動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測技術(shù)現(xiàn)狀

◎ 李改弟，毛麗萍，左 鳳

（涼山州農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，四川 涼山 615000）

1 動(dòng)物源性食品中獸藥殘留現(xiàn)狀及危害

當(dāng)前，食品安全問題越來越受到人們的關(guān)注。食品中的獸藥殘留不僅會(huì)對(duì)人體健康造成危害，而且還會(huì)破壞生態(tài)環(huán)境。在畜禽養(yǎng)殖過程中常用到的獸藥有抗生素、激素、鎮(zhèn)靜劑等，獸藥殘留超標(biāo)的主要原因是養(yǎng)殖戶不合理使用獸藥，部分養(yǎng)殖戶在利益的驅(qū)使下違規(guī)或超量使用藥物，還有養(yǎng)殖戶不注重休藥期，造成動(dòng)物源性食品中獸藥殘留超標(biāo)。獸藥殘留超標(biāo)的另一個(gè)主要原因是獸藥行業(yè)缺乏管理和規(guī)范，市面上隨處可見偽劣藥品。獸藥殘留有致毒、致畸、致突變的作用。例如，受體激動(dòng)劑會(huì)對(duì)人體的腎臟造成一定的損害，長期濫用抗生素會(huì)使人體產(chǎn)生耐藥性，使用激素會(huì)造成兒童早熟、肥胖等一系列問題。由于養(yǎng)殖戶違規(guī)濫用獸藥，動(dòng)物的排泄物中也會(huì)有獸藥殘留，若不經(jīng)過處理就將動(dòng)物排泄物排放到自然界中，就會(huì)污染土壤和水體[1-2]。

2 動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的前處理技術(shù)

由于動(dòng)物源性食品基質(zhì)比較復(fù)雜，目標(biāo)物的檢測殘留量相對(duì)較低，樣品的前處理就顯得尤為重要，樣品前處理是開展檢測工作的基礎(chǔ)和保障?，F(xiàn)階段獸藥檢測前處理主要包括對(duì)目標(biāo)物的提取、分離、凈化，對(duì)于難以提取和檢測到的目標(biāo)物，還要進(jìn)行衍生后再處理。提取是將待測物與其他物質(zhì)分離開，常用到的提取試劑有乙腈、正己烷、乙酸乙酯等，由于大多數(shù)畜禽產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，要進(jìn)行多次提取才能達(dá)到目的。為了減少共提取物的影響，樣品在分析前要進(jìn)行凈化處理。常用的凈化技術(shù)有液液萃取、固相萃取、免疫親和色譜等[3]。

3 動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測技術(shù)

3.1 快速檢測技術(shù)的應(yīng)用

在獸藥殘留快速檢測中，目前最常用的是酶聯(lián)免疫吸附法，酶聯(lián)免疫吸附法是目前化學(xué)分析檢測方面的前沿技術(shù)，是在組織化學(xué)與免疫熒光學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一門科學(xué)。主要是通過在酶的高效催化反應(yīng)作用下產(chǎn)生抗體抗原的免疫顯色反應(yīng)定性定量分析，檢測原理是待測物含量與免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的顏色具有相關(guān)性，可通過顏色的深淺程度達(dá)到定性、定量分析的目的。其優(yōu)勢是操作簡便，成本較低，靈敏度相對(duì)較高，適用于大批量樣品的獸藥檢測，常用于養(yǎng)殖場、屠宰場、肉產(chǎn)品深加工廠等。不足之處是一次只能檢測某種或者某類物質(zhì)，不能多目標(biāo)物檢測。酶聯(lián)免疫吸附法可先定性篩查，再用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法確認(rèn)結(jié)構(gòu)和定量分析[4]。

3.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法是以高壓系統(tǒng)輸送的液體為流動(dòng)相，試樣流經(jīng)色譜柱時(shí)與固定相發(fā)生相互作用，由于試樣中各組分的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)存在差異，各組分與固定相之間的作用力不同，從而實(shí)現(xiàn)分離。高效液相色譜分離分析技術(shù)的準(zhǔn)確性和靈敏度都很高、一次可同時(shí)測定多組目標(biāo)物，現(xiàn)已廣泛用于食品中多種殘留物的定性和定量分析[5]。在獸藥殘留檢測中，高效液相色譜檢測技術(shù)最常用的有兩種，高效液相-紫外吸收檢測技術(shù)和高效液相-熒光檢測技術(shù)。

（1）高效液相-紫外吸收檢測技術(shù)。紫外吸收檢測器是高效液相色譜儀中最常用的檢測器，它有3種類型，分別為可變波長檢測器、固定波長檢測器以及二極管陣列檢測器，在食品獸藥殘留檢測中，由于二極管陣列檢測器成本低、靈敏度高、具有較好的選擇性等特點(diǎn)，它的適用范圍較廣。但由于該法對(duì)可見光吸收的獸藥缺乏敏感性，加上受大多數(shù)復(fù)雜基質(zhì)的影響，易導(dǎo)致假陽性結(jié)果出現(xiàn)[4]。

（2）高效液相-熒光檢測技術(shù)。熒光檢測法相比紫外吸收檢測法有更高的靈敏度和選擇性。對(duì)于不產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，用熒光試劑制成其衍生物后再進(jìn)行測定。由于喹諾酮類具有一定的熒光反應(yīng)，該方法常用于檢測食品中喹諾酮類藥物的殘留，而其他的獸藥則需添加相應(yīng)的衍生環(huán)節(jié)才能進(jìn)行熒光檢測，檢測過程比較復(fù)雜，從而限制了熒光檢測的發(fā)展[6]。

3.3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測技術(shù)的應(yīng)用

由于質(zhì)譜分析具有靈敏度高、樣品用量少、分析速度快以及分離和鑒定同時(shí)進(jìn)行等優(yōu)點(diǎn)，近年來發(fā)展速度很快，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測領(lǐng)域。隨著質(zhì)譜檢測技術(shù)的發(fā)展及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已成為獸藥殘留檢測的主要手段之一。由于其具備質(zhì)譜準(zhǔn)確的定性定量功能，同時(shí)具有液相色譜的分離功能，其靈敏度和選擇性都更高，在檢測中應(yīng)用較為廣泛[4]。

3.3.1 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在磺胺類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

磺胺類藥物是一類用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的藥物。但其有一定的毒副作用，不僅會(huì)影響泌尿系統(tǒng)的功能，還可在尿液中析出，結(jié)晶導(dǎo)致泌尿系統(tǒng)結(jié)石從而損害腎臟功能。因此，為了確保食品安全，磺胺類藥物殘留量檢測已成為我國食品的常規(guī)項(xiàng)目之一。

我國畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留檢測人員逐漸開發(fā)了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測畜禽肉中的磺胺類藥物殘留。高何剛等[7]建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)檢測雞肉中16種磺胺類和15種喹諾酮類獸藥殘留，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，當(dāng)濃度為10.0～500.0 μg·L-1時(shí)，31種獸藥的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均≥0.999 0，當(dāng)加標(biāo)量為50.0 μg·kg-1時(shí)，31種獸藥的加標(biāo)回收率為84.0%～94.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.5%。31種獸藥的檢出限均為 0.10 μg·kg-1，定量限為 0.30 μg·kg-1。通過均質(zhì)提取的辦法，大大提高了提取效率。該檢測方法操作簡單，靈敏度高，選擇性高，可滿足多種磺胺和喹諾酮類獸藥同時(shí)檢測的需求。

3.3.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在喹諾酮類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

喹諾酮類藥物是一類人工合成抗菌藥，對(duì)多種革蘭陰性菌有明顯的殺菌效果，被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)中。但這類藥物的殘留會(huì)對(duì)人體系統(tǒng)等產(chǎn)生不同程度的不良反應(yīng)，損害人體健康。因此，食品中喹諾酮類藥物殘留量檢測非常重要。

羅靜等[8]建立了一種基質(zhì)固相分散-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定雞蛋中14種氟喹諾酮類藥物殘留的方法?；|(zhì)固相分散提取過程中以硅膠為分散劑，氨甲醇溶劑為洗脫劑，其萃取回收率在80%以上。洗脫液濃縮定容后經(jīng)C18柱（50 mm×2.1 mm，1.9 μm）分離，質(zhì)譜采用電噴霧電離、正離子模式（ESI＋），以多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行檢測。方法的線性范圍為0.1 ～ 50.0 μg·kg-1，檢出限達(dá) 0.1 μg·kg-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為8.8%～10.4%。該方法具有快速、簡便和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，特別是雞蛋樣品中多種氟喹諾酮類藥物的高通量分析。

3.3.3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在食品中四環(huán)素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

四環(huán)素屬于廣譜抗生素，其具有殺菌的作用，但也有一定的副作用，常見的副作用是對(duì)肝臟有一定的毒性，患者可能出現(xiàn)脂肪肝變性，抽血化驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶和膽紅素升高。在畜禽產(chǎn)品養(yǎng)殖的過程中，四環(huán)素類藥物是較為常見的添加藥物，其在動(dòng)物體內(nèi)殘留易被人體吸收，帶來不良影響。因此，檢測畜禽產(chǎn)品中四環(huán)素的含量具有重要意義。

劉鎮(zhèn)等[9]建立了石墨烯納米磁顆粒固相萃取-液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測四環(huán)素類藥物的方法。趙琪[10]分析了高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法在食品中四環(huán)素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用，以四環(huán)素、土霉素、金霉素及美他環(huán)素為主要研究內(nèi)容，以牛奶為樣品，采用的檢測方法是C18小柱富集，含4%甲酸的甲醇溶液洗脫，進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用測定。結(jié)果表明，牛奶中四環(huán)素、土霉素、美他環(huán)素檢出限均為0.05 μg·mL-1，金霉素檢出限為0.1 μg·mL-1。經(jīng)過檢測分析，四環(huán)素類藥物的平均回收率為四環(huán)素98.1%、土霉素95.2%、金霉素88.3%和美他環(huán)素86.9%。以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果表示精密度，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為四環(huán)素12.2%、土霉素12.8%、金霉素3.2%和美他環(huán)素15.0%（n=5）。通過研究，證明了液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用在檢測食品中的四環(huán)素類藥物時(shí)有實(shí)際作用，可高靈敏性地檢測出食品中的四環(huán)素類藥物。

4 結(jié)語

在當(dāng)代社會(huì)發(fā)展進(jìn)程中，獸藥殘留檢測技術(shù)已呈現(xiàn)出全新的發(fā)展趨勢。從事食品獸藥殘留檢測的專業(yè)人員，需不斷加強(qiáng)自身專業(yè)技術(shù)的學(xué)習(xí)，提升檢測的準(zhǔn)確度和效率。為保障消費(fèi)者的身體健康及食品安全，相關(guān)部門應(yīng)重視食品中獸藥殘留現(xiàn)象，加強(qiáng)管理和監(jiān)督，保障消費(fèi)者菜籃子的安全。