慢性粒細胞白血病患者血液指標檢查與人類白細胞抗原基因的相關性

李露

白血病為臨床上常見的血液病之一,主要是患者自身造血功能遭到嚴重破壞,從而造成血液系統出現障礙［1,2］。人類慢性粒細胞白血病(chronicmyeloid leukemia,CML)是源自造血干細胞的惡性血液腫瘤,其發病過程為造血干細胞發生染色體易位,使得酪氨酸激酶產物異?；罨?并浸潤其他組織和器官,從而抑制正常血細胞的生長和分化［3］。隨著醫學技術的提高,藥物聯合治療慢性粒細胞白血病已顯著延長了患者的生存時間,但是很多患者治療后容易復發,且治療費用居高不下,為此在臨床上需要攻克與發展新的治療與診斷方法［4］。形態學檢查作為慢性粒細胞白血病基礎診斷的重要方式之一,特別是血液各指標檢查作為白血病分析診斷的基礎,具有應用方便、快速等特點,但是診斷的特異性有待提高［5］。人類白細胞抗原(human leukocyte alleles,HLA)是人體內能引起強排斥反應的主要組織相容性抗原系統,也是人類基因組中多態性程度最高的一個遺傳系統,在不同種族、不同地區均表現出分布差異,也具有連鎖不平衡和單倍型遺傳的顯著遺傳特征［6,7］。本文具體探討了慢性粒細胞白血病患者血液指標與HLA 基因的相關性,希望能為早期動態監測患者病情變化提供參考?，F總結報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016 年1 月～2020 年8 月在本院診治的慢性粒細胞白血病患者64 例作為白血病組,另選擇同期在本院體檢的健康人群64 例作為對照組。白血病組中,男38 例,女26 例；年齡最小6 歲,最大71 歲,平均年齡(25.22±15.26)歲；平均體質量指數(21.01±1.77)kg/m2；平均病程(2.17±0.22)個月；臨床表現：頭暈45 例,乏力52 例,納差41 例,腹痛35 例,腹部包塊32 例,發熱22 例,淋巴結腫大5 例,聽力下降3 例,骨關節痛8 例,盜汗19 例。對照組中,男39 例,女25 例；年齡最小6 歲,最大75 歲,平均年齡(26.15±16.29)歲；平均體質量指數(22.18±1.78)kg/m2。兩組的性別、年齡、體質量指數等一般資料對比,差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。納入標準：初治患者；白血病組患者都符合慢性粒細胞白血病的診斷標準；年齡6～75 歲；漢族；居住在本地區≥3 年；患者或患者家屬同意簽署知情同意書；醫院倫理委員會批準了此次研究；無合并其他部位惡性腫瘤。排除標準：懷孕或哺乳期婦女；合并先天性心肝腎異常者；檢測前接受異基因造血干細胞移植術的患者。

1.2 方法 HLA 基因檢測：在無菌狀態下取兩組研究對象外周靜脈血2～3 ml,抗凝后,提取單個核細胞,BS 洗滌,1450 r/min 離心10 min,棄上清液,重懸細胞,提取總RNA,逆轉錄為cDNA,采用聚合酶鏈式反應(PCR)方法檢測HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 基因型與表達情況。

1.3 觀察指標 分析兩組HLA-A、HLA-B、HLADRB1 等位基因分布情況。對比兩組HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 等位基因突變率,WBC、RBC、PLT 異常率,紅細胞參數(MCV、MCH、MCHC、RDW)。并分析HLA 等位基因突變率與各指標的相關性,以及慢性粒細胞白血病發生的影響因素。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0 統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗；相關性檢驗采用Pearson(計量)及Spearman(計數)相關分析；影響因素分析采用Logistic 回歸分析。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 等位基因分布情況 兩組共檢出13 個HLA-A 基因、22 個HLA-B 基因和11 個HLA-DRB1 基因,呈現較高的基因多態性。

2.2 兩組HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 等位基因突變率對比 白血病組的HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1等位基因突變率分別為12.5%、18.8%和10.9%,高于對照組的1.6%、4.7%和0,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 等位基因突變率對比［n(%)］

2.3 兩組WBC、RBC、PLT 異常率對比 白血病組的WBC、RBC、PLT 異常率分別為96.9%(62/64)、53.1%(34/64)和70.3%(45/64),高于對照組的1.6%(1/64)、3.1%(2/64)、1.6%(1/64),差異具有統計學意義 (P＜0.05)。

2.4 兩組紅細胞參數對比 白血病組的MCH、MCHC低于對照組,RDW、MCV 高于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組紅細胞參數對比 ()

表2 兩組紅細胞參數對比 ()

注：與對照組對比,aP＜0.05

2.5 相關性分析 白血病組患者相關性分析顯示,HLA 等位基因突變率與WBC、RBC、PLT 異常率和RDW 呈正相關,與MCHC 呈負相關(P＜0.05)。見表3。

表3 白血病組患者血液各指標與HLA 基因突變率的相關性

2.6 影響因素分析 Logistic 回歸分析顯示,HLA 等位基因突變率與WBC、RBC、PLT 異常率和RDW 呈正相關,與MCHC 呈負相關(P＜0.05)。見表4。

表4 影響慢性粒細胞白血病發生的多因素分析

3 討論

慢性粒細胞白血病是一種以髓系增生為主的造血干細胞惡性腫瘤,BCR-ABL 融合基因是該病發生的分子生物學基礎,費城染色體形成是其標志性的細胞遺傳學特征［8］。慢性粒細胞白血病多發生于男性,從機制上分析,慢性粒細胞白血病患者會多伴隨白細胞升高,診斷時白細胞通常＞25×109/L,50%左右的患者白細胞高達100×109/L。50%的患者血小板在診斷時升高,部分可＞1000×109/L［9］。紅細胞及血紅蛋白在患者早期診斷時可正常,隨著疾病進展逐漸下降。MCV、MCH、MCHC、RDW 可反映機體紅細胞大小和血紅蛋白的改變,通常用于貧血類型的診斷［10］。本研究顯示白血病組的MCH、MCHC 低于對照組,RDW、MCV高于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。其中RDW反映了外周血紅細胞體積異質癥,是利用血細胞自動分析儀對紅細胞體積進行測量與處理獲得的參數。高RDW 水平表明機體免疫功能受損,伴隨有全身炎癥狀態、氧化應激,可導致機體出現腫瘤、營養缺乏和骨髓功能障礙等疾病。MCH、MCHC的低表達可導致核酸、蛋白質和脂質的氧化損傷,降低了紅細胞的壽命,使外周血紅細胞體積異質性增加,從而導致RDW、MCV增加。

隨著分子生物學實驗技術的進展,80%～90%的慢性粒細胞白血病患者有克隆染色體異常,也伴隨有多基因多態性［11］。HLA 是位于人第六號染色體短臂上的一群高度多態性的緊密連鎖基因群,HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 是等位基因最多的3 個HLA 基因座,與機體的自身免疫密切相關［12］。HLA 基因組的多態性主要在外顯子2 和3,可導致核苷酸出現沉默置換或同義突變,不引起氨基酸種類的改變,減少了HLA 蛋白水平的多態性［13］。本研究顯示兩組128 例入選者中檢出13 個HLA-A 基因、22 個HLA-B 基因和11 個HLA-DRB1 基因,呈現較高的基因多態性；白血病組的HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1 等位基因突變率分別為12.5%、18.8%和10.9%,高于對照組的1.6%、4.7%和0,差異有統計學意義(P＜0.05)。從機制上分析,HLA 突變可以誘導特異性細胞毒T 細胞產生,導致機體出現腫瘤免疫逃逸狀況,從而誘發白血?。?4］。

慢性粒細胞白血病患者的血細胞不僅有量的變化,同時也存在形態學的變化,觀察其變化規律有助于慢性粒細胞白血病的診斷及預后判斷。本研究相關性分析顯示,慢性粒細胞白血病患者的HLA 等位基因突變率與WBC、RBC、PLT 異常率和RDW 呈正相關,與MCHC 呈負相關(P＜0.05)；Logistic 回歸分析顯示,HLA 等位基因突變率、RDW 及WBC、PLT 異常率為導致慢性粒細胞白血病發生的影響因素(P＜0.05)。從機制上分析HLA 基因作為一種遺傳標記,表達于人體幾乎所有有核細胞表面,并與T 細胞受體分子、免疫細胞表達的免疫球蛋白同參與免疫識別和免疫應答。HLA 等位基因突變可以抑制HLA 表達產物和抑制性受體直接結合,加重外周血自然殺傷細胞(NK)的細胞毒作用,從而誘發機體惡性腫瘤的發生［15］。本研究也存在一定的不足,納入的患樣本量比較少,沒有進行HLA 多個位點的分析,且形態學分析指標比較少,將在后續研究中進行探討。

總之,慢性粒細胞白血病的發病機制是多因素、復雜的,HLA 作為人體最復雜的抗原系統,慢性粒細胞白血病多伴有血液檢查異常與HLA 等位基因突變,兩者存在相關性。