秀山地區(qū)特色炮制技術(shù)“十三制”對(duì)香附行氣、活血、化瘀的炮制增效作用

吳文輝，陳明容，商思陽(yáng)，賈 琳，沈 萍

(重慶市中醫(yī)院，重慶 400021)

香附是臨床婦科常用藥，集理氣、降氣、納氣于一身，可行順一身之氣，故有“氣病之總司”的美稱。傳統(tǒng)中藥炮制理論認(rèn)為“生則上行胸膈，外達(dá)皮膚；熟則下走肝腎，外徹腰足；炒黑則止血；得童便浸炒則入血分而補(bǔ)虛；鹽水浸炒則入血分而潤(rùn)燥；青鹽炒則補(bǔ)腎氣；酒浸炒則行經(jīng)絡(luò)；姜汁炒則化痰飲”，《本草綱目》在“香附”條目中列舉所治之病證就有40余種[1]。重慶市秀山土家族苗族自治縣是以土家族、苗族為主的少數(shù)民族自治縣，除此之外還有瑤族、侗族、壯族、白族、回族、滿族、布依族等多個(gè)少數(shù)民族聚居。解放以前該地區(qū)一直習(xí)用一種特殊的香附炮制方法“十三制”，具有鮮明的地域特色和民族特色，常用于婦女產(chǎn)后氣滯血瘀、惡露不盡等，后因炮制輔料及方法復(fù)雜等原因不適合現(xiàn)代化機(jī)械生產(chǎn)而逐漸退出臨床，以至于面臨失傳的危險(xiǎn)[2]。因此，本研究采用現(xiàn)代中醫(yī)證候模型方法，以多因素綜合刺激復(fù)制雌性大鼠氣滯血瘀模型，對(duì)比研究香附經(jīng)“十三制”法炮制前后在臨床上行氣、活血、化瘀的炮制增效作用，為特色中藥炮制技術(shù)的傳承提供研究思路和方法。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，雌性，體質(zhì)量180～220 g，SPF級(jí)，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2019-0004。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

HYC-310S醫(yī)用冷藏箱(海爾)；超低溫冰箱(Thermo)；TGL-18C-C臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭)；AXLM1820-2超純水機(jī)(阿修羅)；LBY-N6Comp- act全自動(dòng)血液流變儀(北京普利生儀器有限公司)；SF-8000全自動(dòng)凝血分析儀(賽科希德)；ZH-AS大鼠聲光電刺激儀(安徽正華)。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

香附原藥材購(gòu)買于重慶桐君閣股份有限公司，經(jīng)重慶市中醫(yī)研究院中藥制劑研究所副所長(zhǎng)楊敏主任中藥師鑒定為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖；小茴香、艾葉、澤蘭、香薷、益智、萊菔子均符合《中國(guó)藥典》(2020年版)一部性狀要求；血府逐瘀膠囊(天津宏仁堂藥業(yè)有限公司，0.4 g×12?！?板/盒，批號(hào)：BL03116)；鹽酸腎上腺素注射液(遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國(guó))有限公司，1 mL：1 mg×10支，批號(hào)：200912)。

2 方法與結(jié)果

香附生品制備：取原藥材，除去毛須及雜質(zhì)，碾成綠豆大粒塊，或潤(rùn)透，切薄片，干燥，篩去碎屑。

“十三制”香附制備：取原藥材適量，將糯稻草灰與東墻土按 1∶10混合，用東流水將此二物調(diào)成稀泥狀，煮沸，待冷。將毛香附投入其中，攪拌均勻，浸泡至翻泡。隨即反復(fù)攪拌去毛，洗凈泥土和鱗毛，低溫烘至五成干。再用童便適量，浸泡過(guò)夜，洗凈，低溫烘至七成干。用小茴香、艾葉、澤蘭、香薷、益智仁、萊菔子共煎汁，濃縮至適量，與童便浸香附共煮至干，低溫烘至九成干。再按糖、姜、鹽、醋四制法制后干透，即得成品。

2.2 供試品溶液制備

2.2.1 血府逐瘀陽(yáng)性對(duì)照液制備 將血府逐瘀膠囊去殼粉碎，臨用時(shí)用0.5%羧甲基纖維素鈉配制成493.60 mg/mL血府逐瘀混懸液(相當(dāng)于成人日服劑量的10倍)[3-5]。

2.2.2 供試品溶液制備 將香附生品和“十三制”品分別粉碎為粗粉，經(jīng)75%乙醇回流提取兩次，每次10倍量，每次提取1 h，后藥渣水回流提取兩次，每次10倍量，每次提取1 h，合并4次提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，用0.5%羧甲基纖維素鈉分別配制成低劑量102.83 mg生藥/mL(相當(dāng)于成人日服10 g劑量)、中劑量3 084.90 mg生藥/mL(相當(dāng)于成人日服10 g劑量30倍)和高劑量6 169.80 mg生藥/mL(相當(dāng)于成人日服10 g劑量60倍)的混懸液。

2.3 不可預(yù)知的慢性聯(lián)合刺激

單一因素腎上腺素注射能在短期內(nèi)造成血瘀模型，方法簡(jiǎn)單，易于操作。多因素刺激更符合中醫(yī)肝郁氣滯、氣滯血瘀的病機(jī)變化特點(diǎn)，但過(guò)程緩慢[6-8]。因此，本研究采用單一化學(xué)藥物腎上腺素聯(lián)合多物理因素(夾尾、冰水浴、束縛、聲光電等)復(fù)制雌性大鼠氣滯血瘀模型，具體影響因素見表1。

表1 物理刺激因素

2.4 造模、分組及給藥

2.4.1 分組及造模 取雌性大鼠72只，隨機(jī)分成空白組、血府逐瘀陽(yáng)性組、模型組、生品組(低、中、高劑量)與“十三制”組(低、中、高劑量)，每組8只。除空白組飼養(yǎng)環(huán)境正常外，其余各組每日皮下注射鹽酸腎上腺素注射液0.9 mg·kg-1后，按照表1進(jìn)行不可預(yù)見性物理刺激，刺激順序隨機(jī)，連續(xù)14 d。

2.4.2 給藥方式 各組大鼠于造模7天后開始給藥，除空白組和模型組灌胃給予等量0.5%羧甲基纖維素鈉溶液外，其余各組給予相對(duì)應(yīng)的藥物，每天1次，給藥劑量為1 mL/100g，給藥前禁食不禁水12 h，持續(xù)8天[9]。

2.4.3 血液流變學(xué)指標(biāo)測(cè)定 最后一次給藥結(jié)束后2 h，給予10%水合氯醛麻醉，采用肝素鈉真空采血管進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，采用全自動(dòng)血液流變儀檢測(cè)血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)，用Westergren法測(cè)定血沉和紅細(xì)胞壓積。

2.4.4 凝血四項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定 麻醉大鼠經(jīng)肝素鈉真空采血管采血一定劑量后，采用檸檬酸鈉(9∶1) 真空采血管采血，采用全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)凝血相關(guān)指標(biāo)。

2.5 結(jié)果

2.5.1 血液流變學(xué) 與空白組正常值比較，模型組大鼠全血黏度(低切3·s-1、中切30·s-1、高切200·s-1)、血漿黏度、紅細(xì)胞沉降率(以下簡(jiǎn)稱血沉)和紅細(xì)胞比容均顯著高于空白組(P<0.01)，說(shuō)明腎上腺素注射聯(lián)合多物理因素刺激可成功復(fù)制雌性大鼠氣滯血瘀模型。給藥干預(yù)后，相較于模型組，香附生品低劑量組、中劑量組和十三制香附低劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但有作用趨勢(shì)；平均全血黏度、血漿黏度、血沉和紅細(xì)胞比容均較模型組低，其中十三制香附低劑量組趨勢(shì)最明顯；而香附生品高劑量組在血沉、血漿黏度和全血黏度(低切)指標(biāo)上較模型組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，說(shuō)明在一定劑量下，香附本身即具有一定的行氣、活血、化瘀作用；“十三制”香附中劑量組和高劑量組均表現(xiàn)出對(duì)模型組大鼠全血黏度(低、中、高切)、血漿黏度、血沉和紅細(xì)胞比容的顯著改善作用(P<0.05)，結(jié)果與陽(yáng)性組相似，說(shuō)明炮制可增強(qiáng)香附藥用作用，并降低起效劑量。見表2。

2.5.2 凝血四項(xiàng) 與空白組相比，此法所復(fù)制氣滯血瘀模型，可導(dǎo)致雌性大鼠凝血四項(xiàng)中APTT和TT顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)IB顯著升高(P<0.01)，PT則無(wú)明顯影響。給藥干預(yù)后，相較于模型組，生品低劑量、中劑量和十三制香附低劑量組無(wú)顯著改善作用，但是有作用趨勢(shì)，均能在一定程度上恢復(fù)紊亂的指標(biāo)；而生品香附高劑量組和“十三制”香附中劑量可顯著降低FIB水平(P<0.05)，說(shuō)明香附本身具有一定的活血化瘀作用，“十三制”法可降低這一作用的起效劑量；十三制香附高劑量組表現(xiàn)出顯著升高APTT和TT，降低FIB(P<0.05)的作用，說(shuō)明炮制能增強(qiáng)香附活血化瘀作用。結(jié)果見表3。

表2 十三制香附對(duì)氣滯血瘀大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)影響

表3 十三制香附對(duì)氣滯血瘀大鼠凝血四項(xiàng)影響

3 討論

聲光電、夾尾、束縛、冰水浴等不可預(yù)知的慢性刺激聯(lián)合腎上腺素復(fù)制雌性大鼠氣滯血瘀證模型，縮短了單純的物理刺激造模時(shí)間，顯著改變了模型大鼠血液流變性和凝血四項(xiàng)指標(biāo)，使血液易于凝固，符合中醫(yī)肝郁氣滯、氣滯血瘀的病機(jī)變化特點(diǎn)。秀山地區(qū)特色炮制技術(shù)“十三制”法在降低全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞比容和FIB水平(P<0.05)，延長(zhǎng)APTT和TT時(shí)間上有顯著的炮制增效作用(P<0.05)。

香附在臨床應(yīng)用上本身即有“婦科之主帥”的美譽(yù)，歷史上其炮制方法也有很多，傳承至今仍有四制的常用復(fù)制法；而“十三制”法尚未在方書本草等古籍中有過(guò)記載，這是重慶市秀山地區(qū)習(xí)用的一種極具區(qū)域和少數(shù)民族特色的炮制技術(shù)。據(jù)傳承人口訴，建國(guó)初期此技術(shù)曾廣泛使用于周邊區(qū)縣，但后因炮制工藝復(fù)雜，不適應(yīng)機(jī)械化生產(chǎn)以及炮制輔料的標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題等再未有臨床使用。本研究通過(guò)中醫(yī)證候模型的建立，研究并證明了此炮制技術(shù)確有炮制增效的作用，值得傳承和保護(hù)。但是，此炮制技術(shù)所使用的炮制輔料，如東墻土、東流水，特別是童便的質(zhì)量控制體系及倫理等有待解決。此外，此技術(shù)所使用的炮制輔料非常多，甚至包含小茴香、艾葉、澤蘭、香薷、益智仁、萊菔子共煮的藥汁，這是否是一種傳統(tǒng)中藥炮制與傳統(tǒng)制劑的結(jié)合，能夠?qū)⑺杏行镔|(zhì)集于香附一身，并以散劑入藥，有待進(jìn)一步驗(yàn)證和深入研究。