糞便自動(dòng)化分析儀及室內(nèi)質(zhì)控品的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)*

修夢(mèng)凡，劉 海，劉 婷，于 凡，繆 泉

四川大學(xué)華西第二醫(yī)院檢驗(yàn)科/出生缺陷與相關(guān)婦兒疾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川成都 610041

世界衛(wèi)生組織開(kāi)展的全球疾病負(fù)擔(dān)研究結(jié)果顯示，2015年腹瀉相關(guān)疾病是5歲以下兒童第4大死亡原因，即便是在這些疾病中幸存下來(lái)，但遭受過(guò)反復(fù)感染的患者在未來(lái)也會(huì)有更嚴(yán)重的情況出現(xiàn)[1]。而糞便檢查作為臨床“三大常規(guī)”檢查項(xiàng)目之一，它為臨床提供了最直接、有效的生理參數(shù)，對(duì)消化道疾病[2]和寄生蟲(chóng)病[3]等的鑒別診斷及療效監(jiān)控都有著重要的作用。目前，糞便常規(guī)檢測(cè)大多為人工鏡檢，但因其操作煩瑣、辨認(rèn)主觀、難以標(biāo)準(zhǔn)化、氣味難聞及檢出效率低下，在大多數(shù)情況下，已被糞便自動(dòng)化分析儀取代。為了保證糞便自動(dòng)化分析儀檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，必須將其與作為金標(biāo)準(zhǔn)的人工鏡檢結(jié)果進(jìn)行比較、分析后方可投入使用。本實(shí)驗(yàn)選擇目前市面上較為主流的LTS-E100和FA160這兩種型號(hào)糞便自動(dòng)化分析儀，對(duì)其對(duì)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球及似酵母樣菌的檢出能力進(jìn)行評(píng)估，從而評(píng)價(jià)兩種儀器的臨床應(yīng)用價(jià)值。除此以外，商品化的室內(nèi)質(zhì)控品缺乏也是儀器法難以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化認(rèn)可的一大缺陷，因此，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)目前市面上少有的FA160配套商用室內(nèi)質(zhì)控品的通用性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，以評(píng)估其推廣價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2019年6—10月門(mén)診患者糞便標(biāo)本共計(jì)1 250份，其中來(lái)自男性患者637份，女性患者613份，患者年齡10 d至65歲，平均(2.3±1.1)歲。糞便標(biāo)本采用自然排出的新鮮糞便，要求患者用干凈竹簽挑取約5 g膿血、黏液等病變成分置于潔凈、帶蓋的容器內(nèi)。對(duì)外觀無(wú)異常的糞便則從標(biāo)本表面或內(nèi)部取材，不可從吸水性物體表面取材，也不得混有尿液、植物、泥土、污水等物質(zhì)，以免有形成分被吸收、破壞或污染。

1.2儀器與試劑 LTS-E100(湖南麗拓生物科技有限公司)、FA160(四川沃文特生物技術(shù)有限公司)兩種型號(hào)糞便自動(dòng)化分析儀及配套的原裝試劑及耗材；FA160配套糞便形態(tài)學(xué)質(zhì)控品(四川沃文特生物技術(shù)有限公司)；NIKON Ci-S顯微鏡；0.9%氯化鈉溶液。

1.3方法 應(yīng)用LTS-E100、FA160兩種糞便自動(dòng)化分析儀和人工鏡檢法分別對(duì)所有收集到的新鮮糞便標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，兩種糞便自動(dòng)化分析儀的具體操作嚴(yán)格按照其相應(yīng)的廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，儀器將標(biāo)本稀釋后沖池、涂片并拍照，繼而對(duì)其中的有形成分進(jìn)行自動(dòng)識(shí)別和分類(lèi)。對(duì)于儀器的判別結(jié)果不再加以人工復(fù)核，視其為儀器檢測(cè)結(jié)果。再將人工鏡檢結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析LTS-E100、FA160糞便自動(dòng)化分析儀對(duì)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球及似酵母樣菌的檢出能力。人工鏡檢法嚴(yán)格參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)[4]要求操作，在潔凈玻片上滴加等滲鹽水1～2滴，選擇糞便的異常部分或挑取不同部位的糞便直接進(jìn)行涂片檢查，涂片制作后應(yīng)覆蓋玻片，其厚度以能透過(guò)印刷字跡為宜。所有標(biāo)本的各種檢測(cè)方法都必須在1 h內(nèi)完成，報(bào)告方式以相應(yīng)有形成分未檢出(陰性)和檢出(陽(yáng)性)表示，統(tǒng)計(jì)儀器法和人工鏡檢法對(duì)于各種有形成分的檢出陰、陽(yáng)性符合情況。另外，應(yīng)用兩種型號(hào)儀器對(duì)FA160配套的糞便形態(tài)學(xué)質(zhì)控品分別進(jìn)行20次室內(nèi)質(zhì)控分析，觀察各項(xiàng)指標(biāo)的符合率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理與統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kappa系數(shù)判斷兩種方法的一致性。Kappa系數(shù)取值在-1～1，當(dāng)Kappa系數(shù)<0為一致性極差，0.0～0.2為差，>0.2～0.4為較差，>0.4～0.6為一致性稍差，>0.6～0.8為好，>0.8～1.0為極好[5-6]。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1LTS-E100的糞便常規(guī)檢測(cè) LTS-E100與人工鏡檢法檢測(cè)糞便常規(guī)標(biāo)本的結(jié)果分別見(jiàn)表1～4。以人工鏡檢法作為金標(biāo)準(zhǔn)，LTS-E100檢測(cè)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球和似酵母樣菌的靈敏度分別為85.0%、79.6%、86.2%、71.1%；特異度分別為98.6%、97.5%、90.6%、99.7%；假陽(yáng)性率分別為8.33%、8.03%、4.31%、8.89%；假陰性率分別為2.5%、6.4%、1.4%、1.1%；符合率分別為96.6%、97.0%、98.3%、98.6%；Kappa系數(shù)分別為0.859、0.805、0.896、0.783。

表1 LTS-E100與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中紅細(xì)胞的結(jié)果(n)

表2 LTS-E100與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中白細(xì)胞的結(jié)果(n)

表3 LTS-E100與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中脂肪球的結(jié)果(n)

2.2FA160的糞便常規(guī)檢測(cè) FA160與人工鏡檢法檢測(cè)糞便常規(guī)標(biāo)本的結(jié)果分別見(jiàn)表5～8。以人工鏡檢法作為金標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)A160檢測(cè)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球和似酵母樣菌的靈敏度分別為88.0%、81.3%、87.9%、86.7%；特異度分別為99.6%、98.0%、99.2%、99.8%；假陽(yáng)性率分別為2.4%、6.4%、7.8%、4.4%；假陰性率分別為1.9%、5.9%、1.2%、0.5%；符合率分別為98.1%、98.0%、98.2%、99.4%；Kappa系數(shù)分別為0.914、0.828、0.889、0.904。

表5 FA160與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中紅細(xì)胞的結(jié)果(n)

表6 FA160與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中白細(xì)胞的結(jié)果(n)

表7 FA160與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中脂肪球的結(jié)果(n)

表8 FA160與人工鏡檢法檢測(cè)糞便標(biāo)本中似酵母樣菌的結(jié)果(n)

2.3FA160配套商用室內(nèi)質(zhì)控品檢測(cè) 應(yīng)用FA160配套的糞便形態(tài)學(xué)質(zhì)控品對(duì)FA160進(jìn)行20次室內(nèi)質(zhì)控分析，各項(xiàng)指標(biāo)的符合率均為100.0%,見(jiàn)表9。應(yīng)用FA160配套糞便形態(tài)學(xué)質(zhì)控品對(duì)LTS-E100進(jìn)行20次室內(nèi)質(zhì)控分析，其中白細(xì)胞的符合率為95.0%，似酵母樣菌的符合率為90.0%，其余各項(xiàng)指標(biāo)的符合率均為100.0%,見(jiàn)表10。

表9 FA160檢測(cè)FA160配套質(zhì)控品的結(jié)果

續(xù)表9 FA160檢測(cè)FA160配套質(zhì)控品的結(jié)果

表10 LTS-E100檢測(cè)FA160配套質(zhì)控品的結(jié)果

3 討 論

糞便檢查對(duì)于各種消化道疾病的診斷及鑒別診斷有著重要意義[4-5]。大部分實(shí)驗(yàn)室目前仍由人工鏡檢法完成糞便的常規(guī)檢查，但受人工操作效率低下及難以標(biāo)準(zhǔn)化等一系列因素的限制，人工鏡檢法難以滿足臨床日益增長(zhǎng)的需求。近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程的不斷發(fā)展，糞便的自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)也逐漸被更多地引進(jìn)、應(yīng)用。

自動(dòng)化糞便分析儀實(shí)現(xiàn)了糞便檢測(cè)的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，其工作原理多為儀器自動(dòng)注入稀釋液，自動(dòng)攪拌、混勻并過(guò)濾，自動(dòng)加樣至玻片后由內(nèi)部顯微鏡直接取圖，圖片傳輸?shù)接?jì)算機(jī)后，先由計(jì)算機(jī)進(jìn)行初步識(shí)別，然后進(jìn)行人工審核[6]。儀器的使用有效避免了人力資源浪費(fèi)和減輕了生物安全風(fēng)險(xiǎn)，明顯改善醫(yī)療工作環(huán)境。這類(lèi)儀器可應(yīng)用于臨床的基礎(chǔ)在于需要保證其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，本實(shí)驗(yàn)按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)[4]中糞便檢測(cè)所推薦使用的人工鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本科引進(jìn)的LTS-E100和FA160兩種型號(hào)自動(dòng)化糞便分析儀進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。

本研究結(jié)果顯示，LTS-E100和FA160兩種儀器在糞便紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球和似酵母樣菌的檢出中與人工鏡檢法具有較好的一致性(針對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)kappa值均>0.6)，但兩種儀器在檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)，假陰性率均較高，這可能與儀器對(duì)于糞便殘?jiān)桶准?xì)胞的鑒別能力較弱有關(guān)，也可能是儀器過(guò)度稀釋標(biāo)本后的白細(xì)胞取樣概率降低所致。值得注意的是，LTS-E100和FA160兩種儀器對(duì)于糞便中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、脂肪球和似酵母樣菌檢測(cè)的靈敏度都不高，筆者認(rèn)為其主要原因是儀器對(duì)標(biāo)本的稀釋倍數(shù)過(guò)高所致。這與本院就診人群的特殊性息息相關(guān)。由于本院是婦女兒童專科醫(yī)院，腹瀉患兒標(biāo)本在其中占絕大部分，其性質(zhì)常為稀便，儀器加入稀釋液后，很大程度上會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本的過(guò)度稀釋。另外，筆者還發(fā)現(xiàn)在標(biāo)本中病理成分偶見(jiàn)的時(shí)候，由于儀器的取樣視野數(shù)較少，容易漏檢。因此，如果要更多地將自動(dòng)化糞便分析儀投入臨床使用，除了儀器的檢驗(yàn)和識(shí)別技術(shù)仍需不斷提高之外，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室也應(yīng)該按照實(shí)驗(yàn)室患者人群設(shè)定相應(yīng)的檢測(cè)模式，包括加入稀釋液的量、靜置沉降時(shí)間、視頻或照片的拍攝數(shù)量等，同時(shí)也要積極制訂適合本實(shí)驗(yàn)室的復(fù)檢規(guī)則以確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠[7]。并且，無(wú)論任何原理的糞便自動(dòng)化設(shè)備，一旦發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性有形成分后均應(yīng)對(duì)儀器拍攝的實(shí)景圖像進(jìn)行人工審核、確認(rèn)后方可發(fā)出陽(yáng)性報(bào)告[8]。有研究已經(jīng)證明，自動(dòng)化和智能化儀器無(wú)論如何先進(jìn)都不能完全代替人工鏡檢，檢驗(yàn)人員自身的形態(tài)學(xué)辨識(shí)能力應(yīng)更加得到重視[9]。

室內(nèi)質(zhì)控是檢驗(yàn)工作的靈魂，有效的室內(nèi)質(zhì)控是保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果可靠的關(guān)鍵因素，傳統(tǒng)的室內(nèi)質(zhì)控是通過(guò)分析質(zhì)控品,并將分析結(jié)果呈現(xiàn)在控制圖上進(jìn)行的[10]。但糞便檢驗(yàn)缺乏像血液、尿液一樣的質(zhì)控品[11-12]，因此本研究對(duì)較少見(jiàn)的FA160儀器配套商用室內(nèi)質(zhì)控品的通用性進(jìn)行評(píng)價(jià)，研究其推廣價(jià)值，以彌補(bǔ)糞便檢測(cè)儀器的一大缺憾。FA160配套質(zhì)控品均為動(dòng)物源性，能準(zhǔn)確地模擬或匹配人糞便中的有形成分，從而推斷自動(dòng)化糞便處理器分析系統(tǒng)的狀態(tài)，質(zhì)控品中所含的各種細(xì)胞保護(hù)劑和防腐劑等都確保了其穩(wěn)定性，同時(shí)，本研究還利用FA160與LTS-E100兩種儀器分別對(duì)FA160配套質(zhì)控品進(jìn)行檢測(cè)后對(duì)比發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)A160檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)符合率均為100.0%，符合質(zhì)控結(jié)果，而LTS-E100檢測(cè)白細(xì)胞、似酵母樣菌的符合率分別為95.0%和90.0%，其余各項(xiàng)指標(biāo)的符合率均為100.0%。白細(xì)胞與似酵母樣菌的結(jié)果偏差可能與不同儀器之間的稀釋倍數(shù)、取樣視野個(gè)數(shù)有關(guān)，但總體結(jié)果基本相符，該質(zhì)控品可用于定性或半定量的質(zhì)控分析，值得推廣使用。

綜上所述，F(xiàn)A160與LTS-E100兩種自動(dòng)化糞便分析儀對(duì)臨床標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果與人工鏡檢法有較好的一致性，且操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果可靠，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。但以上儀器在臨床使用中還是存在漏判、誤判的情況，因此檢驗(yàn)工作者不能完全依賴儀器檢測(cè)的結(jié)果，遇到陽(yáng)性及可疑陰性結(jié)果仍需人工復(fù)檢。同時(shí)，本研究對(duì)FA160配套質(zhì)控品進(jìn)行檢測(cè)，證實(shí)此質(zhì)控品同時(shí)適用于不同型號(hào)的糞便自動(dòng)化分析儀的室內(nèi)質(zhì)控工作。