發物，供試濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0 μg/μL）的嗅覺行為反應，以正己烷為對照（CK），溶劑均為正己烷。測試樣品濃度遵循從低到高的原則，每根觸角連續測定相同濃度的14種標準品化合物各1次。為避免觸角的生理活性隨著時間的延長而降低對試驗造成不利的影響，將對照在測試14種化合物前、后各測試1次，且14種化合物測試順序隨機，每個處理使用1頭成蟲，每個處理重復10次?？傆嫻┰嚦上x160頭。剪取柑橘大實蠅成蟲的觸角1根，用毛細管吸導電液將觸角基部和端部分別與觸角電位儀中觸角電位探頭的參比電極和記錄電極相連，基線平穩以后便可以開始試驗。將濾紙剪成3.0 cm×0.5 cm的濾紙條，用作各溶液的載體，置于塑料槍頭（移液槍）內。滴加10 μL待測樣品溶液于濾紙條上，試液滲透濾紙條而沒有余液流出并用手按住槍頭管口，防止樣品揮發。測試時將槍頭一端插入送氣管外側直徑為2 mm的小孔內，送氣管管口與觸角縱向垂直，并與觸角相距1 cm左右。打開送氣泵開關，點擊鼠標和踩腳踏板，刺激0.5 s，刺激氣流 100 mL/min，3次刺激時間相隔30 s，以保證觸角感覺器的感覺功能完全恢復。濾紙條上的揮發性物質刺激觸角產生神經脈沖，經信號放大，由Syntech軟件記錄其觸角電位（EAG）值。相關計算公式如下：

EAG 反應相對值（V）=2R/（C1+C2）

式中，R為氣味物質的EAG值，C1、C2分別為對照（正己烷）在測試14種化合物前、后各測試1次的 EAG 值[25]。

1.2.2 柑橘大實蠅成蟲對板栗揮發物的嗅覺行為反應。 測試不同日齡（1、3日齡）、性別（雌、雄）柑橘大實蠅成蟲對味源（14種板栗揮發物，濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0 μg/μL）的嗅覺行為反應，以正己烷為對照（CK），溶劑均為正己烷。每次參加選擇行為試驗的柑橘大實蠅成蟲1頭，各處理組合有效重復30頭，總計成蟲 6 720 頭。試驗時間為 6：00—18：00，將“Y”形管、味源瓶、活性炭管、流量計和大氣采樣儀之間用Teflon管相連，引誘味源物設置使用毛細管法（包括毛細管和味源瓶），味源瓶選用過濾管，取1支毛細管（10 μL）吸取味源物或對照化合物 10 μL 后，置于過濾管中。在嗅覺儀上方安裝100W日光燈作為觀察時的光源。測試前，需打開大氣采樣儀通氣1 min。測試時，每次將1頭柑橘大實蠅成蟲由“Y”形管主臂管口引入，待其爬過主臂管口1/2處后開始計時。觀察時間為10 min，昆蟲只用一次。成蟲爬過某一側臂頂端1/2處，并且停留1 min以上時，記為對該氣味有選擇，否則記為對該氣味無選擇。每測5頭成蟲后調換1次“Y”形管的左右位置，同時用無水乙醇清洗“Y”形管，然后將樣品與對照互換位置，以消除“Y”形管管臂左右位置或在管壁上遺留物對柑橘大實蠅成蟲行為可能產生的影響。測試前，在不引入柑橘大實蠅成蟲條件下，需要測試1支毛細管中吸滿10 μL味源物或對照化合物在“Y”形嗅覺儀工作狀態中完全揮發需要的時間。測試中，根據味源物或對照完全揮發的時間，結合試驗測試進度，觀察毛細管中是否含有味源物或對照化合物，假如沒有或不夠1次測試的量，及時更換味源物或對照，保證測試中的成蟲感受到穩定的味源物或對照化合物[15]。選擇率（%）=選擇臂蟲口數/總頭數×100，校正行為反應率（%）=（處理臂蟲口數-對照臂蟲口數）/總頭數×100。若值為正，則為誘集率；若值為負，則為驅避率；若值為0，則表示無選擇[26]。

1.3 數據處理

試驗所有數據均采用DPS數據處理系統進行分析。首先，對柑橘大實蠅雌、雄成蟲對板栗揮發物的選擇行為反應數量進行百分率轉換；其次，再將其轉換的百分率值進行反正弦平方根轉換；最后，采用χ2分析法檢驗柑橘大實蠅雌、雄成蟲對板栗揮發物的選擇行為反應值的趨性選擇是否符合假設H0為50∶50的理論分布。在相同日齡和相同性別的柑橘大實蠅成蟲對相同濃度的14種板栗揮發物之間以及柑橘大實蠅成蟲對不同濃度的單一板栗揮發物之間的EAG反應相對值差異性，采用單因子方差分析，其平均值差異采用Tukey法比較。在不同性別之間和不同日齡之間的柑橘大實蠅成蟲對單一板栗揮發物的EAG反應相對值的差異性比較，采用配對兩處理t檢驗。

2 結果與分析

2.1 柑橘大實蠅成蟲對板栗揮發物的EAG反應

2.1.1 相同日齡、性別柑橘大實蠅成蟲對14種不同濃度板栗揮發物的EAG反應。由圖1和圖2可知，相同日齡、相同性別的柑橘大實蠅成蟲對相同濃度的14種板栗揮發物EAG反應相對值均存在極顯著差異性（P＜0.01）。

2.1.2 不同日齡、性別柑橘大實蠅成蟲對14種板栗揮發物EAG反應。由圖3可知，在1日齡和3日齡的柑橘大實蠅成蟲之間比較，其成蟲對異丁醛EAG反應相對值存在顯著差異（P＜0.05）。其中，除了3日齡柑橘大實蠅雌成蟲對5.0 μg/μL異丁醛的EAG反應相對值極顯著高于1日齡雌成蟲、3日齡柑橘大實蠅雄成蟲對1.0 μg/μL異丁醛的EAG反應相對值極顯著高于1日齡雄成蟲以外，其余日齡的柑橘大實蠅雌、雄蟲對其余濃度的異丁醛的EAG反應相對值差異性均不明顯（P＜0.05）。除異丁醛之外，成蟲對其余化合物如檸檬烯、α-蒎烯、苯乙酸甲酯、戊醛、乙偶姻、乙酸芐酯、芳樟醇、β-石竹烯、苯乙醛、乙酸芳樟酯、壬醛、水楊酸甲酯和順-3-己烯-1-醇的EAG反應相對值差異均不明顯（P＞0.05）。

由圖4可知，在柑橘大實蠅雌、雄蟲之間比較，其成蟲對檸檬烯、α-蒎烯、苯乙酸甲酯、戊醛、乙偶姻、異丁醛、乙酸芐酯、芳樟醇、β-石竹烯、苯乙醛、乙酸芳樟酯、壬醛、水楊酸甲酯和順-3-己烯-1-醇的EAG反應相對值差異均不明顯（P＞0.05）。

由表1可知，在4種濃度之間比較，柑橘大實蠅成蟲對4種濃度的檸檬烯EAG反應相對值存在顯著差異（P＜0.05）。除成蟲對 1.0 μg/μL 檸檬烯的 EAG反應相對值顯著高于10.0 μg/μL檸檬烯以外，成蟲對其余濃度之間的檸檬烯EAG反應相對值差異不明顯。除檸檬烯以外，成蟲對4種濃度α-蒎烯、苯乙酸甲酯、戊醛、乙偶姻、異丁醛、乙酸芐酯、芳樟醇、β-石竹烯、苯乙醛、乙酸芳樟酯、壬醛、水楊酸甲酯和順-3-己烯-1-醇的EAG反應相對值差異均不明顯（P＞0.05）。

表1 柑橘大實蠅成蟲對不同濃度揮發物的EAG反應相對值

2.2 柑橘大實蠅成蟲對板栗揮發物的行為反應

由表2可知，在14種板栗揮發物中，7種板栗揮發物對柑橘大實蠅成蟲表現出顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）的引誘作用。1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對 0.5、1.0、5.0、10.0 μg/μL 檸檬烯，1 日齡和 3 日齡的雌、雄成蟲對 1.0、5.0 μg/μL α-蒎烯，3 日齡的雄成蟲對 0.5、10.0 μg/μL α-蒎烯，1 日齡的雌、雄成蟲對 10.0 μg/μL α-蒎烯，3 日齡的雄成蟲對 0.5、1.0、5.0μg/μL苯乙酸甲酯，1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對 1.0、5.0、10.0μg/μL 異丁醛，3 日齡的雌成蟲對 5.0、10.0 μg/μL 芳樟醇，3 日齡的雌、雄成蟲對 5.0 μg/μL β-石竹烯，1 日齡的雄成蟲對 1.0 μg/μL 苯乙醛，3 日齡的雌、雄成蟲對1.0 μg/μL苯乙醛，1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對5.0 μg/μL苯乙醛均表現出顯著或極顯著的引誘反應。

表2 柑橘大實蠅成蟲對不同濃度的板栗揮發性物質的校正行為反應率

有4種化合物對柑橘大實蠅成蟲表現出顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）的驅避作用。 3 日齡的雌成蟲對 5.0 μg/μL 戊醛，1 日齡雄成蟲對 10.0 μg/μL戊醛，1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對0.5、1.0、5.0、10.0 μg/μL 乙偶姻，1 日齡的雌成蟲對 5.0 μg/μL 乙酸芳樟酯，3日齡的雌成蟲對1.0 μg/μL乙酸芳樟酯，1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對5.0 μg/μL水楊酸甲酯，1日齡雌成蟲和3日齡雄成蟲對10.0 μg/μL水楊酸甲酯均表現出顯著或極顯著的驅避反應。壬醛對柑橘大實蠅雌成蟲具有極顯著的驅避作用、對雄蟲具有極顯著的引誘作用（表2）。1日齡雌蟲對4 種濃度的壬醛，3 日齡雌蟲對 1.0、5.0、10.0 μg/μL壬醛表現出極顯著的驅避反應；1日齡雄蟲對5.0、10.0 μg/μL 壬醛以及 3 日齡雄蟲對 1.0 μg/μL 壬醛均表現出顯著或極顯著的引誘反應。柑橘大實蠅成蟲對2種化合物無反應（表2）。1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對4種濃度的乙酸芐酯或順-3-己烯-1-醇均無反應，即既無引誘反應，也無驅避反應。

3 結論與討論

植物揮發性物質在植食性昆蟲定向、趨性、選擇和取食寄主植物的過程中扮演著重要的作用[27-28]。初羽化的柑橘大實蠅成蟲對14種板栗揮發物嗅覺反應行為存在明顯差異。檸檬烯、α-蒎烯、苯乙酸甲酯、異丁醛、芳樟醇、β-石竹烯和苯乙醛對初羽化的成蟲具有顯著或極顯著的引誘作用。由此可初步推斷，這7種化合物在初羽化成蟲定位板栗雄花花序的過程中起了一定作用。戊醛、乙偶姻、乙酸芳樟酯和水楊酸甲酯對初羽化的成蟲表現出顯著或極顯著的驅避作用；壬醛對柑橘大實蠅雌成蟲有極顯著的驅避作用，對雄蟲具有極顯著的引誘作用；乙酸芐酯和順-3-己烯-1-醇對初羽化成蟲無反應。杜田華等[15]研究結果表明，在7種化合物中，4種板栗揮發物對柑橘大實蠅成蟲表現出顯著或極顯著的引誘作用。其中，除了1日齡和3日齡的柑橘大實蠅雌、雄成蟲對 10、1 μg/μL 檸檬烯，1 日齡和 3 日齡的雌、雄成蟲對 10、1 μg/μL 異丁 醛 ，1 日 齡 和 3 日 齡 的 雌 、雄成蟲對 1 μg/μL α-蒎烯，1 日齡的雌、 雄成蟲對10 μg/μL α-蒎烯，3 日齡的雄成蟲對 10 μg/μL α-蒎烯，3日齡的雌成蟲對 10 μg/μL苯乙酸甲酯，3日齡雄成蟲對1 μg/μL苯乙酸甲酯表現出顯著或極顯著的引誘反應外，其他日齡的雌、雄成蟲對其余濃度的這4種化合物引誘反應不明顯。2種板栗揮發物對柑橘大實蠅成蟲表現出顯著或極顯著的驅避作用。其中，除 1日齡和3日齡的雌、雄成蟲對10、1 μg/μL乙偶姻，1日齡的雄成蟲對10 μg/μL戊醛均表現出顯著或極顯著的驅避反應外，其他日齡的雌、雄成蟲對其余濃度的這2種化合物反應不明顯。這與本研究對14種化合物嗅覺反應行為結果類似。Liu等[29]利用“Y”形嗅覺儀和GC-MS技術對產卵期柑橘大實蠅雌蟲偏好的3種寄主植物[冰糖橘（Citrus sinensis cv.Bingtang）、無核小蜜橘（Citrus reticulata cv.Satsuma）和酸橙（Citrus aurantium）]揮發物組成成分分析，結果發現，寄主植物揮發物中的壬醛、檸檬油精和芳樟醇對產卵期柑橘大實蠅雌蟲具有顯著的吸引作用。Liu等[30]進一步研究表明，在爪蟾卵母細胞中表達的BminOR24/BminOrco對芳樟醇反應顯著。這些結果也與本研究結果類似。

相同日齡、相同性別的初羽化柑橘大實蠅成蟲對相同濃度的14種板栗揮發物的EAG反應相對值均存在極顯著差異。這一結果與張國娜[31]研究柑橘小實蠅（Bactrocera dorsalis）成蟲對16種化合物的EAG反應相對值存在極顯著差異的結果類似，也與宮慶濤[8]研究柑橘大實蠅成蟲對10種化合物的EAG反應相對值有顯著差異的結果類似。初羽化柑橘大實蠅雌蟲對濃度為5.0 μg/μL異丁醛的EAG反應相對值在1日齡和3日齡之間存在極顯著差異。這一結果與向玉勇等[32]研究小地老虎（Agrotis ypsilon）雄蛾在羽化后第1天對性信息素各單一組分和混合物的EAG反應值很低、第3天達到最高峰的結果類似。初羽化柑橘大實蠅雄蟲對不同濃度之間的檸檬烯EAG反應相對值存在顯著差異，此結果與宮慶濤研究柑橘大實蠅成蟲對乙酸和水解蛋的EAG反應相對值與濃度相關的結果類似。初羽化雌、雄成蟲之間對14種板栗揮發物的EAG反應相對值不存在顯著差異，此結果與董文霞等[33]研究中紅側溝繭蜂（Microplitis mediator）雌、雄成蟲之間對6種棉花揮發物EAG反應相對值的結果一致，也與宮慶濤[8]研究柑橘大實蠅雌、雄成蟲間對乙酸、水解蛋白、甜橙汁、橘皮粉和檸檬酸的EAG反應值無明顯差異的結果一致。

柑橘大實蠅成蟲對板栗揮發物的EAG反應結果并沒有完全與嗅覺行為反應結果一致。例如，3日齡的雌、雄蟲之間對 0.5 μg/μL α-蒎烯的 EAG 反應相對值差異不明顯，但是當α-蒎烯濃度為0.5 μg/μL時，對3日齡的雄蟲具有引誘作用，對3日齡的雌蟲無引誘反應。3日齡的雄蟲對1.0 μg/μL檸檬烯的EAG反應相對值顯著地高于10.0 μg/μL檸檬烯，但是當 α-蒎烯濃度為 1.0、10.0 μg/μL 時，對 3 日齡雄蟲均具有引誘作用。王茹琳等[34]測定的7種萜烯類化合物為華山松揮發物主要組分，在特定劑量下均引能起華山松大小蠹明顯的EAG反應，但采用“Y”形嗅覺儀測定的化合物中只有3種表現出較強的引誘作用，可能有以下2個原因：一是昆蟲在自然界中感覺到的是混合物，分別測試單個化合物與混合物有可能會有不同的反應；二是不同化合物起的作用不同，有的起主要作用，有的只發揮次要或增效作用。此外，本研究結果與杜俊靈[35]研究7種揮發物對橘小實蠅成蟲的引誘力及EAG活性的結果類似，這可能與昆蟲化學感受器分布有關。昆蟲化學感受器是昆蟲的重要結構之一，主要分布在昆蟲觸角上，其次是分布在跗節、口器和產卵器上[31，36-37]。EAG技術測定部位僅是觸角上的化學感覺器，觸角與觸角葉、大腦聯合表征嗅知覺，EAG值可以準確反映刺激物理量的大小，但感覺量與知覺量是復雜的非線性關系?！癥”形嗅覺儀測定整只昆蟲的全部感覺器，主要涉及化學感覺器。Gregg等[38]甚至認為觸角電位技術不能為棉鈴蟲引誘劑篩選帶來任何幫助?？陀^地講，有觸角電生理活性的物質不一定有嗅覺行為活性，沒有觸角電生理活性的物質具有嗅覺行為活性的可能性更加微乎其微，因而該技術對于縮小行為待測物質的范圍有一定輔助作用[39]。

柑橘大實蠅成蟲對揮發性物質的嗅覺活性和EAG活性存在日齡效應。例如，當β-石竹烯濃度為5.0 μg/μL時，其對3日齡柑橘大實蠅雌、雄蟲表現出極顯著的引誘作用，對1日齡柑橘大實蠅雌、雄蟲無反應。1日齡和3日齡柑橘大實蠅雌蟲對5.0 μg/μL異丁醛的EAG反應相對值存在極顯著差異?？赡苡善湫嵊X或其他器官的發育狀態不同所致[31，40]。

柑橘大實蠅成蟲對揮發性物質的嗅覺活性和EAG活性存在劑量效應。1日齡雌、雄成蟲對1.0μg/μL檸檬烯的EAG反應相對值顯著地高于10.0 μg/μL檸檬烯的 EAG 反應相對值，對 0.5、5.0 μg/μL 檸檬烯的EAG 反應相對值介于 1.0、10.0 μg/μL 之間，其EAG活性與劑量呈非線性相關，但這種劑量非線性相關性作用機理并不清楚。3日齡雄蟲對1.0 μg/μL壬醛表現出極顯著的引誘作用，對5.0 μg/μL壬醛無反應。宋蘊哲[41]研究表明，煙蚜繭蜂（Aphidius gifuensis）對不同濃度的同種化合物表現出不同的行為反應結果，與本研究結果類似。

柑橘大實蠅成蟲對揮發物的嗅覺活性存在性別效應。例如，當芳樟醇濃度為5.0 μg/μL時，其對3日齡雌成蟲表現出引誘作用，對雄成蟲卻沒有引誘作用，與涂蓉等[42]研究橘小實蠅對不同水果及揮發性化合物行為反應的研究結果一致。初羽化柑橘大實蠅成蟲對壬醛的嗅覺行為反應中，雌蟲表現出極顯著的驅避作用，雄性表現出引誘作用。這種性別上的選擇差異可能與柑橘大實蠅雌、雄成蟲各自具備獨特的嗅覺感受和分辨能力有關[43]，如雌蟲產卵器的感知能力，也可能與柑橘大實蠅雌、雄成蟲嗅覺感受器中相關嗅覺蛋白與殺蟲劑中揮發物活性成分的結合能力有關[44]。其作用機理有待于進一步研究。

通過研究相關的14種板栗揮發性化合物對初羽化柑橘大實蠅成蟲的觸角電位和嗅覺行為反應，結果表明：板栗揮發物中的檸檬烯、α-蒎烯、苯乙酸甲酯、異丁醛、芳樟醇、β-石竹烯、苯乙醛對初羽化的柑橘大實蠅成蟲具有引誘作用；戊醛、乙偶姻、乙酸芳樟酯和水楊酸甲酯對成蟲表現出顯著或極顯著的驅避作用；壬醛對雌成蟲具有極顯著的驅避作用，對雄成蟲具有極顯著的引誘作用。本研究結果可為柑橘大實蠅成蟲植物源引誘劑的開發和應用提供參考。同時，結果也表明，在選擇揮發性化合物時，EAG反應的結果可以作為參考，但最后的揮發性化合物引誘行為效果要根據行為反應測定結果判斷。

4 致謝

感謝河南農業大學植物保護學院閆鳳鳴教授對本文初稿評閱和提出指導建議。