卡格列凈聯合阿卡波糖對2型糖尿病患者miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平的影響*

蘇海玉，張宏穎△，楊 俐，張廣穎

河北省廊坊市人民醫院：1.內分泌科；2.體檢中心，河北廊坊 065000

糖尿病屬于代謝紊亂性、進展性疾病，以高血糖為主要表現，無特定發病年齡。流行病學數據顯示，糖尿病患病率呈急劇增長趨勢[1-2]，全球糖尿病患者高達6億，其中亞洲為患病率較高地區，我國糖尿病患病率高達15%，2型糖尿病約占糖尿病的90%[3]。目前，2型糖尿病臨床治療以胰島素、雙胍類、格列奈類等降糖藥物為主，其中二甲雙胍為一線藥物，但單一治療無法滿足患者降糖需求，且存在不同程度的不良反應[4-5]。本研究采用卡格列凈聯合阿卡波糖對2型糖尿病患者進行治療，對微小RNA(miR)-144、NOD樣受體3炎性小體(NLRP3)mRNA、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平的變化情況進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2020年7月本院收治的2型糖尿病患者186例，依據隨機數字表法分為單藥治療組、聯合治療組，每組93例。單藥治療組中男51例，女42例；年齡38～64歲，平均(51.1±10.9)歲；病程5～17個月，平均(11.1±5.0)個月。聯合治療組中男49例，女44例；年齡35～65歲，平均(50.0±12.6)歲；病程7～15個月，平均(11.1±3.4)個月。兩組患者性別、年齡、病程等一般資料對比，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲得本院倫理委員會批準，患者及家屬均知情同意。納入標準：所有患者均符合中華醫學會頒布的2型糖尿病診斷標準[6]。排除標準：病歷資料不全者；合并心、肺、肝、腎等臟器功能不全者；1型糖尿病及繼發性糖尿病者；合并嚴重感染、急性心腦血管疾病者；凝血功能、內分泌系統紊亂者；妊娠期或哺乳期女性；對研究中藥物過敏或不耐受者。

1.2方法

1.2.1治療方法 對所有研究對象給予控制飲食、適量運動等常規治療：采用低鹽、低脂飲食，制訂合理的膳食計劃，并適當運動。單藥治療組患者采用阿卡波糖片進行治療，藥物規格為50毫克/片，藥物使用劑量為50毫克/次，3次/天，餐時咀嚼服用。聯合治療組采用阿卡波糖片聯合卡格列凈進行治療。卡格列凈規格為100毫克/片，使用劑量為100毫克/次，1次/天，于餐前用溫水送服。阿卡波糖片服用劑量、方法與單藥治療組保持一致。兩組患者均連續治療4個月。

1．2.2檢測方法 分別抽取患者治療前后空腹靜脈血6 mL，2 500 r/min離心15 min，分離上清液至無RNA酶的EP管內，于-70 ℃環境中保存、待用。(1)使用血糖檢測儀對兩組患者治療前后血糖指標[餐后2 h血糖(PBG)、空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)]進行檢測；使用免疫化學發光法對餐后2 h胰島素(2 h INS)、空腹胰島素(FINS)水平進行檢測。(2)采用酶聯免疫吸附試驗檢測白細胞介素(IL)-1β、IL-17A、IL-23、MCP-1水平。(3)采用反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測miR-144、NLRP3 mRNA表達水平。首先提取細胞總RNA，對提取總RNA的純度、含量進行檢測，反轉錄處理獲取cDNA，使用Primer5.0軟件設計引物。設置反轉錄反應條件：25 ℃ 10 min,40 ℃ 60 min,85 ℃ 5 min；設置擴增條件:94 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s,35個循環，采用2-ΔΔCt計算出需要檢測的miR-144、NLRP3 mRNA相對表達水平。

1.3觀察指標 (1)比較兩組患者治療前后PBG、FPG、HbA1c、2 h INS、FINS水平。(2)比較兩組患者治療前后炎癥因子血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平。(3)比較兩組患者治療前后血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平。(4)分析miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平與炎癥因子的相關性。(5)療效評估。以顯效、有效、無效對患者療效進行評估。顯效：患者FPG<6.1 mmol/L，PBG<7.2 mmol/L；有效：患者FPG<7.2 mmol/L，PBG<10.0 mmol/L；無效：患者FPG、PBG水平變化未達到顯效、有效的標準。治療有效率=(顯效例數+有效例數)/總例數×100%。

2 結 果

2.1兩組患者血糖、胰島素水平比較 兩組患者治療前PBG、FPG、HbA1c、2 h INS、FINS水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組以上指標水平均低于治療前(P<0.05)。治療后，兩組2 h INS、FINS水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；聯合治療組治療后PBG、FPG、HbA1c水平低于單藥治療組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者血糖、胰島素水平比較

2.2兩組患者炎癥因子水平比較 治療前兩組患者血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組患者血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平降低，且聯合治療組血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平低于單藥治療組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者炎癥因子水平比較

2.3兩組患者血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平比較 兩組患者治療前血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平降低，且聯合治療組血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平明顯低于單藥治療組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平比較

2.4miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平與炎癥因子的相關性 miR-144相對表達水平與IL-1β、IL-17A、IL-23呈正相關(P<0.05)；NLRP3 mRNA相對表達水平與IL-1β、IL-17A、IL-23呈正相關(P<0.05)；MCP-1水平與IL-1β、IL-17A、IL-23呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 miR-144、NLRP3 mRNA、MCP-1水平與炎癥因子的相關性

2.5兩組療效比較 聯合治療組治療有效率高于單藥治療組，差異有統計學意義(χ2=10.76，P<0.05)。見表5。

表5 兩組療效比較

3 討 論

糖尿病作為全球范圍內常見、高發的慢性代謝性疾病，具有較高的并發癥發生風險。臨床研究指出，糖尿病與冠心病、高血壓等心腦血管疾病的發生、發展具有密切聯系[7-8]。流行病學數據顯示，受我國人口老齡化加重的影響，糖尿病發病率呈逐年遞增趨勢，嚴重威脅患者健康及生活質量[9]。臨床研究顯示，老年人群作為2型糖尿病主要發病群體，主要表現為持續性胰島素抵抗、進行性胰島β細胞功能障礙或喪失[10]。目前，糖尿病尚無根治方法，主要通過藥物治療、飲食治療及運動等多種治療手段對血糖水平進行控制[11-12]。

本研究結果顯示，使用阿卡波糖聯合卡格列凈對2型糖尿病患者進行治療，患者血糖、胰島素水平均有所下降，出現此結果的原因為阿卡波糖含有不飽和環多醇寡糖，能夠降低患者餐后血糖峰濃度，卡格列凈對腎小管重吸收葡萄糖具有抑制作用，可有效減輕體質量及降低血壓，兩者聯合對患者進行治療，能夠有效降低患者的血糖、胰島素水平[13]。臨床研究結果顯示，阿卡波糖可有效改善患者胰島素抵抗，增強糖耐量損傷肥胖患者胰島素敏感性，有效改善糖尿病患者血脂代謝紊亂情況，降低糖尿病患者心血管疾病發生風險[14-15]。亦有臨床研究指出，鈉-葡萄糖協同轉運蛋白2(SGLT2)抑制劑可有效改善患者血壓、血糖等生理指標，可有效降低腎臟疾病、嚴重心血管疾病并發癥及死亡發生風險，卡格列凈是SGLT2抑制劑的代表藥物[16]。本研究結果與上述研究結果一致，再次佐證了兩種藥物治療2型糖尿病患者的有效性，且兩種藥物聯用有著更好療效。

研究顯示，炎癥因子的釋放與糖尿病患者血管活性因子的釋放具有密切聯系。IL-1β可對其他炎癥因子釋放產生誘導，使炎癥級聯反應擴大[17-18]。IL-17A可促進IL-1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α等分泌，通過誘導一氧化碳合酶(NOS)、自由基生成，增加胰島β細胞損傷程度。IL-23作為前炎癥因子，在T細胞、自然殺傷(NK)細胞等多種炎癥因子生成過程中發揮重要作用，對胰島β細胞間接或直接造成損傷，且參與抗腫瘤免疫、機體抗感染免疫、自身免疫性疾病的發生、發展[19-20]。本研究結果顯示，與單藥治療組比較，治療后聯合治療組患者IL-1β、IL-17A、IL-23水平降低，此結果說明卡格列凈聯合阿卡波糖能夠起到較好抑制炎癥的效果，有著較高的應用價值。

微小RNA能夠對多種疾病進行輔助診斷。相關研究顯示，miR-144水平與2型糖尿病患者胰島素抵抗具有相關性，可通過抑制胰島素受體底物1的表達影響胰島素信號通路[21-22]。本研究中發現，與單藥治療組比較，聯合治療組患者治療后miR-144相對表達水平下降。出現此結果的原因可能是2型糖尿病患者處于慢性炎癥狀態，大量損傷相關模式分子(DAMPs)積累可誘導天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1產生并裝配炎性小體，介導炎性反應擴大，從而誘發2型糖尿病或致病情加重，而卡格列凈聯合阿卡波糖對患者進行治療，能夠有效抑制炎癥因子，從而改善miR-144表達。同時有研究指出，NLRP3過表達在胰島素耐受中發揮重要作用，其是調節葡萄糖內穩態與胰島素抵抗的重要因子[23-24]。由此可見，本研究使用卡格列凈聯合阿卡波糖對2型糖尿病患者進行治療，能夠改善患者胰島β細胞功能，改善胰島素抵抗，提高血糖控制效果。

綜上所述，采用卡格列凈聯合阿卡波糖對2型糖尿病患者進行治療，有利于降低患者血糖，改善胰島素抵抗，降低炎癥因子水平，有效性更高。本研究為臨床治療2型糖尿病提供了一定參考依據。