血培養報陽時間聯合PCT檢測在血流感染中的應用價值

譚積善，唐 璐，蒲曉鳳，王 琴，李艷梅，汪 璐，袁春蘭，劉 媛

西部戰區總醫院檢驗科，四川成都 610083

血流感染屬于臨床上最危重的全身性感染，是病原菌進入血液釋放毒素導致[1]，可能會造成感染性休克及多器官功能障礙，其病死率高達50%[2]，而診斷延誤是導致高病死率的重要因素，因此，早期診斷并積極采取治療措施至關重要[3]。診斷血流感染的重要方法是血培養，但是就現階段技術水平來看，血培養常存在無法避免的標本污染情況，這也造成了臨床上誤診和漏診的發生，所以準確辨別感染菌及污染菌是十分必要的。降鈣素原(PCT)常被臨床用于細菌引起的相關疾病的診斷及療效監測，對比其他判斷細菌感染的相關指標，PCT對嚴重的細菌感染，特別是膿毒癥這類疾病診斷快速、特異度高，其診斷結果有一定的參考價值[4]。本研究對血培養陽性標本的菌群分布、報陽時間以及PCT水平進行了分析，旨在判斷血培養聯合PCT在血流感染中的應用價值，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1標本來源 選取2016年8月1日至2018年7月31本院臨床科室送檢的血培養結果為陽性，同時還進行了PCT檢測的標本，共426份為研究對象。

1.2儀器與試劑 VIDAS全自動免疫檢測系統，BacT/ALERT 3D全自動血培養儀，VITEK2-Compact全自動細菌鑒定及藥敏分析儀及其配套試劑，所有儀器均購買自法國生物梅里埃公司。細菌鑒定及藥敏試驗質控菌株包括大腸埃希菌ATCC 25922(美國模式培養物集存庫)，金黃色葡萄球菌ATCC 29213、陰溝腸桿菌ATCC 700323、腐生葡萄球菌ATCC BAA750(中國工業微生物菌種保藏管理中心)。

1.3方法 血清PCT水平檢測采用的方法為酶聯熒光分析法。按照血培養操作規范進行標本的采集與培養，在患者出現發熱時，立即抽取5～10 mL靜脈血并注入配套的無菌血培養瓶內(1套血培養包含需氧瓶1個及厭氧瓶1個)，然后將培養瓶放入BacT/ALERT 3D全自動血培養儀進行孵育、混勻，同時進行連續不斷的檢測。如果在該檢測過程中有陽性標本出現，則利用血瓊脂平板及麥康凱平板對細菌進行分離純化，必要時還可以加種巧克力平板和沙保弱瓊脂平板，隨后通過VITEK2-Compact全自動細菌鑒定及藥敏分析儀進行菌株鑒定和藥敏試驗，具體的操作步驟根據廠家說明書進行。記錄血培養報陽時間、細菌種類及藥敏試驗結果。

1.4判斷標準 血培養陽性標準是培養出菌株并鑒定出菌株的種類；PCT>0.5 ng/mL為全身細菌感染，PCT在0.05～0.5 ng/mL為不明確，PCT<0.05 ng/mL為污染。

1.5統計學處理 采用SPSS21.0、WHONET5.5軟件進行數據處理。不符合正態分布的計量資料用M(P25,P75)表示；計數資料以例數或率表示。

2 結 果

2.1病原菌血培養報陽時間及構成比分布 檢出的病原菌中占比最高的是腸桿菌目細菌，有190株(44.6%)，主要為大腸埃希菌(124株)及肺炎克雷伯菌(43株)；其次是凝固酶陰性葡萄球菌51株(11.97%)。病原菌血培養報陽時間最短的是金黃色葡萄球菌，為15.50(15.00,39.12)h，其次為腸桿菌目細菌，為18.26(14.62,24.04)h，肺炎鏈球菌/無乳鏈球菌為19.21(14.42,35.74)h，銅綠假單胞菌為19.25(17.30,23.00)h，鮑曼不動桿菌為19.95(12.78,20.75)h。見表1。

表1 病原菌血培養報陽時間及構成比

2.2病原菌血培養不同報陽時間標本的PCT檢測結果 報陽時間<72 h的177株腸桿菌目細菌中，PCT>0.5 ng/mL有148株(83.62%)；報陽時間<72 h的33株銅綠假單胞菌中，PCT>0.5 ng/mL有25株(75.76%)；報陽時間<72 h的11株鮑曼不動桿菌中，PCT>0.5 ng/mL有11株(100.00%)，見表2。

表2 病原菌血培養不同報陽時間標本的PCT檢測結果

2.3病原菌耐藥性分析 大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌對氨芐西林的耐藥率都超過了80.00%，而對哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南的耐藥率則低于5.00%；銅綠假單胞菌對復方磺胺甲噁唑、氨芐西林/舒巴坦、頭孢曲松、頭孢唑林、氨芐西林、呋喃妥因、頭孢西丁、阿莫西林/克拉維酸、頭孢替坦、替加環素的耐藥率均是100.00%，但對哌拉西林/他唑巴坦、慶大霉素、阿米卡星、妥布霉素的耐藥率則低于15.00%，見表3。金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌對青霉素G和復方磺胺甲噁唑的耐藥率均已超過90.00%，未檢測出利奈唑烷、萬古霉素、替加環素、奎奴普丁/達福普丁耐藥株，見表4。

表3 主要革蘭陰性菌對常見抗菌藥物的耐藥率(%)

表4 主要革蘭陽性菌對常見抗菌藥物的耐藥率(%)

3 討 論

本院采用BacT/ALERT 3D全自動血培養儀及其配套的血培養瓶對標本進行了培養，其檢測原理：當培養瓶中有微生物生長時，這些微生物代謝過程中會有CO2產生，所產生的CO2會經過半透膜，與底部的NOVEL/CO2感應器發生反應，從而使感應器出現顏色變化，通過光電系統對其進行分析來判斷血培養結果[5]。本研究共分離出病原菌426株，其中以腸桿菌目細菌最多，共190株，占44.60%，主要為大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌，與相關研究報道的結果基本一致[6-7]。血培養報陽時間和血液標本中的含菌量成反比關系，血液標本病原菌量越多，則報陽時間越短，如血液標本病原菌量少或受皮膚表面正常菌群的污染，則報陽時間就相對較長。不同種類的病原菌生長和繁殖過程所需要的時間并不完全相同[8]，當人體發生血流感染時，其血液中的病原菌量會相對增加，血培養報陽時間會相應縮短。本研究中，血培養報陽時間最短的是金黃色葡萄球菌，為15.50(15.00,39.12)h，其次為腸桿菌目細菌的18.26(14.62,24.04)h。

PCT是一種糖蛋白，但是其沒有任何激素活性，屬于降鈣素的前體物質。健康人體內位于甲狀腺中的C細胞能夠產生微量PCT，但是當人體發生嚴重細菌感染，尤其是出現菌血癥時，血清PCT水平會明顯升高[9]。PCT>0.5 ng/mL時，患者發生全身性細菌感染的可能性極高，因此，PCT是用來評估細菌感染的指標之一，且其在鑒別由細菌感染引起的發熱或非細菌感染引起的發熱中有著十分重要的作用。血培養病原菌報陽時間<72 h的標本有396份，占92.96%，表明血培養3 d內如果未報陽性，患者合并血流感染的可能性較低，因此向臨床初步報告血培養3 d無細菌生長有重要的意義。血培養報陽時間<72 h的腸桿菌目細菌共177株，其中PCT>0.5 ng/mL的有148株(83.62%)，說明當檢測出腸桿菌目細菌時，其很可能是造成血流感染的病原菌；銅綠假單胞菌共33株，PCT>0.5 ng/mL的有25株(75.76%)，提示當檢測出銅綠假單胞菌時，其很有可能是引起血流感染的病原菌；鮑曼不動桿菌11株，均PCT>0.5 ng/mL，提示當檢出鮑曼不動桿菌時，其有很大的可能性是導致血流感染的病原菌；凝固酶陰性葡萄球菌47株，PCT>0.5 ng/mL有14株(29.79%)，提示在血培養過程中，凝固酶陰性葡萄球菌是最常見的污染菌，但與此同時其也是引起血流感染的病原菌之一。當進行血培養時，兩個培養瓶中若有一瓶檢測出凝固酶陰性葡萄球菌，而另一瓶的結果為陰性，且PCT<0.5 ng/mL,可考慮有污染菌污染了培養瓶；如果兩瓶中都檢出了凝固酶陰性葡萄球菌，并且所檢出的凝固酶陰性葡萄球菌的生化特征以及耐藥性均相同，表明其屬于同一種細菌，同時還需要根據患者的一些臨床表現進行辨別，如PCT>0.5 ng/mL,則此時檢出的凝固酶陰性葡萄球菌為致病菌的可能性大,需要進行抗感染治療[10]。當檢測出無乳鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌及新型隱球菌等細菌時，其為污染菌的概率非常低；而芽孢桿菌、草綠色鏈球菌等被檢出時，其是導致血流感染的病原菌的概率也很低。臨床在診斷血流感染時，可依據血培養報陽時間，結合PCT檢測結果進行綜合判斷。

本研究所檢出的主要病原菌對一些常見抗菌藥物的耐藥率差異較大，大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌對氨芐西林的耐藥率都超過了80.00%，而對哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南的耐藥率則低于5.00%；金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌對青霉素G和復方磺胺甲噁唑的耐藥率均已超過90.00%，未檢測出利奈唑烷、萬古霉素、替加環素、奎奴普丁/達福普丁的耐藥株。提示臨床在經驗性用藥的同時應該積極完善血培養，并根據藥敏試驗結果及時調整治療方案，提高血流感染的治療效果。