含大麻葉提取物的潤唇喱的制備

史利軍，李恒文，陳寶軍，賈玉璽，牟趙杰，倪倍倍

（1.大通漢麻生物科技研究院，山東 青島 266500；2.青島大學附屬醫院 藥學部，山東 青島 266000）

口唇較之身體其他部位，有角質層薄、皮膚含水量少、天然保濕因子較少等特點，更易干裂老化和出現唇紋[1]。目前，亟待開發具有優良唇部皮膚修復功能的唇部護理產品。大麻（Cannabis sativa L.），系桑科大麻屬草本植物，《周禮》記載其為“五谷之首”，有藥用價值[2]。現證明大麻有鎮靜、鎮痛、抗衰老、抗炎和抗氧化等多種生物學活性[3]。近年來，對大麻的研究已成世界熱點，大麻在化妝品領域的應用逐漸興起。大麻非成癮成分大麻二酚（Cannabidiol，CBD） 成為化妝品追捧的成分。我國已批準富含CBD 的大麻葉提取物用于化妝品領域[4]。大麻葉提取物除富含CBD 外，還有大麻酚、大麻色烯、大麻黃酮等成分[5]。Nalli Y 等人[6]研究發現，大麻葉提取物可針對受損肌膚起到重建皮膚保護屏障、改善皮膚自我修復的作用。將大麻葉提取物作為皮膚調理劑，能強化潤唇啫喱的修復功效。介紹一種工業化清潔生產制備含大麻葉提取物的潤唇啫喱的方法，以期為我國大麻葉提取物化妝品的應用和開發提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

液體石蠟、礦脂、氫化共聚物、微晶蠟、辛酸/癸酸甘油三酯、純地蠟、苯氧乙醇、香精、油橄欖果油、泛醇和無水乙醇，所用原料均為分析純試劑或化妝品級產。

LC-2030puls 型高效液相色譜、ATY224 型萬分之一天平，日本島津產品；FW135 型粉碎機、WGLL-45BE 型鼓風干燥箱，天津泰斯特產品；TDZ5 型離心機，赫西產品；YCD-EL260 型冷藏冷凍冰箱，中科美凌冰箱產品。

1.2 潤唇啫喱的制備

1.2.1 含高純度CBD 的大麻葉提取物的制備

大麻葉提取物來源于中國云南合法種植、加工提取的工業大麻（THC<0.3 %），大麻葉提取物中的大麻二酚（CBD） 含量為20%～50%，采用一種工業化清潔生產大麻二酚CBD 廣譜油的方法提取出含高純度CBD 的大麻葉提取物，然后用甘油稀釋，使其CBD 含量稀釋至20%～50%制得，操作要點如下：

（1） 原料預處理。將晾干的工業大麻花葉經振動篩過篩，去除麻籽和麻稈、砂石雜質，經過粉碎機粉碎至10～30 目，得到工業大麻花葉初級原料。

（2） 原料干燥處理。將步驟（1） 得到的初級原料，經過熱風帶式干燥設備干燥0.5～3.0 h，得到水分小于7%的干燥工業大麻花葉原料。

（3） 乙醇提取。對于步驟（2） 得到的干燥花葉原料，置于多功能提取罐內進行乙醇溶劑提取，乙醇與花葉原料的質量比為6∶1，得到一次提取液和殘渣；殘渣按照4∶1 進行二次乙醇提取得到二次提取液和廢渣；殘渣按照2∶1 進行第3 次乙醇提取得到3 次提取液和廢渣；3 次提取液合并得到CBD 萃取液。

（4） 濃縮。將步驟（3） 得到的萃取液進行真空減壓濃縮，得到濃縮液。

（5） 超低溫脫脂脫蠟。按照濃縮液與95%（Vol）食品級乙醇比例1∶5（W/W） 混勻，超低溫冷凍脫脂脫蠟3～8 h，離心分離，過濾得到一級處理液。

（6） 脫色。將一級處理液通過活性炭和大分子樹脂聯合脫色30～60 min，脫色時載樣量為5%～10%，過濾分離，得到二級處理液；二級處理液濃縮得到中間品CBD 濃縮粗油。

（7） 分子蒸餾。將步驟（6） 得到的CBD 濃縮粗油在90～170 ℃條件下進行短程分子蒸餾，使粗油中的CBDA 充分脫羧轉化為CBD，得到CBD 含量25%～35%的CBD 全譜油。

（8） 工業制備色譜分離純化。將步驟（7） 的CBD 全譜油輸送到樣品罐，用1∶1 的無水乙醇調配，然后上高壓色譜層析柱，載樣量（CBD） 30～50 mg/mL，解析洗脫液采用50%～85%的乙醇溶液（Vol），壓力為20～40 bar；通過工業制備高效液相色譜系統精準分離，先用40%～60%的乙醇溶液平衡，再用50%～85%乙醇溶液洗脫5～10 倍柱體積，最后用50%～85%的乙醇溶液洗脫5～10 倍柱體積洗脫目標成分，收集富含目標成分的洗脫液，得到CBD 組分富集液；根據洗脫液中CBD 圖譜，準確把前雜、CBD 組分富集液切到不同的儲罐。

CBD 高峰色譜圖見圖1。

圖1 CBD 高峰色譜圖

（9） 真空濃縮。將步驟（8） 的CBD 組分液真空減壓濃縮，得到CBD 含量為40%～80%的精制CBD 廣譜油。

（10） 將步驟（9） 得到的含高純度CBD 的大麻葉提取物用甘油稀釋，使其CBD 含量稀釋至20%～50%備用。

（1） 設備消毒。將真空乳化鍋和稱量器及所用到的所有設備按照規定的清洗消毒流程清洗消毒后備用。

（2） 原料稱量。按照表1 原料配比稱量各種原料。

（3） 原料混合加熱。將A 相原料投入真空乳化鍋中，攪拌分散均勻后加熱升溫至80～85 ℃，保溫80～85 ℃攪拌30 min，至料體完成溶解，料體呈透明油狀啫喱狀態；然后自然降溫至45 ℃后，投入B相原料，攪拌均勻，保持溫度40～45 ℃，攪拌5 min后，使料體呈透明、較黏稠的油狀啫喱狀態。

（4） 出料。降溫至38 ℃，送檢合格后出料，并檢測半成品外觀、香味，做微生物檢測。

（5） 產品灌裝。料體靜置5 d，微檢合格后，將料體倒入灌裝機進行灌裝，完成含大麻葉提取物的潤唇啫喱的制備。

潤唇啫喱配方見表1。

表1 潤唇喱配方

表1 潤唇喱配方

分類 原料 W/%45 44 A 相液體石蠟礦脂氫化共聚物微晶蠟辛酸/癸酸甘油三酯純地蠟油橄欖果油3331 0.1 B 相香精大麻葉提取物泛醇苯氧乙醇0.1 0.1 0.1 0.6

2 結果與分析

2.1 潤唇啫喱質量檢測

2.1.1 穩定性檢查

根據《化妝品安全技術規范》 （2015 年版），對該潤唇啫喱進行耐寒和耐熱性檢查。結果如下：40±1 ℃，24 h，恢復室溫后，性狀與原樣保持一致，無滲油；-8±2 ℃，24 h，恢復室溫后，性狀與原樣保持一致。其檢測結果符合規范。

2.1.2 衛生指標檢測

按照國家食品藥品監督管理總局發布的《化妝品安全技術規范》 （2015 年版） 對其進行微生物和重金屬的檢測。微生物檢測結果如下：菌落總數<10 CFU/kg，霉菌和酵母菌總數<10 CFU/kg，耐熱大腸桿菌、銅綠假單胞桿菌和金黃色葡萄球均未檢出，微生物和重金屬檢測均符合規范。

重金屬檢測結果見表2。

表2 重金屬檢測結果

2.2 潤唇啫喱綜合評價

隨機選取20 名試用人員，每日早晨8:00 試用潤唇啫喱，試用30 d 后對試用者進行填寫調查問卷，并統計試用者使用舒適度、嘴唇保濕滿意度、嘴唇干裂改善效果、唇紋淡化效果等。結果顯示，該潤唇啫喱舒適性100%，保濕性100%，防干裂有效性100%，其中顯著有效75%；淡化唇紋有效性100%，其中顯著有效85%。

3 結論

目前，工業大麻花葉提取CBD 的主要工業生產方法是有機溶劑浸提和超臨界二氧化碳萃取；CBD的分離純化方法主要為分子蒸餾和樹脂吸附法（工業色譜柱）[7]。工業大麻葉提取CBD 采用的方法是乙醇提取和工業色譜柱分離純化，提取純度高，適合工業化大規模生產。作為工業大麻來源的化妝品原料，大麻葉提取物被在《已使用化妝品原料名稱目錄（2015 版）》中收錄并允許使用。大麻葉提取物有豐富的大麻素活性成分，其中最主要的成分是CBD[8]。因為CBD 對皮膚美容異常的各種藥理作用，多個化妝品牌開始將CBD 添加到化妝品中，包括祛痘、去皺抗衰老、舒緩修護等開發方向[9]。CBD 對皮膚的修復作用主要通過抗氧化、抗炎、激活細胞等機制實現[10]。外界環境使皮膚活性氧（ROS） 累積，導致皮膚損傷，同時也伴隨著炎癥因子分泌的改變和局部炎癥反應[11-12]。NRF2（Nuclear factor erythroid 2-like 2） 和PPAR-γ 負責調節皮膚抗氧化防御系統。HMOX1（Hemeoxygenase1） 是NRF2 的靶基因，有抗炎和抗氧化作用[13]。體外研究發現，CBD 能誘導HMOX1 的表達[14]。大鼠皮膚局部使用CBD 后，觀察到HMOX1 水平的升高及角蛋白16 和17 表達增加[15]。在另一項利用人角質形成細胞的體外研究中，研究者表明CBD 能夠穿透細胞，平衡UVB 照射和過氧化氫引起的氧化應激反應，并保護細胞膜的完整性[16]。

大麻葉提取物除含CBD 外，還富含其他大麻素、黃酮、萜烯類等，可能比CBD 單獨使用發揮更強大的協同抗炎作用。Sangiovanni E 等人[17]研究了大麻葉提取物和CBD 對人角質形成細胞和人皮膚成纖維細胞的影響。使用腫瘤壞死因子-α（tumor Necrosisfactor alpha，TNF-α） 預處理人角質形成細胞后，發現26 個參與炎癥通路的基因表達上調；預處理人皮膚成纖維細胞后，發現16 個傷口愈合相關基因上調。大麻葉提取物能下調上述所有基因，而CBD 僅下調11 個基因，對炎癥和基質重塑起作用的基因沒有表現出任何抑制作用。陳來成等人[18]使用3D 表皮模型（Epikutis R） 也證明了大麻葉提取物通過抑制炎性因子IL-1α、TNF-α 及IL-8 分泌，抑制皮膚炎癥反應，從而在皮膚屏障損傷方面具有修復作用。而該含大麻葉提取物的潤唇啫喱的試用結果也表明其具有優越得防干裂和淡化唇紋效果。CBD作用于人體皮膚中的大麻素受體，發揮保護神經與鎮痛功效，起到舒緩、滋潤、緩解疼痛和修復皮膚屏障的作用[19]。

綜上所述，大麻葉提取物作為皮膚調理劑，具有促進皮膚修復的功能，能有效愈合皮膚創傷，刺激免疫系統和纖維細胞的生長，加速傷口愈合。提供了一種含大麻葉提取物的潤唇啫喱的工業化清潔制備方法。該方法制備的潤唇啫喱使用舒適，保濕效果滿意，解決唇部皮膚干燥干裂問題，修復和淡化唇紋滿意。同時還提供了一種制備含高純度CBD的大麻葉提取物方法，適用于大麻葉提取物的工業化生產，為我國大麻葉提取物相關化妝品的大規模工業化生產提供思路。