血清SGK1基因多態性與冠心病患者疾病嚴重程度的相關性及預后分析

孫偉 孫旻 李智

【摘要】 目的：探討與分析血清/糖皮質激素調節激酶（serum/glucocorticoid regulated kinases，SGK）1基因多態性與冠心病患者疾病嚴重程度的相關性及預后分析。方法：選擇2018年8月-2021年1月在大連市第三人民醫院診治的冠心病患者78例作為冠心病組，選擇同期健康體檢人群78例作為對照組，檢測兩組血清SGK1含量與SGK1基因表達水平，同時進行血清SGK1基因多態性分析，調查冠心病患者的疾病嚴重程度、預后并進行相關性分析。結果：冠心病組血清SGK1含量與SGK1基因相對表達水平均低于對照組（P<0.05）。冠心病組SGK1基因 rs2267018位點GG基因型頻率高于對照組（P<0.05），等位基因G頻率高于對照組（P<0.05）。在冠心病組中，平均Gensini評分為（46.28±6.11）分。隨訪到2021年3月，出現主要心血管不良事件21例，發生率為26.9%。相關分析顯示，Gensini評分與SGK1基因rs2267018位點GG基因型、等位基因G、血清SGK1含量、SGK1基因表達水平均呈正相關（P<0.05）。結論：冠心病患者多伴隨血清SGK1表達水平降低，多由于SGK1基因 rs2267018位點基因多態性造成，GG基因型、等位基因G是影響患者疾病嚴重程度的重要危險因素。

【關鍵詞】 冠心病 血清/糖皮質激素調節激酶 基因多態性 疾病嚴重程度 預后 相關性

[Abstract] Objective： To investigate and analyze the correlation between serum/glucocorticoid regulated kinases （SGK）1 polymorphism and disease severity and prognosis in patients with coronary heart disease. Method： From August 2018 to January 2021， 78 cases of patients with coronary heart disease who were diagnosed and treated in the Third People’s Hospital of Dalian were selected as the coronary heart disease group. At the same time， 78 cases of healthy patients were selected as the control group， and the serum SGK1 content and SGK1 gene expression level of the two groups were detected. At the same time， the serum SGK1 gene polymorphism were analyzed， the disease severity and prognosis were investigated， and correlation was analyzed. Result： The serum SGK1 content and the relative expression level of SGK1 gene in the coronary heart disease group were lower than those in the control group （P<0.05）. The frequency of GG genotype at rs2267018 locus of SGK1 gene in coronary heart disease group was higher than that of control group （P<0.05）， and the frequency of allele G was higher than that of control group （P<0.05）. In the coronary heart disease group， the average Gensini score were （46.28±6.11） points. Followed-up until March 2021， there were 21 cases of major adverse cardiovascular events occurred， with the incidence rate of 26.9%. Correlation analysis showed that Gensini score were positively correlated with SGK1 gene rs2267018 locus GG genotype， allele G， serum SGK1 content and SGK1 gene expression level （P<0.05）. Conclusion： Patients with coronary heart disease are mostly accompanied by decreased serum SGK1 expression levels， which are mostly caused by the polymorphism of SGK1 gene rs2267018 locus， GG genotype and allele G are important risk factors that affect the severity of the disease and prognosis.

[Key words] Coronary heart disease Serum/glucocorticoid-regulated kinase Gene polymorphism Disease severity Prognosis Correlation

First-author’s address： The Third People’s Hospital of Dalian， Liaoning Province， Dalian 116033， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.03.040

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（冠心病）是一種嚴重危害人類健康的復雜性疾病[1]。臨床上95%以上為原發性高血壓冠心病，但是具體的發生機制還不明確，其涉及的發病病因有炎癥損傷反應假說、脂肪浸潤學說、受體假說、脂質浸潤假說、血流動力學假說等[2]。高血壓是冠心病的風險因子，其本身又是多基因多因素疾病，有明顯的遺傳易感性，研究顯示，高血壓的遺傳易感性在40%左右，已經鑒定出了一些血壓相關基因位點[3]。血清/糖皮質激素調節激酶（serum/glucocorticoid regulated kinases，SGK）家族基因具有調節腎臟鈉離子轉運的功能，也是醛固酮的下游調節因子，在機體鈉含量平衡、血壓調節、血容量的補充過程中發揮重要的作用[4-5]。SGK基因家族可參與到Th1和Th2細胞介導的免疫應答，并與多種免疫性疾病相關。人類SGK基因家族有SGK1、SGK3、SGK4三個亞型，其中SGK1可調節多種炎癥因子與干擾素的產生，能增強巨噬細胞吞噬凋亡細胞的能力，進而維持體內的平衡[6]。并且其也高表達于巨噬細胞和樹突狀細胞，與其配體相結合，促進T細胞的增殖和活化[7]。SGK1基因存在多種單核苷酸變異位點，常見的研究主要集中rs2267018（A>G）基因多態性位點，基因序列中的A突變為G，導致Taq酶切識別位點的消失，造成其SGK1基因表達水平下降[8]。本研究具體探討了血清SGK1基因多態性與冠心病患者疾病嚴重程度及預后的相關性，以明確SGK1基因多態性的價值。現總結報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年8月-2021年1月在大連市第三人民醫院診治的冠心病患者78例作為冠心病組，選擇同期健康體檢人群78例作為對照組。冠心病組，納入標準：符合冠心病的診斷標準。排除標準：因精神、語言等因素造成調查資料缺乏者;合并嚴重瓣膜性心臟病、惡性心律失常反復發作者;合并嚴重肝腎功能不全、造血功能障礙者;合并惡性腫瘤的患者。對照組，納入標準：身體各系統未發現重大疾病。排除標準：有心腦血管疾病家族史的患者;因精神、語言等因素造成調查資料缺乏者。本研究得到了醫院倫理委員會的批準與所有入選者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血清SGK1基因多態性檢測 抽取兩組外周空腹靜脈血2～3 mL，不抗凝，放置4 ℃冰箱1 h，1 000 r/min離心10 min，取上層血清，采用酶聯免疫法檢測血清SGK1含量。同時取血清學樣本，采用QIAGEN試劑盒提取血清中RNA，逆轉錄獲得cDNA。從NCBI中GENBANK上獲取目的基因SGK1的堿基序列，以GAPDH為內參，進行qRT-PCR檢測。檢測序列特征見表1。PCR循環：95 ℃ 5 s、55 ℃ 30 s，40個循環，采用2-ΔΔCT公式進行SGK1基因相對表達水平計算。SGK1基因rs2267018（A>G）多態性分型檢測由北京博奧生物公司完成，在Agena平臺上嚴格按照實驗操作規程完成。

1.2.2 調查資料 調查所有入選者的一般資料，包括人口學信息、血脂[總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density 1ipoproteincholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（1ow-density lipo proteincholesterol，LDL-C）]等。重點記錄與隨訪冠心病患者疾病的嚴重程度及預后情況。其中疾病嚴重程度以冠脈Gensini評分作為判定標準，對每支冠脈血管病變狹窄程度進行定量評定，總分為152分，分數越高表示疾病嚴重。隨訪到2021年3月，以患者出現主要心血管不良事件作為標準，包括心源性死亡、心肌梗死、血栓形成、靶血管重建等。

1.3 統計學處理 采用EpiData軟件構建信息數據庫，雙人平行錄入信息，使用SPSS 19.0軟件進行分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數數據用率（%）表示，比較采用字2檢驗，采用Pearson及Spearmen相關性分析。以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料對比 兩組性別、年齡、體重指數、TC、TG、LDL-C、HDL-C對比，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表2。

2.2 兩組血清SGK1含量與SGK1基因表達水平對比 冠心病組血清SGK1含量與SGK1基因相對表達水平均低于對照組（P<0.05），見表3。

2.3 兩組SGK1基因多態性對比 冠心病組SGK1基因rs2267018位點GG基因型頻率高于對照組（P<0.05），等位基因G頻率高于對照組（P<0.05），見表4。

2.4 疾病嚴重程度及預后 在冠心病組中，平均Gensini評分為（46.28±6.11）分。隨訪到2021年3月，出現主要心血管不良事件21例，發生率為26.9%。

2.5 相關性分析 在冠心病組中，Pearson相關性分析顯示Gensini評分與血清SGK1含量呈正相關（r=0.496，P=0.010），與SGK1基因表達水平呈正相關（r=0.512，P=0.007）;Spearman相關分析顯示，Gensini評分與SGK1基因rs2267018位點GG基因型呈正相關（rs=0.583，P=0.000），與等位基因G呈正相關（rs=0.672，P=0.000）。

3 討論

目前心血管疾病成為全球導致死亡的主要原因，其中50%以上為冠心病，其特點是脂質聚集和炎癥過程引起的管壁增厚、管腔狹窄等。目前冠心病的具體發病機制還不明確，但是固有免疫系統和適應性免疫系統發揮重要作用，基因因素與環境因素可參與冠心病的發病[9]。近年來有關冠心病易感基因的研究較多，并發現了一系列冠心病相關的易感基因[10]。本研究顯示，冠心病組血清SGK1含量與SGK1基因相對表達水平均低于對照組（P<0.05）。從機制上分析，SGK1是多條信號通路中的關鍵激酶，可參與多種細胞過程，如增殖、轉錄、發育、分化等。而腦缺血再灌注損傷模型機體中SGK1呈現低表達狀況，且與神經功能缺損和病理損傷存在相關性。SGK1也可表達于巨噬細胞，且巨噬細胞又是冠狀動脈粥樣斑塊的主要參與者，為此其可能參與冠心病的發生[11]。腎臟鈉排泄障礙在高血壓形成發展過程中發揮關鍵作用，SGK1可以通過抑制泛素連接酶的表達，使腎集合管上皮細胞鈉通道表達上調，還能抑制腎臟一氧化氮的生成，進而促進鈉的重吸收和鉀的排泄，從而發揮降低血壓的作用。SGK1表達水平下降，可導致上述調控機制失衡，從而導致高血壓的發生[12]。

本研究顯示，冠心病組SGK1基因 rs2267018位點GG基因型頻率高于對照組（P<0.05），等位基因G頻率高于對照組（P<0.05），表明rs2267018（A>G）突變可影響SGK1的表達，從而影響高血壓的發生與發展。從機制上分析，SGK1表達下降可加重動脈粥樣硬化的進展，使得機體內醛固酮水平被抑制，從而可誘發相關心血管疾病的發生[13-14]。同時A>G造成SGK1基因Taq酶切識別位點的消失，使得腎臟鈉排泄障礙，從而可能參與鹽敏感性高血壓的形成[15-16]。

本研究相關性分析顯示，Gensini評分與SGK1基因 rs2267018位點GG基因型、等位基因G、血清SGK1含量、SGK1基因表達水平均呈正相關（P<0.05）。從機制上分析，SGK1是醛固酮的下游調節因子，該基因的表達可促進心臟的正常代謝和功能，抑制其表達可導致長期慢性炎癥反應，引發全身多器官和系統的損害[17-18]，并且其高表達也促進了動脈粥樣硬化的進程，導致冠心病的病情惡化，也不利于患者的預后改善[19-21]。本研究也存在一定的不足，納入分析的指標較少，針對的也是某一區域的特定人群，將在后續研究中擴大樣本分析。

總之，冠心病患者多伴隨血清SGK1表達水平降低，多由于SGK1基因 rs2267018位點基因多態性造成，GG基因型、等位基因G是影響患者疾病嚴重程度及預后的重要危險因素。

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（收稿日期：2021-04-30） （本文編輯：占匯娟）