五苓散對大鼠膀胱逼尿肌失代償期的肌條修復的實驗研究

武德能?金星

摘要：目的：通過鹽酸坦洛新給予BOO造模大鼠，觀察鹽酸坦洛新對大鼠膀胱逼尿肌失代償期的肌條影響。方法：雄性SD大鼠60只分成5組，即試驗組（鹽酸坦洛新緩釋片）、模型組、空白組。用激素法將試驗組與模型組造模膀胱梗阻失代償期后并灌藥，觀察大鼠逼尿肌條中NGF、bFGF的OD值，探討鹽酸坦洛新是否改善BOO后膀胱逼尿肌功能的生理及病理改變。結果： 試驗組較模型組NGF的OD值降低，P<0.05，有統計學意義，試驗組較模型組bFGF的OD值增加，P<0.05，有統計學意義。結論：鹽酸坦洛新對膀胱梗阻引起的逼尿肌失代償期的肌條損傷后有修復與功能恢復機制。

關鍵詞：鹽酸坦洛新;膀胱出口梗阻;NGF;bFGF

【中圖分類號】 R283 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）08--02

隨著社會的進步、醫學診療水平的提高，我國老年人日趨增多，BPH將成為影響我國老年男性健康的最重要的疾病之一。BPH可導致膀胱出口梗阻（BOO），而梗阻時間較長引起逼尿肌失代償，也就是逼尿肌肌條萎縮并變薄，伸縮功能下降所致，逼尿肌收縮功能嚴重受損后影響膀胱排尿功能，導致膀胱殘余尿增多。將使BPH的BOO癥狀進一步加重。因此本文對鹽酸坦洛新對失代償期大鼠的逼尿肌肌條的效應進行研究，現報告如下：

一、研究方法：

1.1 實驗動物：動物清潔級雄性SD大鼠60只，鼠齡10～12周，體重200～240g，由桂林醫學院實驗動物中心提供。

1.2 造模方法：有關文獻[1]激素法造模：SD大鼠60只適應性喂養7d，編號稱質量，腹腔注射0.2%的戊巴比妥鈉（1mL/kg） 麻醉，仰臥位固定，碘酒、75%酒精消毒。陰囊正中部選為手術切口，長約1-2cm，擠壓出一側睪丸，逐層分離睪丸，于睪丸頭部結扎血管及脂方組織后切除睪丸。確認無出血后將脂肪組織及附睪送回陰囊內。同法切除對側睪丸，逐層縫合。空白組（假手術組）隨機分出15只，操作同前，但不結扎血管、不摘除睪丸。術后青霉素一次5萬單位抗感染。術后觀察飼養一周。除空白組以外大鼠在每天皮下注射丙酸睪酮0.005g/kg，連續給藥20d。

1.3 造模評價：隨機取3只假手術組和3只模型組SD大鼠檢測模型成功與否，頸動脈放血處死動物，仔細分離各葉前列腺，用濾紙吸干，置平皿中加蓋，電子天平稱重，計算前列腺指數 （prostateindex，PI）。之后均取膀胱組織行HE染色，檢測膀胱梗阻失代償期模型[2]成功與否。若不成功，調整藥量，一周后再次評價。

前列腺指數（PI）=前列腺質量（mg）/大鼠體質量（g）

1.4 實驗分組及給藥方法：確定膀胱梗阻失代償期造模成功后，按照隨機分組的原則將造模后的大鼠分成5組，即試驗組（鹽酸坦洛新緩釋片）、模型組、空白組。

參考動物實驗學[3]有關內容計算出SD大鼠一天灌胃劑量，模型組及空白組等量生理鹽水灌胃。

按體表面積直接計算法：大鼠灌胃量=成年人藥物劑量g/kg×成年人體重（70kg）/大鼠體重（200g）×人/大鼠體表折算劑量比值（0.018）

1.5標本提取與指標測定：灌胃治療28天后稱重、取血液并將大鼠斷頸處死解體，血清室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心;切割膀胱后，稱取重量。均取膀胱右側壁頂部尿肌肌條，加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分，離心20分鐘左右。（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

ELISA試劑盒測定方法：應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中NGF及bFGF水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入NGF、bFGF抗原、抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

1.6 統計方法：所有統計用SPSS統計軟件處理，實驗數據以x±s表示，兩兩比較用t檢驗。采用SPSSl9.0統計學軟件單因數方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

1.7數據分析：分析三組離體逼尿肌肌條OD值統計結果差異，三組膀胱逼尿肌肌條中NGF、bFGF的含量濃度有無差異，

二.實驗結果

三、討論：

隨著醫療技術的提高，我國老年化日趨嚴峻，且老年男性健康也是越來越關注的問題，其中BPH是老年男性最重要的疾病之一。BPH所致BOO，是由前列腺腺體增生與及膀胱逼尿肌功能受損等因素引起，前列腺增生的臨床癥狀是由前列腺和膀胱間復雜的相互作用而引起的，主要表現為膀胱刺激癥狀和梗阻癥狀以及梗阻的并發癥[6]，梗阻癥狀有排尿躊躇、排尿費力、排尿時間延長、尿線變細、尿流無力、間斷性排尿、終末余瀝、尿潴留及充盈性尿失禁，逼尿肌收縮功能受損是產生上述癥狀的主要原因。目前認為[16]膀胱出口部分梗阻后引起膀胱逼尿肌功能改變分兩個階段：（1）代償期：為早期癥狀，此期膀胱逼尿肌肥厚，收縮力增強，造成臨床上尿頻、尿急等癥狀;（2）失代償期：因長時間的梗阻可導致膀胱逼尿肌功能受損，進入失代償期，此期膀胱張力下降，逼尿肌收縮力減弱，臨床上可出現尿潴留、上尿路積水等癥狀。失代償期逼尿肌發生離心性肥厚，纖維成分增多致膀胱逼尿肌功能下降，收縮力下降，順應性改變，導致膀胱殘余尿增多，腎功能因此而不同程度受損，即使解除梗阻術后膀胱逼尿肌功能恢復率僅68.9%[17]。BPH通過BOO引起逼尿肌失代償，逼尿肌萎縮變薄，收縮力下降所致。值得注意的是BPH者常引起膀胱壁肥厚，但其逼尿肌收縮功能卻下降[18]。而導致尿肌收縮功能受損，完整的逼尿肌功能是指整個膀胱逼尿肌協同一致，快速而有力的收縮，是排空膀胱的基礎。尿肌收縮功能受損影響膀胱排空功能，導致殘余尿增多。將使BPH的排尿困難癥狀進一步加重。

膀胱梗阻屬祖國醫學“癃閉”的范疇，對于癃閉的病因病機，《內經》中多有論述，《素問·靈蘭秘典論》：“膀胱者，川都之官，津液藏焉，氣化則能出矣。膀胱的生理功能為貯藏尿液，氣化功能正常則能排出尿液。癃閉的基本病機為膀胱與三焦的氣化失常。因此，膀胱氣化功能發生紊亂，則可出現如《素問·宣明五氣篇》所記載“膀胱不利為癃，不約為遺溺”。五苓散乃仲景方，見于《傷寒論》，是臨床上的治療太陽蓄水證的代表方。具有滲濕利水、溫陽化氣的作用，是治療因膀胱氣化失司，引起小便不利諸證的良方。國內外對五苓散的藥理研究頗多，賈氏[12]認為五苓散是臨床治療水濕內停的常用方。根據多年臨床實踐，證明此方既能利水，又能布津，具有雙相調節作用。鄭氏等經試驗發現[13]，五苓散含藥血清可增強正常家兔離體泌尿系平滑肌的張力和活動力。另有資料證明，某些中藥配伍使用可產生協同作用，如五苓散的利尿作用，較其任何單味藥的作用都強[14]。日本學者原中琉璃子等認為[15]，中藥利尿的效果不亞于西藥利尿劑。

五苓散作為主治“太陽經腑同病之蓄水證”的經方，歷經數代而不衰，充分說明其療效的肯定，方含茯苓、豬苓、白術、澤瀉、桂枝五味，具有滲濕利水、溫陽化氣的作用，是治療因膀胱氣化失司，引起小便不利諸證的良方。方中豬苓、茯苓淡滲，通膀胱而利水;澤瀉甘淡性寒，直達膀胱，利水滲濕，泄膀胱之水，使小便通利，正如吳謙《醫宗金鑒·刪補名醫方論》中云：“澤瀉得二苓下降，利水之功倍，小便利而水不蓄矣”;白術健脾氣而運化水濕，脾氣運而九竅通，有溫陽化氣行水之功;桂枝助膀胱氣化而通利小便;諸藥配合，則膀胱利，水濕去。

中醫藥在國內臨床治療BPH應用很普遍，中醫藥在改善BPH癥狀、提高生活質量等方面均具有優勢，中藥的天然藥物特性使不良反應也明顯少于西藥;中藥開發成本的低廉也決定了中醫藥治療BPH的價格優勢。

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