豬肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)基因的篩選及其表達(dá)特性分析

楊 帥，史明月，李文霞，員佳樂，孫 迪，路 暢，楊 陽，蔡春波，高鵬飛，郭曉紅，李步高，曹果清

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，太谷 030801)

脂肪沉積是一個受多種因素調(diào)控的復(fù)雜過程，脂肪組織尤其是肌內(nèi)脂肪組織對于畜禽肉品質(zhì)的改善有重要影響。肌內(nèi)脂肪(intramuscular fat，IMF)又被稱為大理石紋脂肪組織，位于肌纖維旁及肌束膜結(jié)締組織，主要由甘油三酯(triacylglycerol，TG)和磷脂構(gòu)成，其含量影響肉的嫩度、多汁性和風(fēng)味，IMF含量低會導(dǎo)致肉質(zhì)口感變干[1-2]。豬肉IMF含量在2.0%～3.0%時，胴體瘦肉率適中，肌肉呈現(xiàn)較為理想的大理石紋，嫩度顯著提高，口感也有所改善[3-4]。豬IMF含量受遺傳、環(huán)境因素、營養(yǎng)水平等多種因素影響。其中，遺傳因素對不同品種IMF含量起決定性作用，涉及脂質(zhì)和碳水化合物代謝、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、刺激反應(yīng)及組織的基因表達(dá)水平等多種調(diào)控途徑[5-6]。 脂肪細(xì)胞作為脂肪組織的主要組成單位，其增殖和分化在脂肪沉積過程中具有重要作用[7]。

轉(zhuǎn)錄組測序可精確獲得某一物種在特定條件下所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的表達(dá)狀況[8]。利用高通量測序計算mRNA表達(dá)量，結(jié)合生物信息分析可高效獲得性狀相關(guān)基因的表達(dá)模式與功能差異[8]。目前，轉(zhuǎn)錄組測序已廣泛應(yīng)用于畜禽重要經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的分子機理研究。Muoz等[9]通過對伊比利亞豬背最長肌進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，獲得了VDR、ATF6、ARID5B、CREB1、SP1 5個參與脂肪形成的調(diào)控因子。Xu等[10]比較約克夏豬和魏豬背最長肌轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)，篩選到717個差異表達(dá)基因，獲得了FABP3、PDK4、ACSL1和UCP3共4個與脂肪代謝相關(guān)的候選基因。吳垚群等[11]對松遼黑豬和長白豬背最長肌進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析，篩選獲得DGKα、FGF1、BTD、HLCS、LPIN1、FGFR1和ZNF7共7個參與脂質(zhì)代謝的候選基因。

馬身豬是山西省地方優(yōu)良豬種，分布于山西北部偏寒地區(qū)，體質(zhì)健壯，抗逆性強，肉品質(zhì)好；大白豬為引進(jìn)品種，瘦肉率高，生長速度快[12]。Zhao等[13]研究表明，相同飼養(yǎng)管理水平下，馬身豬終末體重低于大白豬，但背部皮下脂肪厚度和IMF含量高于大白豬，且肌內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)量多，成脂終末分化能力強。目前，關(guān)于馬身豬和大白豬IMF含量差異形成的分子機理尚未明確。本研究以馬身豬和大白豬為試驗動物，基于轉(zhuǎn)錄組測序比較兩品種背最長肌差異基因，通過GO、KEGG和GeneCards等生物信息學(xué)分析，篩選可能影響IMF沉積的差異基因，并對其表達(dá)特性進(jìn)行分析，為闡明馬身豬和大白豬IMF沉積差異機理和改善肉品質(zhì)提供一定的理論借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 180日齡馬身豬(MS)與大白豬(LW)均由山西省大同市種豬場提供。選取健康的馬身豬和大白豬各3頭，相同條件下飼養(yǎng)，于180日齡時屠宰。分別采集同一部位背最長肌組織、腹部和背部皮下脂肪組織，凍存管分裝后置于液氮中凍存，隨后于-80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｘi肌內(nèi)脂肪細(xì)胞由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物遺傳育種實驗室提供。

1.1.2 主要試劑及儀器 TRI Reagent?購自Sigma公司；TruSeqTMStranded Total RNA Library Prep Kit購自Illumina公司；ReverTra Ace qPCR RT Master Mix試劑盒、AceQ?Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒均購自南京諾唯贊生物科技有限公司；油紅O染色液購自北京索萊寶科技有限公司。全自動樣品快速研磨儀(JXFSTPRP-24L)購自上海凈信有限公司；BIO-CFX熒光定量PCR儀(BIO-CFX96 Touch)購自Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序及原始數(shù)據(jù)質(zhì)控 使用TRI Reagent?提取背最長肌組織樣總RNA。使用TruSeqTMStranded Total RNA Library Prep Kit將質(zhì)量合格的RNA分別混池，構(gòu)建鏈特異性文庫。使用Illumina HiSeq 2500平臺完成高通量測序[14]。

1.2.2 差異基因篩選與分析 基于FPKM(Fragments Per Kilobase of transcript per Million fragments mapped)值，參考錯誤發(fā)現(xiàn)率(false discovery rate，F(xiàn)DR)和差異倍數(shù)(FoldChange，F(xiàn)C)，利用Edge R包進(jìn)行基因差異表達(dá)分析，設(shè)置閾值為FDR<0.05和log2|FoldChange|≥1；利用PheatMap R包分析樣品間差異基因的分布；利用Cluster Profiler R包進(jìn)行GO功能富集分析；利用OmicShare云平臺進(jìn)行KEGG通路注釋；利用GeneCards查詢差異基因功能。

1.2.3 肌內(nèi)脂肪細(xì)胞培養(yǎng)及成脂誘導(dǎo) 復(fù)蘇豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞，待細(xì)胞密度達(dá)99%時，在生長培養(yǎng)基中添加100 μmol/L吲哚美辛、5 μmol/L胰島素、0.5 mmol/L IBMX和1 μmol/L DEX誘導(dǎo)成脂分化；48 h后，更換生長培養(yǎng)基，并添加5 μmol/L胰島素；分別收集成脂分化0、1、3、5及7 d的細(xì)胞樣品，油紅O染色依據(jù)試劑盒要求進(jìn)行，染色結(jié)束后利用倒置顯微鏡觀察拍照。

1.2.4 反轉(zhuǎn)錄及引物設(shè)計 分別提取2個品種豬背最長肌組織，背部和腹部皮下脂肪組織，以及成脂分化0、1、3、5、7 d的肌內(nèi)脂肪細(xì)胞總RNA。使用ReverTra Ace qPCR RT Master Mix試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩Ｔ贜CBI上查找目的基因mRNA序列，并設(shè)計實時熒光定量PCR引物，引物信息見表1。引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

表1 引物序列信息

1.2.5 實時熒光定量PCR分析 以β-actin為內(nèi)參基因，使用AceQ?Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒和BIO-CFX熒光定量PCR儀檢測差異基因的表達(dá)量。PCR擴(kuò)增體系10 μL：模板cDNA 1 μL，SYBR qPCR Master Mix 5 μL，上、下游引物0.8～1 μL，RNase-free ddH2O補足體系。PCR擴(kuò)增程序：95 ℃ 30 s；95 ℃ 10 s，退火(退火溫度見表1)20 s，共45個循環(huán)；95 ℃ 20 s，60 ℃ 30 s，95 ℃ 15 s，采集熔解曲線。每個樣本取3個生物學(xué)重復(fù)，基因相對表達(dá)水平采用2-△△Ct法計算。

1.3 統(tǒng)計分析

采用SPSS 21.0軟件的單因素方差分析和獨立樣本t檢驗分析差異顯著性。結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05表示差異顯著;P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 差異表達(dá)基因篩選及聚類分析

基因表達(dá)水平基于FPKM值衡量，共篩選到280個差異表達(dá)基因。馬身豬相對于大白豬，有152個基因表達(dá)下調(diào)，有128個基因表達(dá)上調(diào)(圖1)。隨機挑選35個基因進(jìn)行層次聚類分析，結(jié)果表明，馬身豬和大白豬各自的3個生物學(xué)重復(fù)樣本高度聚類，樣品間相關(guān)性較高(圖2)。上調(diào)和下調(diào)基因明顯分為2個基因簇，且分布與測序結(jié)果吻合，表明所用樣本分組合理，重復(fù)性較好。

圖1 差異表達(dá)基因火山圖Fig.1 Volcano plot of differentially expressed genes

圖2 35個差異表達(dá)基因聚類分析Fig.2 Cluster analysis of 35 differentially expressed genes

2.2 差異表達(dá)基因GO功能富集分析

由圖3可知，被注釋到的差異表達(dá)基因共參與了46個GO條目，在生物過程(biological process，BP)、分子功能(molecular function，MF)和細(xì)胞組分(cellular component，CC)分類中，包含的亞類分別為24、8和14個。在生物過程分類中，參與細(xì)胞過程、代謝過程和生物過程調(diào)控的差異表達(dá)基因最多，分別為138、111和112個，與肉品質(zhì)相關(guān)聯(lián)的發(fā)育過程也有差異表達(dá)基因被注釋；在分子功能分類中，結(jié)合和催化活性占比最高，富集的差異表達(dá)基因數(shù)為152和69個，其次是分子功能調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄活性調(diào)節(jié)和抗氧化活性等；在細(xì)胞組分分類中，差異表達(dá)基因主要參與細(xì)胞、細(xì)胞部分和細(xì)胞器，數(shù)目分別為143、143和118個。其中，富集于脂質(zhì)代謝相關(guān)生物過程的GO條目中共有13個差異表達(dá)基因(表2)。

2.3 差異表達(dá)基因KEGG通路富集分析

KEGG通路富集分析表明，差異表達(dá)基因顯著富集到12條信號通路，選取前10條顯著KEGG通路進(jìn)行展示，其中，TGF-β信號通路(5.1%)為上調(diào)差異表達(dá)基因富集最多的通路，PI3K-Akt信號通路(2.3%)為下調(diào)差異表達(dá)基因富集最多的通路(圖4)。PPAR信號通路、MAPK信號通路、脂肪細(xì)胞因子信號通路與IMF沉積相關(guān)，包括PLIN5、SLC27A6、FABP3、TRAF2、SOCS3、DUSP1和NR4A1等基因(表3)。

2.4 脂肪沉積相關(guān)差異表達(dá)基因鑒定及其在2個品種豬不同部位脂肪組織中的表達(dá)特性

利用GeneCards在線數(shù)據(jù)庫對上述基因的功能進(jìn)行分析，共篩選獲得TRAF2、DUSP1、ACOT4、NR4A1、SLC27A6和PLIN5 6個與脂肪沉積相關(guān)的基因(表4)，其中，ACOT4、SLC27A6、PLIN5基因為上調(diào)基因，TRAF2、DUSP1、NR4A1基因為下調(diào)基因。實時熒光定量PCR分析結(jié)果表明，在2個品種豬背最長肌中，馬身豬NR4A1和DUSP1基因表達(dá)量顯著或極顯著低于大白豬(P<0.05；P<0.01)，而馬身豬PLIN5基因的表達(dá)量極顯著高于大白豬(P<0.01)，TRAF2、ACOT4和SLC27A6基因在2個品種豬背最長肌中的相對表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)(圖5)。

NR4A1和PLIN5基因在馬身豬背部皮下脂肪組織中的表達(dá)量極顯著低于腹部皮下脂肪組織(P<0.01)，DUSP1基因表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)；在大白豬背部皮下脂肪組織中，NR4A1、DUSP1和PLIN5基因表達(dá)量極顯著或顯著高于腹部皮下脂肪組織(P<0.01；P<0.05)。2個品種相比，大白豬背部皮下脂肪組織NR4A1、DUSP1和PLIN5表達(dá)量極顯著高于馬身豬(P<0.01)，腹部皮下脂肪組織NR4A1和DUSP1基因表達(dá)量顯著高于馬身豬(P<0.05)，PLIN5基因表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)(表5)。

圖3 差異表達(dá)基因GO功能富集分析Fig.3 GO function enrichment analysis of differentially expressed genes

表2 脂質(zhì)代謝相關(guān)GO條目

圖4 差異表達(dá)基因KEGG通路富集Fig.4 KEGG pathway enrichment analysis of differentially expressed genes

表3 脂質(zhì)代謝相關(guān)KEGG條目

表4 脂代謝相關(guān)基因

*，差異顯著(P<0.05)；**，差異極顯著(P<0.01)；ns，差異不顯著(P>0.05)。表5同*，Significant difference (P<0.05)；**，Extremely significant difference (P<0.01)；ns，No significant difference (P>0.05).The same as table 5圖5 馬身豬和大白豬背最長肌差異表達(dá)基因相對表達(dá)量Fig.5 Relative expression of differentially expressed genes in longissimus dorsi muscle between Mashen and Large White pigs

表5 差異表達(dá)基因在2個品種豬背部和腹部皮下脂肪組織中的相對表達(dá)量

續(xù)表

2.5 脂肪沉積相關(guān)差異表達(dá)基因在肌內(nèi)脂肪細(xì)胞成脂分化過程中的表達(dá)特性

利用實時熒光定量PCR分析脂肪沉積差異表達(dá)基因在豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞成脂分化過程中的表達(dá)特性(圖6)，結(jié)果顯示，隨著成脂分化的進(jìn)行，NR4A1基因表達(dá)量呈降低趨勢，與0 d相比，成脂分化1～7 d表達(dá)量顯著降低(P<0.05);DUSP1和PLIN5基因表達(dá)量呈上升趨勢，且在第5天表達(dá)量明顯升高，顯著高于0 d(P<0.05)(表6)。

圖6 豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞(A)及脂滴油紅O染色(B)(40×)Fig.6 Porcine intramuscular adipocytes (A) and lipid oil red O staining (B)(40×)

表6 成脂分化過程差異表達(dá)基因表達(dá)變化

3 討 論

IMF是影響豬肉品質(zhì)的主要因素之一，脂肪組織的形成是包括脂肪分解和脂肪生成的動態(tài)過程。本研究基于IMF含量差異較大的馬身豬和大白豬的背最長肌轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)篩選差異表達(dá)基因，通過對差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析，篩選出與脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因，結(jié)合利用GeneCards對相關(guān)基因功能查詢的結(jié)果，獲得了TRAF2、DUSP1、NR4A1、SLC27A6、PLIN5和ACOT4共6個與脂肪沉積相關(guān)的基因。其中，NR4A1、DUSP1及PLIN5基因在馬身豬和大白豬背最長肌中的表達(dá)量存在顯著差異，而TRAF2、ACOT4和SLC27A6基因表達(dá)量在兩品種間差異不顯著，推測NR4A1、DUSP1及PLIN5基因是影響豬IMF沉積的候選基因。

NR4A1是NR4A亞家族成員，常作為轉(zhuǎn)錄因子參與相應(yīng)基因的表達(dá)，也可與同家族成員NR4A2和NR4A3協(xié)同作用于細(xì)胞增殖、分化和代謝等過程[15-16]。NR4A1間接上調(diào)p53表達(dá)水平，抑制固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1(sterol regulatory element binding transcription factor 1，SREBP1)及其下游脂肪生成相關(guān)酶脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS)、硬脂酰輔酶A去飽和酶1(stearoyl-CoA desaturease1，SCD1)和甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶線粒體(glycerol-3-phosphate acyltransferase mitochondrial，GPAM)的表達(dá)，降低機體TG含量[17]，也可與GATA結(jié)合蛋白2(GATA binding protein 2,GATA2)直接互作抑制過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma，PPARγ)表達(dá)，抑制脂肪細(xì)胞成脂分化[18]。趙偉明等[19]研究發(fā)現(xiàn)，安格斯牛背膘脂肪NR4A1基因表達(dá)量低于西門塔爾牛，而安格斯牛IMF含量顯著高于西門塔爾牛，表明NR4A1基因表達(dá)量低有利于IMF沉積。本研究中，脂肪型豬種馬身豬背最長肌中NR4A1基因表達(dá)量顯著低于瘦肉型豬種大白豬，而馬身豬IMF含量顯著高于大白豬[13]，說明NR4A1可抑制豬IMF沉積，與前人研究結(jié)果一致[17-19]。在脂肪前體細(xì)胞成脂分化過程中，隨著成脂分化的進(jìn)行，NR4A1基因表達(dá)量逐漸降低，進(jìn)一步表明NR4A1基因?qū)Τ芍只鹭?fù)調(diào)控作用。大白豬背部皮下脂肪組織中NR4A1基因表達(dá)量高于腹部皮下脂肪組織，而馬身豬中呈相反趨勢，可能與豬種的經(jīng)濟(jì)類型及不同部位脂肪組織的細(xì)胞組成及成脂機制有關(guān)，具體原因仍需進(jìn)一步研究。

DUSP1作為磷酸酶，主要通過蘇氨酸、酪氨酸殘基選擇性滅活胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERKs)、p38和c-Jun N-端激酶(c-Jun N-terminal kinases，JNKs)3種MAPK信號的活性[20]。相關(guān)研究表明，抑制ERK1/2磷酸化，能夠促進(jìn)PPARγ和CCAAT增強蛋白結(jié)合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein alpha，CEBPα)的表達(dá)，促進(jìn)TG和脂肪酸結(jié)合蛋白(fatty acid binding protein 2，Ap2)的積聚，正調(diào)控成脂分化過程[21]。但也有研究發(fā)現(xiàn)，ERK1/2信號在成脂分化過程中存在正負(fù)調(diào)控，p38信號也存在正負(fù)調(diào)控[22]。而以JNK為核心的JNKs信號被抑制后，成脂關(guān)鍵基因CEBPα轉(zhuǎn)錄活性升高，Ap2表達(dá)量增加，促進(jìn)成脂分化過程[23]。Li等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在高背脂和低背脂沂蒙黑豬肝臟中與氧化應(yīng)激相關(guān)的DUSP1基因存在差異表達(dá)，而肝臟中的氧化應(yīng)激能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，顯著影響豬IMF沉積。本研究中，DUSP1基因在馬身豬中的表達(dá)量低于大白豬，在大白豬背部和腹部皮下脂肪組織中的表達(dá)量存在顯著性差異，而在馬身豬兩種脂肪組織中表達(dá)差異不顯著，表明DUSP1基因的低表達(dá)有利于馬身豬的脂質(zhì)沉積，可將DUSP1作為影響脂質(zhì)沉積的候選基因。但在肌內(nèi)脂肪細(xì)胞成脂過程中，DUSP1基因表達(dá)呈明顯上升趨勢，這與活體表達(dá)情況不一致。DUSP1基因主要通過MAPK信號發(fā)揮功能，其對成脂過程的調(diào)控除了受遺傳因素影響外，在個體水平還受年齡等因素影響，且在不同發(fā)育階段功能不同，從而導(dǎo)致其在細(xì)胞和個體水平表達(dá)的不一致。

PLIN5是一種覆蓋于細(xì)胞脂滴表面的磷蛋白，多分布于心臟、肝臟、棕色脂肪和骨骼肌等脂肪酸氧化代謝活躍的組織，調(diào)節(jié)相應(yīng)組織的脂質(zhì)代謝過程[25]。PLIN5作為關(guān)鍵脂滴蛋白受PPARγ調(diào)控，通過降低脂肪酸氧化或抑制TG脂解，促進(jìn)機體內(nèi)脂質(zhì)的沉積[26-27]。在小鼠骨骼肌中，缺失PLIN5基因會導(dǎo)致氧化型肌纖維中的TG脂解，加快脂肪酸氧化速率；而過表達(dá)PLIN5基因后，肌細(xì)胞脂滴中TG含量增加[28]。同時，PLIN5也可通過調(diào)控線粒體生物合成和氧化相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)TG水解[29]。Puig-Oliveras等[30]研究發(fā)現(xiàn)，在伊比利亞豬和長白豬背最長肌中PLIN5基因存在差異表達(dá)，且與肌肉脂肪酸代謝相關(guān)。本研究中，隨著成脂分化的進(jìn)行，PLIN5基因表達(dá)明顯升高，與PLIN5基因促進(jìn)脂質(zhì)沉積的功能相一致。在相同飼養(yǎng)條件下，馬身豬背最長肌和腹部皮下脂肪組織PLIN5基因表達(dá)量顯著高于大白豬，也與馬身豬成脂能力強的種質(zhì)特性相吻合。此外，馬身豬主要生活在山西北部高寒地區(qū)，溫度較低，其機體線粒體生物合成與利用高于大白豬，這也有利于其生存和IMF沉積。眾所周知，皮下脂肪與IMF的發(fā)育是相互獨立的，皮下脂肪的過度沉積會導(dǎo)致肉品質(zhì)降低，而IMF含量與肉品質(zhì)呈正相關(guān)，本研究中PLIN5基因在馬身豬背部皮下脂肪的表達(dá)量低于大白豬，這也可能是馬身豬肉品質(zhì)優(yōu)于大白豬的原因之一。

本研究中，TRAF2、ACOT4和SLC27A6基因分別被注釋到脂質(zhì)代謝相關(guān)的GO和KEGG條目，但在2個品種豬背最長肌中表達(dá)量差異不顯著。TRAF2主要通過激活細(xì)胞核因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)信號參與細(xì)胞的增殖、凋亡及免疫應(yīng)答反應(yīng)過程[31]；ACOT4與磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B，p-Akt)/葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(glucose transporter 4，GLUT4)途徑有關(guān)[32]，表明TRAF2和ACOT4的主要功能對IMF沉積影響較小。SLC27A6主要參與機體內(nèi)特定脂肪酸的轉(zhuǎn)運[33]。Chen等[34]研究發(fā)現(xiàn)，在高大理石紋的牛背最長肌中SLC27A6基因表達(dá)水平較高，表明SLC27A6基因參與牛IMF沉積過程。本研究中，在2個品種豬背最長肌中SLC27A6基因表達(dá)量差異不顯著，表明在不同物種中SLC27A6基因?qū)χ境练e的調(diào)控可能存在差異。

4 結(jié) 論

本研究篩選到NR4A1、DUSP1及PLIN5 3個與豬脂肪沉積相關(guān)的候選基因，其中，馬身豬NR4A1基因表達(dá)量顯著低于大白豬，在脂肪細(xì)胞成脂分化過程中其表達(dá)量呈降低趨勢，其對豬脂肪沉積有負(fù)調(diào)控作用；馬身豬PLIN5基因表達(dá)量極顯著高于大白豬，且在脂肪細(xì)胞成脂分化過程中PLIN5基因表達(dá)量呈上升趨勢，其對豬脂肪沉積有促進(jìn)作用；DUSP1基因在馬身豬中的表達(dá)量極顯著低于大白豬，而在脂肪細(xì)胞成脂分化過程中DUSP1基因表達(dá)量呈上升趨勢，其對脂肪沉積的功能在活體和細(xì)胞上表現(xiàn)不同。