氣相色譜法檢測頭孢呋辛鈉原料藥中2-乙基己酸殘留量

惠建軍，雍志林，王 策，師寶峰，彭 燕，林妮妮，董 穎

(北京新領先醫藥科技發展有限公司，北京 100094)

β內酰胺類藥物成鹽過程中，2-乙基己酸鈉作為鈉離子提供體被廣泛應用。反應過程中2-乙基己酸鈉轉化成2-乙基己酸[1]。2-乙基己酸危害人體健康，尤其是對皮膚、黏膜具有刺激性作用。頭孢呋辛為第二代廣譜半合成頭孢菌素[2]，因其對葡萄球菌和革蘭陰性桿菌產生的β-內酰胺酶穩定，產生良好的抗菌作用，對頭孢噻吩和頭孢噻啶敏感的全部菌株幾乎都有較強的抗菌作用，且對廣泛的革蘭陰性桿菌包括腸桿菌、吲哚陽性變形桿菌均有效。頭孢呋辛鈉療效確切，腎臟毒性低，毒副作用小，臨床廣泛應用于氣管炎[3-4]、肺炎[5-6]、女性生殖系統感染[7]等的治療。頭孢呋辛鈉屬于β-內酰胺類藥物，成鹽過程中存在引入2-乙基己酸的風險，其殘留量影響頭孢呋辛鈉的質量，因此控制原料藥中2-乙基己酸殘留量檢測至關重要。文獻報道的2-乙基己酸檢測方法有氣相色譜法[1,7-10]、離子色譜法[11]等。《中國藥典》2020版[12]四部通則中采用氣相色譜檢測β-內酰胺類藥物中的2-乙基己酸含量，以此為依據，優化樣品前處理方法的基礎上，建立了氣相色譜法檢測頭孢呋辛鈉中2-乙基己酸殘留量，方法操作簡單，靈敏度高、準確性好，可應用于不同廠家生產的頭孢呋辛鈉原料藥中2-乙基己酸的檢測。

1 儀器與試藥

頭孢呋辛鈉原料藥(批號：A001、B001、B002)；2-乙基己酸(批號：GA190065、廠家：安耐吉[薩恩化學技術(上海)有限公司、純度：99%])；3-環己基丙酸[批號：GA200167、廠家：薩恩化學技術(上海)有限公司、純度：98%]；環己烷(批號：20200925、廠家：天津市富宇精細化工有限公司、級別：AR)；鹽酸(批號：20200106、廠家：國藥集團化學試劑有限公司、級別：AR)；超純水(批號：20201121H、廠家：屈臣氏集團)。

氣相色譜儀(美國安捷倫：8890；日本島津：GC-2010Pro)；電子天平(賽多利斯十萬分之一天平)；離心機(上海安亭科學儀器廠)；毛細管色譜柱(安捷倫：DB-FFAP 30m×0.32mm，1.0μm)；毛細管色譜柱(KB-Wax 30m×0.32mm，1.0μm)。

2 實驗方法與結果

2.1 溶液的制備

內標溶液：精密稱取3-環己基丙酸適量，用環己烷溶解并稀釋制成每毫升環己烷含1mg的3-環己基丙酸的溶液。

鹽酸溶液：精密量取鹽酸適量，用超純水溶解并稀釋制成5%的鹽酸溶液。

對照品儲備液：精密稱取2-乙基己酸適量，用內標溶液溶解并稀釋制成每毫升含15mg的2-乙基己酸的溶液。

對照品溶液：將對照品儲備液稀釋10倍后，精密量取1mL，置含有4mL鹽酸溶液的離心管中，搖勻，6000r/min離心7min，離心后取上層清液。

供試品溶液：取本品約300mg，精密稱定，置含有4mL鹽酸溶液的離心管中，渦旋2min后精密加入內標溶液1mL，搖勻，6000r/min離心7min，離心后取上層清液。

新時代的礦業發展模式應當是，不僅能為當代人提供物質資源，還不影響當代人與后人的生存環境和資源需要，科技含量高、資源消耗低、環境污染少的可持續發展模式。

2.2 色譜條件

升溫程序：起始柱溫150℃，維持5min，以20℃/min升溫至220℃，維持5min；

進樣口溫度為200℃；檢測器溫度(FID)為300℃；分流比為10∶1；進樣量為1μL；載氣為氮氣，流速為5mL/min。

2.3 線性范圍及靈敏度

精密量取對照品儲備液0.4、0.6、0.8、1.0和2.0mL，分別置10mL量瓶中，用內標溶液稀釋至刻度，搖勻，得到5個濃度的系列溶液，按2.1 項下“對照品溶液”方法處理，分別精密量取1μL按氣相條件進行分析，記錄色譜圖。以2-乙基己酸濃度為橫坐標，以2-乙基己酸與3-環己基丙酸峰面積比值為縱坐標，進行線性回歸，得到回歸方程為Y=0.0009X+0.0133，r=0.9998。即2-乙基己酸在0.00152～3.04580mg/mL濃度范圍內，線性關系良好。

按照制備對照品溶液的方法，配制溶液。逐級稀釋，精密量取1μL按氣相條件進行分析，當信噪比為5.4時，得到2-乙基己酸的檢測限為0.46μg/mL。當信噪比為24.2時，得到2-乙基己酸的定量限為1.52μg/mL。

2.4 回收率與重復性研究

取頭孢呋辛鈉原料藥300mg，精密稱定，平分為12份，每組3份，每組精密加入2-乙基己酸濃度分別為0.75mg/mL、1.50mg/mL、2.25mg/mL的溶液，按2.1項下“供試品溶液”方法處理，精密量取各溶液1μL按氣相條件進行分析，測定峰面積，結果如表1所示，回收率介于89.36%～100.81%之間，平均加樣回收率為93.18%，RSD為4.55%，中濃度6份溶液重復性的RSD為4.17%(表2)。由結果可知，本法準確度較高，重復性好。

表1 加樣回收率結果

表2 重復性結果

2.5 進樣精密度研究

精密量取對照品儲備液適量，用內標溶液溶解并稀釋制成每毫升含1.5mg的2-乙基己酸的溶液，按2.1項下“對照品溶液”方法處理，精密量取1μL按氣相條件進行分析，連續進樣6次，測定2-乙基己酸與3-環己基丙酸峰面積比值RSD值為3.01%，保留時間RSD值為0.04%，精密度良好。

2.6 樣品測定

測定不同批號的頭孢呋辛鈉原料藥，測定結果見表3。

表3 樣品檢測結果

3 討論

3.1 鹽酸用量考察

按藥典方法下，采用33%鹽酸配制溶液并離心后，取上清液，平行處理6份樣品，分別注入色譜儀，其內標物(3-環己基丙酸)峰面積呈增大趨勢，導致回收率逐漸下降，由142.2%降至133.5%；同時平均回收率不符合要求，如表4所示。降低鹽酸濃度至5%，對樣品按2.1項下“供試品溶液”方法處理，無上述現象，如表5所示。

表4 33%鹽酸處理后檢測結果

表5 5%鹽酸濃度處理后檢測結果

按照頭孢呋辛鈉結構式，其應與鹽酸按1∶2反應，藥典中采用33%鹽酸處理樣品，此時頭孢呋辛鈉∶鹽酸為1∶12，鹽酸過量，我們降低比例至1∶3.6時，回收率結果較高濃度鹽酸時好，推測可能的原因是鹽酸濃度較高時，影響3-環己基丙酸在兩相中的分配系數，使其分散不均勻所致。

3.2 方法優化

采用不同廠牌(DB-FFAP 和KB-Wax)的同類型色譜柱，其他條件不變時，2-乙基己酸與3-環己基丙酸的理論塔板數均大于5000、拖尾因子均小于2.0、分離度大于1.5，且峰形良好，說明本法在此條件下耐用性良好；

采用不同廠牌(美國安捷倫及日本島津)的氣相色譜儀，其他條件不變時，2-乙基己酸與3-環己基丙酸的理論塔板數均大于5000、拖尾因子均小于2.0、分離度大于1.5，且峰形良好，說明本法在此條件下耐用性良好；

綜上，建立的方法操作簡單、靈敏度高、專屬性好，可以準確檢測頭孢呋辛鈉原料藥中2-乙基己酸含量。前處理方法降低了鹽酸濃度，可以更好的保護毛細管色譜柱，且降低了分析成本。