日糧添加復合甘草素對肉雞生長性能和免疫功能的影響

劉 莉，郝福星，韓健寶，衣 蕾，胡元亮，武 毅*

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學院，江蘇泰州 225300；2.南京農(nóng)業(yè)大學，江蘇南京 210000）

甘草酸又名甘草甜素，是甘草的主要成分之一，是一種三萜類皂苷，具有抗病毒、抗癌、免疫調(diào)節(jié)和脂質(zhì)代謝等多種活性作用（董永軍等，2008 ；王麗榮等，2004）。正常情況下，甘草酸在甘草根部以無機鹽的形式存在，表現(xiàn)出多種生物活性（楊銳等，2019 ；楊銳等，2016），如甘草酸二銨，可抑制GDF15、AF3 等與細胞凋亡相關(guān)基因的表達，阻斷HMOX1 的信號傳遞，由此可用作新型抗氧化劑，來修復胃病和氧化應激造成的黏膜損傷（衣蕾，2019 ；邵琦等，2016）。除此之外，甘草酸還可較明顯的改善大鼠體內(nèi)的脂質(zhì)代謝，攝入更少的高熱量來降低模型的肥胖率（陸倫根等，2004）。研究還發(fā)現(xiàn)，甘草酸能有效改善小鼠因藥物造成的記憶損傷，并且展現(xiàn)了一定的抗炎和抗氧化作用（刁亞英等，1999）。

為了更深入的了解甘草提取物和磷酸化甘草多糖在體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)作用，本研究以甘草提取物及磷酸化甘草多糖為原料制作復合甘草素，以肉雞作為實驗動物，研究其體內(nèi)活性作用。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 復合甘草素，原料為質(zhì)量比1 ：3的磷酸化甘草多糖和甘草提取物，以鄭州普羅動物藥業(yè)購買的烏茲別克甘草水提取液和甘草分別制作提取。

1.2 試驗材料 多聚甲醛，批號20200418 ；生理鹽水；甲醇（分析純），批號20200922；怡寶純凈水，批號20200910。IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2 和IL-12 ELISA 試劑盒，sIgA 和IL-17 ELISA試劑盒，均購自南京奧青生物科技有限公司。

甘草酸，批號20201021，購自南京道斯夫生物科技有限公司。

1 日齡未免疫健康白羽（817）優(yōu)質(zhì)肉雞，購自南京高淳宏旺養(yǎng)雞專業(yè)合作社。

1.3 疫苗和免疫程序 4 日齡：新- 支二聯(lián)活疫苗2 倍量滴鼻點眼；中牧股份南京藥械廠，批號，20200609。

7 日齡：新- 流二聯(lián)滅活疫苗0.3mL/ 只份，頸背部皮下注射；中牧股份南京藥械廠，批號，20200603。

12 日齡：法氏囊中等毒力活疫苗 2 倍劑量飲水；南京乾元浩生物股份有限公司，批號，20200607。

22 日齡：新城疫-IV 弱毒疫苗 2 倍劑量飲水免疫；南京乾元浩生物股份有限公司，批號，20200607。

1.4 動物分組及處理 試驗選用180 只1 日齡未免疫健康白羽（817）肉雞，隨機分為4 組，每組45 只，常規(guī)免疫新城疫疫苗。其中，3 個試驗組（FGSL、FGSM、FGSH）分別拌料投喂低（1 g/kg）、中（2 g/kg）、高（4 g/kg）濃度的復合甘草素，對照組采用常規(guī)日糧飼養(yǎng)。

1.5 復合甘草素中甘草酸和磷酸化甘草多糖含量的測定 以甘草酸和甘草次酸對照品為標準制作標準曲線，將所用復合甘草素進行處理與其相比對。

1.6 生長性能測定 于7、14、21、28、35 日齡，每組各取5 只稱重，比較各組體重變化。

1.7 新城疫抗體效價的測定 于7、14、21、28、35 日齡，每組各取5 只采血，將血樣置于37 ℃2 h，分離血清，用HA-HI 法測定血清抗體效價。

1.8 血清細胞因子及十二指腸洗液的sIgA 和細胞因子測定 于7、14、21、28、35 日齡，每組各取5 只翼下靜脈采血，分離血清，取5 cm 長的十二指腸，用生理鹽水沖洗3 次，收集洗液，4℃ 8000 r/min 離心10 min，收集上清液。按照ELISA 試劑盒說明測定血清中的IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2 和IL-12 及十二指腸洗液中sIgA 和IL-17的含量。

1.9 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)以“Means±SD”表示，用SPSS 軟件中的單因素方差分析程序進行分析，采用Duncan’s 法進行多重比較。P ＜0.05 表示組間差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 體重變化 由表1 可知，在D7、D21，F(xiàn)GSM組體重顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D14、D28，各組體重無顯著差異（P ＞0.05）；在D35，F(xiàn)GSL和FGSM組的體重高于對照組，但無顯著差異（P ＞0.05）。

表1 各組體重變化

2.2 血清抗體效價的變化 由圖1 可知，在各時間段，試驗組效價最高，D7 各組差異不明顯（P ＞0.05），但D21、D28、D35，試驗組抗體效價均高于對照組（P ＜0.05）。

圖1 血清抗體效價的變化

2.3 血清細胞因子含量的變化

2.3.1 IFN-γ 含 量 的 變 化 由 表2 可 知，在D7，F(xiàn)GSH組 血 清IFN-γ 含 量 顯 著 高 于 對 照組（P ＜0.05）；在D14、D21、D28，F(xiàn)GSL、FGSM和FGSH組血清IFN-γ 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D35，F(xiàn)GSM和FGSH組 血 清IFN-γ 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表2 各組血清IFN-γ 含量的變化 Pg/mL

2.3.2 IL-2 含量的變化 由表3 可知，在D7、D21，F(xiàn)GSL、FGSM和FGSH組 的 血 清IL-2 含量高于對照組，但無顯著差異（P ＞0.05）；在D14，F(xiàn)GSH組的血清IL-2 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D28、D35，F(xiàn)GSL、FGSM和FGSH組血清IL-2 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表3 各組血清IL-2 含量的變化 Pg/mL

2.4 十二指腸洗液sIgA 和IL-17 含量的變化

2.4.1 sIgA 含量的變化 由表4 可知，在D7、D14、D28 和D35，F(xiàn)GSL、FGSM和FGSH組的血清sIgA 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D21，F(xiàn)GSL組與對照組血清sIgA 含量無顯著差異（P ＞0.05），但FGSM和FGSH組血清sIgA 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表4 各組血清sIgA 含量的變化 mg/mL

2.4.2 IL-17 含 量 的 變 化 由 表5 可 知，在D7、D14，各 組 血 清IL-17 含 量 無 顯 著 差 異（P ＞0.05）； 在D28、D35，F(xiàn)GSL、FGSM和FGSH組的血清IL-17 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表5 各組血清IL-17 含量的變化 ng/mL

3 討論

3.1 復合甘草素對肉雞生長性能的影響 研究表明，中藥可通過增強機體免疫力來提高動物的生長性能（王麗榮，2015）。與對照組相比，雖然本試驗肉雞在1 ～35 日齡時肉雞初始體重偏低，復合甘草素在提高肉雞機體免疫力的同時也增強了基礎(chǔ)代謝，但隨著日齡的增加，日糧添加復合甘草素可顯著提高肉雞生長性能。

3.2 復合甘草素對細胞因子的影響 研究表明，細胞因子參與免疫應答與免疫調(diào)節(jié)，通過結(jié)合細胞表面相應的受體來發(fā)揮一系列的作用，血清中的細胞因子含量變化與T 細胞的活化有關(guān)，某些細胞因子能介導細胞免疫（董永軍等，2012）。在本研究中，在各時間段，試驗組中的IFN-α、IFN-β 等細胞因子的含量高于對照組。因此可以發(fā)現(xiàn)，血清中上述細胞因子的含量變化能更深一步的反應動物的免疫水平。

3.3 復合甘草素對免疫器官指數(shù)的影響 法氏囊、胸腺等是雞的主要免疫器官，免疫器官的良好發(fā)育可以為機體提供正常的免疫保護，因此，觀察免疫器官形態(tài)，分析免疫器官指數(shù)，可以很好的反應免疫器官的發(fā)育，更進一步的看出免疫器官的發(fā)育狀況，分析機體免疫水平。本研究結(jié)果展示，F(xiàn)GSH組可以在一定時間提升肉雞免疫器官指數(shù)，進一步提升機體免疫水平。

4 討論

綜上所述，在規(guī)模化養(yǎng)殖背景下，肉雞生長性能和免疫能力直接決定了養(yǎng)殖場（戶）的養(yǎng)殖效益和肉雞存活率。本研究在日糧中添加低（1 g/kg）、中（2 g/kg）、高（4 g/kg）濃度的復合甘草素，可有效改善肉雞生長性能和免疫功能。考慮整個試驗期肉雞的飼料報酬，日糧添加中濃度的復合甘草素效果最佳。