蛋白基因產物9.5在子宮內膜樣癌中的表達及其與臨床病理特征的關系

曾繁晟 劉蘭蘭 楊晶珍

1.江西省贛州市婦幼保健院病理科，江西贛州 341000；2.江西省贛州市婦幼保健院婦科，江西贛州 341000

子宮內膜癌是女性常見的惡性腫瘤疾病，與其他女性相比，圍絕經期、絕經后的女性更易患此病，平均發病年齡在59 歲， 近幾年發病率逐年上升且趨于年輕化發展[1]。臨床將子宮內膜癌分為Ⅰ型癌（子宮內膜樣癌、黏液癌）和Ⅱ型癌（漿液性癌、透明細胞癌等），其中子宮內膜樣癌的發生與雌激素持續刺激密切相關[2-3]。 患者往往存在陰道異常流血、下腹部隱痛以及貧血、發熱等癥狀，影響患者正常生活和身心健康。為更好地控制病情發展， 需積極探索該疾病的致病基因， 有利于早期診斷和預后。 蛋白基因產物9.5（protein gene product 9.5，PGP 9.5）在多種惡性腫瘤疾病中的表達水平較高，而抑制其表達可有效抑制其病情發展[4]。 目前關于PGP 9.5 表達在子宮內膜樣癌發病和發展相關的研究較少。 本研究探究PGP 9.5 在子宮內膜樣癌組織中的表達水平并分析其與各臨床病理學特征的關系以及作用機制，以便為子宮內膜樣癌的臨床治療提供新思路。

1 資料及方法

1.1 臨床資料

選取2017年1月至2020年12月贛州市婦幼保健院收治的91 例子宮內膜樣癌患者以及20 例健康者作為研究對象。 患者年齡43～73 歲，平均（53.48±10.58）歲。 根據國際婦產科聯盟（Federation Interna tional of Gynecology and Obstetrics，FIGO）制定的關于子宮內膜癌分期標準進行癌癥分期[5]，其中Ⅰ～Ⅱ期患者82 例，Ⅲ期患者9 例，無Ⅳ期患者。 所有患者均接受全子宮（廣泛全子宮）+雙側附件切除術和（或）盆腔淋巴結清掃術，晚期患者手術治療的同時同步進行化療和放療。 本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。納入標準：①年齡＞18 歲；②所有患者均經病理診斷證實；③個人信息以及臨床記錄完整；④患者及其家屬均知情同意。 排除標準：①研究期間接受化療或者放療；②合并其他惡性腫瘤疾病；③合并阿爾茨海默病等精神疾病；④依從性差。

1.2 方法

試劑選擇。 選擇中杉金橋公司提供PGP 9.5 抗體（生產批號20200809），以平滑肌作為陰性對照，以結腸神經叢神經節細胞作為陽性對照。

免疫組化實驗。將子宮內膜樣癌組織標本和正常子宮內膜組織標本處理切片，厚度為4 μm，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行免疫組化染色。將染色切片放在光鏡下隨機觀察3 個視野拍照并保存， 以陽性細胞百分率以及染色強度對免疫組化結果進行半定量分析[6]。 由工作5年以上的病理診斷醫師判讀。PGP 9.5 染色的陽性判讀標準是胞質內出現棕黃色顆粒， 聯合染色強度和陽性細胞數所占百分比進行綜合分級，按染色強度評分[7]：無著色為陰性表達評0 分，淡黃色為弱陽性表達評1 分，棕黃色為中陽性表達評2分，褐棕色為強陽性表達評3 分；按陽性細胞數所占百分比評分[8]：無陽性細胞評0 分，陽性細胞數0～25%評1 分， 陽性細胞數＞25%～50%評2 分，陽性細胞數＞50%～75%評3 分，陽性細胞數＞75%評4分。兩者相加得分，從0～7 分共分8 個級別。 若評分＜4 分則為高表達組，評分≥4 分則為低表達組。 評分＞1 分則鑒定為陽性（圖1～2，封三）。

圖1 PGP 9.5 高表達（免疫組化染色，×40）

圖2 PGP 9.5 低表達（免疫組化染色，×40）

1.3 觀察指標

子宮內膜癌與正常組織PGP 9.5 表達水平、臨床病理特征與PGP 9.5 表達的關系。 ①記錄子宮內膜癌組織和正常子宮內膜組織中的PGP 9.5 表達情況。 陽性率=陽性例數/總例數×100%。 ②根據PGP 9.5 染色后評分， 將子宮內膜癌標本分為高表達組和低表達組，觀察患者年齡、腫瘤直徑、組織學分級、肌層浸潤、宮頸管累及、淋巴結轉移、脈管累及、附件累及、FIGO分期等臨床病理特征與PGP 9.5 表達水平的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析， 計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗；等級資料的比較采用秩和檢驗， 以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 子宮內膜樣癌組織和正常子宮內膜組織中的PGP 9.5 表達情況

免疫組化結果顯示， 正常子宮內膜組織檢測出3例弱陰性，子宮內膜癌組織檢測出38 例陰性，正常子宮內膜組織中PGP 9.5 的陽性表達率明顯低于子宮內膜癌組織，差異有統計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 子宮內膜癌組織和正常子宮內膜組織中的PGP 9.5 表達情況

2.2 子宮內膜樣癌組織PGP 9.5 不同表達水平患者的病理學特征結果比較

根據PGP 9.5 染色后評分，PGP 9.5 高表達組13例，低表達組78 例。兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），兩組患者腫瘤直徑、組織學分級、肌層浸潤、宮頸管累及、淋巴結轉移、脈管累及、附件累及、FIGO 分期比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

子宮內膜樣癌是女性常見腫瘤疾病之一，年齡、絕經時間、月經初潮時間以及雌激素水平均是引起子宮內膜樣癌的危險因素， 且隨著人們生活水平的提高，該疾病發生率也越來越高[9-10]。 患病早期主要通過手術治療， 但發展至中晚期時手術治療并不理想，需輔以化療和放療， 但部分患者可能產生化療耐藥，導致治療效果不理想[11]。 因此需尋求全新的治療手段。子宮內膜癌遺傳基因改變、 生物學行為病理價值、尋求生物治療新途徑以及預防該疾病轉移復發的新方法，均已經成為提高子宮內膜樣癌患者生存率的重要內容[12]。

PGP 9.5 廣泛存在于神經內分泌細胞以及神經元中，由2450 個堿基組成，含有200 多個氨基酸蛋白基因產物。 有研究顯示PGP 9.5 為抑癌基因，但在甲基化的作用下，此基因會過度表達，以至于其抑癌基因功能失效，并且會促進細胞周期蛋白泛素化，導致未分化的細胞不受限制的無序繁殖[13-14]。 研究顯示，PGP 9.5 表達并不依賴于神經分化而處于獨立存在狀態， 其表達與腫瘤疾病病理分期以及手術聯系緊密，例如肺癌、甲狀腺癌、結直腸癌以及膽囊癌等[15-16]。 另外相關研究表明，宮頸癌、非小細胞性肺癌的發生以及發展與PGP 9.5 表達關系緊密[17-18]。 本研究結果顯示，正常子宮內膜組織中PGP 9.5 的陽性表達率明顯低于子宮內膜樣癌組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。說明由正常細胞組織到病變組織，PGP 9.5 表達水平會發生明顯改變。

表2 子宮內膜癌組織PGP 9.5 不同表達水平患者的病理學特征結果比較[n（%）]

本研究結果顯示，兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），兩組患者腫瘤直徑、組織學分級、肌層浸潤、宮頸管累及、淋巴結轉移、脈管累及、附件累及、FIGO 分期比較，差異有統計學意義（P＜0.05），腫瘤直徑越大、組織學分級越高、肌層浸潤程度越深、宮頸管間質累及、淋巴結存在轉移、脈管有累及、附件累及以及FIGO 分期越高，則PGP 9.5 表達水平越高。說明PGP 9.5 表達上調會影響疾病發生和發展，可對其預后情況進行預測。由于子宮內膜樣癌的組織學類型復雜，相同形態內膜癌中可能伴有多種成分，例如小細胞癌、鱗癌、乳頭狀癌等，因此跟組織分型無關。據此猜測PGP 9.5 可能參與腫瘤的侵襲和轉移，且作用較大。 因此可將其作為判斷腫瘤侵襲、轉移以及病情進展的重要指標[19]。 鄧穎輝等[20]對宮頸癌患者進行研究發現，PGP 9.5 在此類疾病患者中的表達水平與其預后有密切聯系。 說明PGP 9.5 可作為預測子宮內膜樣癌發展的一種監測工具，也是判斷預后情況的重要手段。PGP 9.5 在癌細胞中惡性轉化、異常增殖以及穿透基底膜而發生轉移的過程中其發生機制尚未明確，可進行進一步的研究。

綜上所述，PGP 9.5 在子宮內膜樣癌組織、 正常組織中的表達水平存在差異， 說明該蛋白基因產物在子宮內膜組織由正常轉變為子宮內膜樣癌的過程中具有重要調控作用。 PGP 9.5 表達水平越高，腫瘤FIGO 分期越高，患者預后生存較低，因此可將其作為子宮內膜樣癌預后的有效預測指標， 為臨床治療子宮內膜樣癌提供新思路、新方法，可創造一定的社會效益。