細胞免疫治療聯合化療治療晚期非小細胞肺癌的效果

在我國經濟快速發展的過程中，人口老齡化進程也越來越嚴重，惡性腫瘤的患病人數也越來越多，而肺癌則是增長率最明顯的一種惡性腫瘤[1]。就診時大部分患者都已處于疾病晚期，腫瘤負荷較大，化療、放療、手術等傳統治療方法無法對殘余病灶進行徹底清除，進而引起腫瘤轉移、復發。現階段臨床中在對晚期（Ⅲ B或Ⅳ期）或局部晚期患者進行治療時，常用的治療方式包括物理消融、細胞免疫治療、分子靶向治療、放療、局部化療、全身化療等[2]。現代醫學技術的不斷發展，雖然在一定程度上提升了肺癌患者的綜合治療水平，但是卻并沒有顯著改善其生存期，而在提出了腫瘤是一種慢性疾病這一概念后，在治療腫瘤患者時，也開始更加關注其生存的量與質，所以選擇耐受性更好、低毒、高效的方法來治療腫瘤患者就顯得非常關鍵，近年來臨床開始更加關注和重視細胞免疫治療[3]。本研究主要分析了細胞免疫治療聯合化療對晚期非小細胞肺癌的療效及不良反應，希望能為晚期非小細胞肺癌的防治提供指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取醫院2015年1月—2016年12月收治的50例晚期非小細胞肺癌患者作為對照組，選取醫院2017年1月—2018年12月收治的50例晚期非小細胞肺癌患者作為試驗組。納入標準：年齡為18～75歲；經細胞學或病理組織學檢查確診為初治肺鱗癌或者肺腺癌[4]；臨床分期為Ⅲ B或者Ⅳ期；功能狀態卡氏（Karnofsky performance status，KPS）評分≥60分；過往并沒有接受細胞免疫治療；治療前凝血功能和血常規無異常，重要臟器功能無異常，不存在嚴重基礎疾病；不存在化療和細胞免疫治療禁忌證；無法開展放療或者不愿采用放療的患者；自愿接受細胞免疫治療或化療，患者或者其家屬簽署知情同意書。排除標準：腦轉移患者；伴嚴重內科系統疾病、自身免疫系統疾病、重要臟器功能損害的患者；妊娠期或哺乳期女性。對照組中，28例男性，22例女性；其年齡26～71歲，平均（62.2±6.4）歲；KPS評分：18例患者≥80分，32例患者＜80分；臨床分期為：15例患者為Ⅲ B期，35例患者為Ⅳ期；病理類型：30例患者為腺癌，20例患者為鱗癌；病灶大小：28例患者的病灶直徑＞3 cm，22例患者的病灶直徑≤3 cm。試驗組中，27例男性，23例女性；其年齡為23～73歲，平均（61.5±6.8）歲；KPS評分：21例患者≥80分，29例患者＜80分；臨床分期：17例患者為Ⅲ B期，33例患者為Ⅳ期；病理類型：31例患者為腺癌，19例患者為鱗癌；病灶大小為：29例患者的病灶直徑＞3 cm，21例患者的病灶直徑≤3 cm。兩組的各項基線資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

對照組接受單純化療治療，試驗組接受細胞免疫治療聯合化療治療；具體的治療方法如下。

（1）細胞免疫治療：①采集血細胞：化療前1 d，通過血細胞分離機對患者外周血進行采集，采集大約30～50 mL的血細胞，采集后應及時送到GMP實驗室。②分離外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）：新鮮外周血在采集完成之后，應轉入到離心管內，進行10 min的離心處理，離心速率為1 500 r/min，選取表面血漿，選擇裝有淋巴細胞分離液的離心管分裝底層的有核細胞，并進行20 min的離心處理，離心速率為2 000 r/min，選取離心管內的白膜層，也就是PBMC。③計數細胞：選擇生理鹽水進行2次洗滌，每次進行8 min離心處理，離心速率為1 800 r/min，將上清去除，選擇無血清的RPMI1 640培養液重懸細胞，選擇計數板對細胞進行計數，細胞終濃度調整為2×106/mL。④培養樹突狀細胞（dendritic cell，DC）：在6孔板內接種分離出的PBMC混懸液，每孔所加入的細胞混懸液為2 mL，放置在標準細胞培養箱內進行2 h孵育。孵育完成后，選擇懸浮細胞用于培養細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine induced killer，CIK），在6孔板的每一個孔中加入DC完全培養液2 mL，放置在培養箱內進行培養。定時換液，并對細胞狀態進行觀察。在培養到第5 d時，將腫瘤裂解物加入到6孔板內，在第6 d加入腫瘤壞死因子-α，促進DC成熟，對內毒素、真菌、細菌進行檢測，加強質量監控，第8 d進行回輸，回輸之前應對內毒素、真菌以及細菌進行再次檢測。⑤培養CIK細胞：對細胞懸液進行離心洗滌處理，選擇無血清RPMI1 640培養液重懸，細胞密度控制為2×106/mL，在培養瓶內進行接種處理，加入包含干擾素-γ的無血清RPMI1 640培養液，放置在細胞培養箱內進行24 h的培養。第2 d加入白介素-1α、CD3單抗和白介素-2，同時將細胞轉入到細胞培養袋內。每隔2～3 d進行1次細胞計數，同時應加入CIK細胞完全培養基，細胞密度維持在2×106/mL，并加入白介素-2。當培養到第8天時，根據DC：CIK為1：10～30的比例，在細胞培養帶內加入抗原致敏的DC，進行3～5 d配天則可以進行回輸。⑥細胞回輸：細胞回輸時間為第1周期、第2周期化療間期，從第8 d開始進行DC回輸，隔天進行1次回輸，共進行4次回輸，從第12 d開始進行CIK細胞回輸，每天進行2次回輸，持續進行3 d回輸。收集到的DC和CIK細胞，選擇100 mL包含1%人的自體血清白蛋白的生理鹽水開展混懸處理，經外周靜脈完成回輸。

（2）化療方案：放療方案為多西他賽或者紫杉醇聯合鉑類，按照藥物劑量標準、患者一般情況、體表面積對藥物劑量進行確定，化療周期為3周。

1.3 觀察指標

（1）近期療效：在結束第2周期化療后3周，按照實體瘤療效評價標準對臨床療效進行評估[5]，具體可分為完全緩解（complete response，CR）、部 分緩 解（partial response，PR）、疾病穩定（stable disease，SD）、疾病進展（progressive disease，PD），CR例數與PR例數之和則為有效（response rate，RR）例數，CR例數、PR例數、SD例數之和則為疾病控制（disease control rate，DCR）例數。（2）檢測外周血淋巴細胞表型：分別在第1周期化療前、第3周期化療前，選擇流式細胞儀對外周血中的CD4+細胞百分比、CD8+細胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細胞百分比進行檢測。（3）對治療期間的不良反應發生情況進行統計記錄。

1.4 統計學處理

本試驗相關數據運用SPSS 21.0軟件做統計學處理，計數資料以（n，%）表示，組間數據比較進行χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，組間數據比較進行t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 近期療效觀察

對照組、試驗組的RR分別為38.0%、48.0%，兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；試驗組的DCR為66.0%，明顯高于對照組的44.0%，差異有統計學意義（P＜0.05），如表1。

表1 近期療效觀察 [例（%）]

2.2 外周血中淋巴細胞表型變化情況觀察

治療前兩組的CD4+細胞百分比、CD8+細胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細胞百分比的比較差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后試驗組的CD4+細胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細胞百分比均明顯高于對照組，比較差異有統計學意義（P＜0.05）；而兩組治療后的CD8+細胞百分比比較差異無統計學意義（P＞0.05）。與治療前相比，試驗組治療后的CD4+細胞百分比、CD4+/CD8+比值以及NK細胞百分比均明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05），而CD8+細胞百分比則明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；與治療前相比，對照組治療后的CD4+細胞百分比、CD8+細胞百分比以及NK細胞百分比均明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療前后對照組的CD4+/CD8+比值比較差異無統計學意義（P＞0.05），如表2。

表2 外周血中淋巴細胞表型變化情況觀察（±s）

表2 外周血中淋巴細胞表型變化情況觀察（±s）

注：*表示與治療前相比，P＜0．05。

組別 CD4+細胞（%） CD8+細胞（%） CD4+/CD8+ NK細胞（%）治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后試驗組（n=50）32．61±7．96 34．77±8．79* 27．42±7．42 25．76±8．91* 1．33±0．74 1．61±1．03* 16．22±7．76 18．65±7．94*對照組（n=50）32．68±9．43 29．36±7．01* 28．71±8．36 26．23±6．76* 1．27±0．53 1．16±0．34 18．64±9．03 15．36±8．09*t值 0．040 1 3．402 5 0．816 0 0．297 2 0．466 1 2．933 6 1．437 2 2．052 3 P值 0．968 1 0．001 0 0．416 5 0．767 0 0．642 2 0．004 2 0．153 8 0．042 8

2.3 不良反應觀察

試驗組患者在CIK細胞回輸24 h內，僅5例患者發生寒戰、發熱等癥狀，經對癥支持治療后患者癥狀顯著改善；并沒有患者因為CIK細胞回輸而出現腎臟、心臟功能損害。與對照組相比，試驗組治療后的惡心、骨髓抑制Ⅲ～Ⅳ度發生率均明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；而兩組治療后的骨髓抑制Ⅰ～Ⅱ度、外周神經毒性、肝功能損害發生率比較差異無統計學意義（P＞0.05），如表3。

表3 不良反應發生情況觀察 [例（%）]

3 討論

腫瘤患病人數的不斷增加以及臨床病死率的不斷增長，也導致腫瘤治療模式得到了不斷完善和變化，細胞免疫治療現階段開始受到了臨床的關注和重視，成為了現階段臨床中的研究熱點[6]。化療作為現階段臨床治療晚期非小細胞肺癌的首選方式，雖然化療能對腫瘤細胞進行有效殺傷，讓瘤體明顯縮小，同時讓患者生存期明顯延長，但是因為腫瘤細胞的增殖速度較快，對化療藥物容易出現耐藥性，多程化療后患者體內蓄積大量的化療藥物毒物，可能對機體免疫功能和重要臟器功能造成損傷，進而讓治療失敗，導致病情進展[7-9]。

動物模型實驗以及體外實驗均證實，CIK細胞能有效殺傷膠質瘤、胃癌、腎癌、肺癌以及肝癌等腫瘤細胞[10]。相關臨床研究結果表明，采用CIK細胞免疫治療不但能讓腫瘤患者的近期治療效果明顯提升，同時還能對腫瘤復發進行預防，對患者生活質量進行顯著改善，讓其無進展生存率明顯提高，毒副作用也比較輕微[11-12]。本研究中，對照組、試驗組的RR分別為38.0%、48.0%，兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；試驗組的DCR為66.0%，明顯高于對照組的44.0%（P＜0.05）；結果表明，化療與細胞免疫治療具有比較理想的協同效果，能對晚期非小細胞肺癌患者的疾病控制率明顯提高；因為患者腫瘤負荷大，隨訪時間并不長，所以臨床有效率比較無明顯差異。DC、CIK細胞能促進NK細胞核T細胞增殖，促進細胞因子的分泌，讓外周血NK細胞百分比和CD4+百分比、CD4+/CD8+細胞比值提高，最終對患者免疫功能進行改善[13]，本研究結果也證實了上述觀點。另外，本研究中，試驗組患者在CIK細胞回輸24 h內，僅5例患者發生寒戰、發熱等癥狀，經對癥支持治療后患者癥狀顯著改善；并沒有患者因為CIK細胞回輸而出現腎臟、心臟功能損害。與對照組相比，試驗組治療后的惡心、骨髓抑制Ⅲ～Ⅳ度發生率均明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；結果表明，細胞免疫治療聯合化療的毒副作用比較輕微，具有較高的安全性。

總之，細胞免疫治療聯合化療能讓晚期非小細胞肺癌患者的疾病控制率明顯提高，對其免疫功能進行顯著改善，而且毒副作用比較輕微，具有臨床推廣價值。