SOX17基因多態性和中國漢族人群顱內動脈瘤的相關性研究

何金峰 張敏 邱玲玲 王文敏 周婷 徐小輝

[摘要] 目的 探討分析SOX17基因多態性和中國漢族人群顱內動脈瘤（IA）的相關性。 方法 選擇2018年1月至2019年8月臺州市立醫院收治的顱內動脈瘤患者161例作為IA組，選擇同期在臺州市立醫院健康體檢的健康志愿者150名作為對照組。采集兩組受試者外周靜脈血，通過PCR-熒光探針法檢測SOX17基因各位點基因型，分析SOX17基因各位點基因多態性與顱內動脈瘤的相關性。 結果 兩組受試者rs9298506、rs1072737位點基因型分布差異有統計學意義（P<0.05）。IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs9298506位點基因型、rs1072737位點基因型及等位基因分布差異有統計學意義（P<0.001），其中破裂組患者A等位基因分布顯著低于未破裂組，G等位基因分布顯著高于未破裂組（P<0.05）。 結論 SOX17基因rs9298506及rs1072737位點多態性與中國漢族人群顱內動脈瘤發生及動脈瘤的破裂有關，其中rs9298506位點A基因是漢族人群顱內動脈瘤的保護性因素，而rs1072737位點G等位基因是漢族人群顱內動脈瘤的危險因素。

[關鍵詞] SOX17基因多態性;中國漢族人群;顱內動脈瘤;相關性

[中圖分類號] R445.2? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）02-0092-04

Correlation between SOX17 gene polymorphism and intracranial aneurysm in Chinese Han population

HE Jinfeng1? ?ZHANG Min2? ?QIU Lingling1? ?WANG Wenmin1? ?ZHOU Ting1? ?XU Xiaohui1

1.Department of Neurology， Taizhou Municipal Hospital， Taizhou? ?318000， China; 2.Vascular Surgery， Taizhou Hospital of Zhejiang Province Affiliated to Wenzhou Medical University， Taizhou? ?317000， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between SOX17 gene polymorphism and intracranial aneurysm （IA） in Chinese Han population. Methods A total of 161 patients with intracranial aneurysm who were admitted to Taizhou Municipal Hospital from January 2018 to August 2019 were selected as the IA group， and 150 healthy volunteers who underwent physical examination in Taizhou Municipal Hospital during the same period were selected as the control group. Peripheral venous blood was collected from the two groups of subjects， and the genotypes of each SOX17 gene point were detected by the PCR-fluorescence probe method， and the correlation between the polymorphism of each SOX17 gene point and intracranial aneurysm was analyzed. Results The genotype distributions of rs9298506 and rs1072737 were significantly different between the two groups （P<0.05）. The distributions of rs9298506 genotype， rs1072737 genotype and allele of SOX17 gene in patients with IA in the ruptured group and the unruptured group had statistically significant differences （P<0.001）. The distribution of A allele in the ruptured group was significantly lower than that in the unruptured group， and the distribution of G allele was significantly higher than that of the unruptured group （P<0.05）. Conclusion The rs9298506 and rs1072737 polymorphisms of SOX17 gene are associated with the occurrence and rupture of intracranial aneurysms in Chinese Han population. The rs9298506 A gene is a protective factor of intracranial aneurysms in Han population， and the rs1072737 G allele is a risk factor for intracranial aneurysms in Han population.

[Key words] SOX17 gene polymorphism; Chinese Han population; Intracranial aneurysm; Correlation

顱內動脈瘤（intracranial aneurysms， IA）是由于顱內局部血管異常改變而導致顱內動脈壁產生瘤樣突起，IA發病率為1%～8%，位居顱內病變的第三位，IA的高病死率及高致殘率給家庭以及社會帶來了沉重的負擔[1]。目前一般認為IA是遺傳因素以及環境因素共同作用的產物，其病理機制復雜，由多個基因共同參與而形成[2]。目前已經有學者在不同種族的IA患者中報道了多個SOX17基因突變位點，作為內皮特異性轉錄因子，在正常的腦動脈內皮細胞中具有強有力的表達，在血管內皮細胞形成以及修復方面有著重要作用[3-4]。但SOX17基因多態性與顱內動脈瘤的相關性僅限于日本人群以及歐美人群，且研究結果不一致，因此有必要針對不同人群進行研究認證[5-6]。本研究探討分析SOX17基因多態性與中國漢族人群顱內動脈瘤的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年8月臺州市立醫院收治的顱內動脈瘤患者161例作為IA組，患者均經頭顱CT平掃篩查后全腦血管造影術（digital subtraction angiography， DSA）確診為顱內動脈瘤，其中男75例，女86例，其中顱內動脈瘤破裂者93例，未破裂者68例;平均年齡（58.37±12.75）歲，平均BMI（22.45±2.15）kg/m2。此外，選擇同期在臺州市立醫院健康體檢的志愿者150名作為對照組，男、女志愿者分別為68名、82名，平均年齡（56.97±13.42）歲，平均BMI（22.17±2.64）kg/m2。兩組的一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。所有受試者均自愿簽署知情同意書，本研究經臺州市立醫院醫學倫理委員會批準（審批號：LW035）。納入標準：①IA組、對照組受試者均經頭顱MRA或CTA或DSA影像學檢查明確診斷或排除顱內動脈瘤和蛛網膜下腔出血者;②兩組受試者均為漢族。排除標準：①入院前由動脈瘤夾閉或血管內治療者;②臨床資料不全者;③對造影劑過敏者;④合并精神疾病無法配合完成檢查者[7-8]。

1.2 標本采集及基因組DNA提取

抽取三組受試者清晨空腹肘靜脈血5 ml，使用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid， ETDA）抗凝，使用上海生工生物工程公司全血基因組提取試劑盒提取基因組DNA，將其置于-20℃保存待用。

1.3 PCR引物以及反應條件

分別擴增SOX17基因rs10958409、rs9298506和rs1072737多態性位點基因序列。根據文獻設計引物，PCR反應體系為25μL，內涵緩沖液、引物、Taq酶以及dNTP等，采用Bio-Rad熱循環儀。PCR反應條件為95℃預變性4 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min，共45個循環。

1.4 擴增產物檢測及分析

取PCR反應產物10 μl，使用10 U BamHI內切酶于37℃條件下酶切消化4 h，反應終止后產物經2.5%瓊脂糖凝膠電泳，以DNA片段長度標準物作為參考，在紫外燈下觀察結果。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行統計分析，計量資料采用（x±s）表示，計數資料采用[n（%）]表示。計量資料比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗。采用在線軟件SHEsis（http：//analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php）檢驗基因型頻率分布是否符合哈迪-溫伯格（hardy-weinberg，HWE）平衡，若P>0.05，則符合HWE平衡，說明本實驗樣本群體代表性好，無選擇偏倚。多因素分析采用多因素logistic回歸，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SOX17基因3個單核苷酸多態性位點在兩組受試者中的基因型分布

經Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗，各組的觀察數與預期數比較，差異無統計學意義（P>0.05），表明各基因頻率符合遺傳平衡，具有群體代表性。兩組受試者SOX17基因rs10958409位點基因型分布差異無統計學意義（P>0.05），而兩組受試者rs9298506、rs1072737位點基因型分布差異具有統計學意義（P<0.001）。見表1。

2.2 SOX17基因3個單核苷酸多態性位點在兩組受試者中的等位基因分布

兩組受試者SOX17基因rs10958409位點等位基因分布無顯著差異（P>0.05），rs9298506以及rs1072737位點等位基因分布差異有統計學意義（P<0.001）。見表2。

2.3 IA患者破裂組與未破裂組rs10958409位點多態性分布比較

IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs10958409位點基因型及等位基因分布比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見表3。

2.4 IA患者破裂組與未破裂組rs9298506位點多態性分布比較

IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs9298506位點基因型及等位基因分布差異具有統計學意義（P<0.05），其中破裂組患者A等位基因分布顯著低于未破裂組（P<0.05）。見表4。

2.5 IA患者破裂組與未破裂組rs1072737位點多態性分布比較

IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs1072737位點基因型及等位基因分布比較，差異有統計學意義（P<0.05），其中破裂組患者G等位基因分布顯著高于未破裂組（P<0.05）。見表5。

3 討論

顱內動脈瘤是常見的一種腦部血管畸形，顱內動脈瘤平時不易被發現，但動脈瘤破裂時急性發病對機體腦神經具有極大的危害，該病發病機制復雜且與多種病理因素有關[9]。流行病學和遺傳學研究結果表明，顱內動脈瘤的發病與多基因遺傳、環境因素以及相互作用有關，具有群體遺傳異質性強、外顯率低、多基因共同參與等特征[10]。

近年來，顱內動脈瘤的分子遺傳學機制研究成為熱點，各種與該病發病有關的染色體位點和候選基因相繼被報道[11-12]。通過全基因關聯分析發現，與顱腦動脈瘤相關的基因功能主要涉及血管內皮功能、細胞外基質的維持和炎癥反應等方面。SOX17基因作為一種內皮特異性的轉錄因子，其染色體位置為8q11附近，在正常的腦內動脈內皮細胞中，SOX17基因有著強有力的表達，在血管內皮細胞形成、脈管系統的發展修復方面具有重要作用[13-14]。國外學者針對不同種族的顱內動脈瘤患者進行報道，具體對SOX17基因的rs10958409、rs9298506以及rs1072737三個變異位點進行了分析，結果發現SOX17基因多態性與顱內動脈瘤的發生、發展相關。

本研究探討分析SOX17基因多態性和中國漢族人群顱內動脈瘤的相關性，結果顯示，顱內動脈瘤患者的rs9298506、rs1072737位點基因型及等位基因分布與健康體檢者比較差異有統計學意義，其中rs9298506位點G等位基因是漢族人群顱內動脈瘤的保護性因素（OR=0.716，95%CI：0.472～0.893），而rs1072737位點G等位基因是漢族人群顱內動脈瘤的危險因素（OR=1.318，95%CI：1.028～1.562），與國外學者相關研究報道結果基本一致[15-17]，上述提示在中國漢族人群中，SOX17基因多態性與顱內動脈瘤的發病密切相關。

此外，本研究針對SOX17三個多態性位點進行分析，分析SOX17基因多態性位點與顱內動脈瘤患者動脈瘤破裂的關系。結果顯示，顱內動脈瘤患者中破裂的患者與未破裂的患者在SOX17基因rs10958409位點基因型及等位基因分布比較未見顯著差異。破裂的患者與未破裂的患者的SOX17基因rs9298506及rs1072737位點基因型及等位基因分布比較差異明顯。上述結果表明在顱內動脈瘤患者中，SOX17基因的多態性表達與動脈瘤是否發生破裂有關，提示基因的表達調控不僅影響顱內動脈瘤的發生，同時也可以影響顱內動脈瘤的破裂，考慮可能與SOX17基因突變導致顱內動脈血管內皮細胞形成以及修復受到影響，從而影響顱內動脈瘤的破裂[18-21]。

由于本研究納入樣本量較小，且多態性位點僅針對目前報道可知的三個位點進行分析，后續研究還需進一步擴大樣本量，并分析更多的可能潛在的多態性位點。

綜上所述，SOX17基因rs9298506及rs1072737位點多態性與中國漢族人群顱內動脈瘤發生及動脈瘤的破裂有關，其中rs9298506G等位基因是漢族人群顱內動脈瘤的保護性因素、而rs1072737位點G等位基因是漢族人群顱內動脈瘤的危險因素。

[參考文獻]

[1] 劉振波.三維DSA技術在顱內動脈瘤診治中的應用價值研究[J].當代醫學，2019，25（8）：142-143.

[2] Zhao J，Lin H，Summers R，et al. Current treatment strategies for intracranial aneurysms[J]. Angiology，2018，69（1）：17-30.

[3] Han M，Zhou B.SOX17 and coronary arteriogenesis in development[J].Circ Res，2020，127（11）：1381-1383.

[4] 安紅儉，李勇毅.腦動脈CTA與MRA對顱內動脈瘤的診斷價值分析[J].貴州醫藥，2019，43（12）：1966-1967.

[5] 肖曼倩，李丙陽，廖鑫，等.家族性顱內動脈瘤遺傳學病因的研究進展[J].中國腦血管病雜志，2019，16（10）：552-556.

[6] Li B，Hu C，Liu J，et al.Associations among genetic variants and intracranial aneurysm in a Chinese population[J].Yonsei Med J， 2019，60（7）：651-658.

[7] 范海燕，郭慎全，陳運昌，等.RNF213基因rs6565666位點多態性與廣東省顱內囊狀動脈瘤患者發病的關系[J].中華神經醫學雜志，2019，18（3）：238-242.

[8] 魏曉勇，葉子明，周瑜，等.廣西壯族顱內動脈瘤患者血管內皮素受體A基因rs6841581位點多態性觀察[J].山東醫藥，2018，58（27）：69-71.

[9] 付曉紅，趙敏，余云湖，等.Ⅲ型膠原蛋白α1鏈基因rs1800255多態性與顱內動脈瘤發病關系的系統評價[J].中國現代醫學雜志，2018，28（18）：62-66.

[10] 劉珺宇，嚴俊霞，李毅鋒，等.家族性顱內動脈瘤的遺傳學研究進展[J].中南大學學報（醫學版），2019，44（3）：338-344.

[11] 楊馭媒，李新麗，張可，等.LOC105375840基因單核苷酸多態性位點與四川地區漢族人群顱內動脈瘤的關聯研究[J].實用醫院臨床雜志，2017，14（6）：37-40.

[12] Hiraide T，Kataoka M，Suzuki H， et al.SOX17 mutations in Japanese patients with pulmonary arterial hypertension[J].Am J Respir Crit Care Med， 2018，198（9）：1231-1233.

[13] 鄧曉紅，葛志華，張京芬.內皮型一氧化氮合成酶T786C、白細胞介素-6C572G基因多態性與動脈瘤性蛛網膜下腔出血的相關性研究[J].卒中與神經疾病，2018，25（6）：662-667.

[14] 李曉波，李婷，許濟，等.ANRIL基因與陜西漢族人顱內動脈瘤遺傳易感性關聯研究[J].中華檢驗醫學雜志，2017，40（6）：463-466.

[15] Wang TM，Wang SS，Xu YJ，et al.SOX17 loss-of-function mutation underlying familial pulmonary arterial hypertension[J].Int Heart J，2021，62（3）：566-574.

[16] 白晶波，張婷，涂悅，等.基于GEO數據庫對顱內動脈瘤形成與破裂相關基因的挖掘與分析[J].海南醫學院學報，2019，25（17）：1281-1286.

[17] 班茹，張風玉，趙鑫，等.PRKAR1A基因突變所致Carney綜合征并發腦出血和多發性顱內動脈瘤：1例報道并文獻復習[J].國際腦血管病雜志，2019，27（9）：711-716.

[18] 段銘銘.未破裂顱內動脈瘤患者外周血中microRNA-126表達情況及其生物信息學分析[J].現代中西醫結合雜志，2019，28（31）：3439-3443，3449.

[19] 廖寶，周鳳坤，鐘松辛，等.顱內動脈瘤相關基因的共表達網絡構建與分析[J].中華醫學雜志，2019，99（7）：525-531.

[20] 丁興歡，王坤，張倩倩，等.全外顯子組測序技術探尋家族性顱內動脈瘤致病基因的研究進展[J].中國微侵襲神經外科雜志，2018，23（10）：470-474.

[21] 劉子航，王月，藍天琦，等.經3D-TOF-MRA分析Willis環形態與顱內動脈瘤發生部位的關系[J].中國現代醫生，2020，58（31）：26-29.

（收稿日期：2021-07-09）