不同HIV檢測試劑盒檢測HIV感染的檢測效能評價*

劉明麗，周靜江

河北省承德市中心血站，河北承德 067000

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一種傳染病，HIV主要通過性接觸、輸血等途徑傳播，可導致全身免疫系統破壞，降低機體免疫能力，誘發感染，也可累及消化、泌尿、呼吸及神經系統，早期診斷、及時治療是防治艾滋病的重要手段[1-2]。近年來HIV檢測技術不斷發展，其準確性也不斷提升。當前臨床常用的HIV檢測試劑主要包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、蛋白印記雜交、反轉錄聚合酶鏈反應等[3-4]。ELISA是用于HIV初篩最經濟、方便的方法，在臨床應用非常廣泛，但臨床數據顯示，不同技術產次、不同廠家的試劑盒檢驗效果存在一定差異，尋找最有效的抗體檢驗試劑盒對于臨床診治工作的開展非常關鍵。本研究以常用的3種HIV檢測試劑盒作為研究材料，對河北省承德市中心血站收集的血液標本進行HIV試劑盒檢測，分析3種試劑盒的檢驗效能及其檢測時間差異。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2020年7月送至河北省承德市中心血站的12 856份血液標本作為研究對象，所有血液標本的分離、保存均按照實驗室規范進行操作。本研究經河北省承德市中心血站倫理委員會批準通過。

1.2儀器與試劑 瑞士全自動加樣儀HAMILTON STAR-8CH，瑞士全自動酶免分析儀HAMILTON FAME24/30。A試劑盒為HIV抗原抗體診斷試劑盒(國藥準字S20080008)、B試劑盒為HIV抗體診斷試劑盒(國藥準字S20030026)、C試劑盒為HIV抗體診斷試劑盒(國藥準字S20020011)；BBI公司陽轉血清盤4套，每套有4～8份血清系列標本；精密度血清盤，共高、中、低3個HIV抗體滴度；核酸擴增技術(NAT)檢測試劑(上?？迫A生物工程有限公司生產)。所有試劑盒均在有效期內進行檢測。

1.3方法

1.3.1ELISA檢測 所用血液標本均使用2種試劑盒進行2次檢測，每批設空白對照孔、陰性對照孔、陽性對照孔、室內質控孔，檢驗結果若存在不同或有反應性的檢測標本進行雙孔復試，檢測有反應性的標本采用NAT對輸血相關傳染病標志物檢測確認。

1.3.2NAT檢測 ELISA檢測陰性標本采用8份份混檢，檢測有反應性的混檢標本拆分單檢。

1.4陽性判斷標準 ELISA試劑盒樣品A值(S)/CO≥1，視為HIV抗原抗體有反應性；S/CO<1，判為HIV抗原抗體無反應性；NAT測定值CT≥50或無數值，且標志物測定值CT<50視為陰性，標志物測定值CT<40視為陽性，單檢反應性即判為陽性。若標志物測定值CT為40～50，進行復試并以復試結果為準。

1.5觀察指標 BBI陽轉血清盤結果分析：比較各試劑在血清盤內檢出首份陽性標本的采集時間與核酸檢測首份陽性時間的差值。精密度檢驗：采用精密度血清盤評價試劑板內精密度，評價指標為變異系數，變異系數為數據標準差與均數的比值。質量控制：本研究所有操作及結果判定均按照試劑盒說明書進行，實驗人員進行美國病理家協會能力驗證血清盤檢測，均滿足實驗需求。誤診率即非HIV患者中被診斷為陽性的概率；漏診率即HIV患者中被診斷為陰性的概率。

2 結 果

2.1不同ELISA HIV檢測試劑盒對陽轉血清盤檢驗結果分析 B試劑盒、C試劑盒檢測HIV的陽轉血清盤，檢測相比于核酸檢測的平均檢測天數相當，分別為(16.25±3.04)、(16.75±3.32)d，A試劑盒對于HIV檢出時間相比于核酸檢測天數最短，為(13.50±3.58)d。見表1。

表1 不同HIV試劑盒的檢測天數比較(d)

2.2不同ELISA HIV檢測試劑盒對研究份群檢測結果分析 12 856份血液標本中共初篩陽性32份，檢出率為0.25%，A試劑盒、B試劑盒、C試劑盒初篩總份數分別為7 256份、9 152份、9 304份，有反應性份數分別為18份、22份、24份；3種試劑盒的檢測誤診率及漏診率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2、3。

表2 3種試劑盒檢測陽性結果比較

表3 3種試劑盒的檢測誤診率及漏診率比較(%)

2.3板內精密度檢驗 與不同抗體滴度質控品進行參比，3種試劑盒平行檢測結果見表4。A試劑盒變異系數S/CO為(6.55±1.88)，CV(%)為(5.18±0.40)%；B試劑盒變異系數S/CO為(4.94±1.60)，CV(%)為(7.28±1.66)%；C試劑盒變異系數S/CO為(6.03±1.39)，CV(%)為(6.33±0.50)%。

表4 各試劑盒變異系數比較

3 討 論

ELISA原理是將待測抗原、抗體固定在固相載體表面，用酶標抗原或抗體與固定抗體或抗原進行特異性反應，加入酶底物進行顯色，再用分光光度計進行顯色情況的觀察，是一種半定量檢測技術[5]。ELISA是當前應用最為廣泛的HIV初篩方法，具有操作簡單、檢測時間短、成本低等優點，對實驗人員的技術要求較低，適用于基層實驗室檢測，對于ELISA有反應性的標本再進行重組免疫印跡、核酸檢測進行驗證[6-7]。

當前HIV檢測時間長是HIV早期診斷的難題，陽轉血清盤是評價HIV早期檢測有效率的重要工具，本研究對商業血清陽轉盤進行檢測發現，A試劑盒檢測平均檢測天數短于C試劑盒、B試劑盒。分析3種試劑盒的特點，B、C試劑盒均由HIV1/HIV2型抗原包被的微孔板及酶標抗體組成。有研究證實，第四代抗原HIV檢測試劑盒固相包被P24抗原可將檢測窗口期提前至2周[8-9]；既往開展的針對獻血者的臨床研究也顯示，血清學檢驗中應用HIV第四代試劑盒可縮短HIV感染檢測的窗口期[10]。

盡管ELISA試劑盒為初篩工具，但其準確度及靈敏度仍關系到HIV患者的有效診治。本研究以血清標本作為對象分析3種試劑盒的診斷效能，結果顯示，3種試劑盒仍存在一定誤診。目前對于第三代及第四代試劑盒對HIV感染檢測效果的評估已有一定報道，沈蕊等[11]開展的一項研究證實，第三代及第四代抗原HIV檢測試劑盒均具有較高的靈敏度及特異度，兩者能較為準確地進行HIV初篩；本研究3種檢測試劑盒診斷效能無差異，提示3種檢測試劑盒均可進行較好的評估[12]；陳明軍等[13]近期針對無償獻血份群血液標本的研究結果顯示，第三代及第四代HIV檢測試劑盒均有較好的檢測性能，第四代HIV檢測檢出率較高，但存在較高的假陽性率；黃秋芳等[14]也證實四代抗原抗體試劑較三代更為靈敏，但特異度較差。分析其原因可能為第四代試劑盒將兩種檢測放在一個實驗內進行檢測，比單純進行抗原或抗體檢測增加了非特異性風險，影響了檢測準確性。另外，不同公司對抗原、抗體兩種成分結合可能存在一定差異，這些均可能造成檢測結果的差異。

本研究的創新點在于使用當前血站系統常用的3種試劑盒(2種是檢測抗體，1種是檢測抗原)，對檢測HIV的診斷效果進行了比較，3種試劑盒診斷效能相當，對在實際工作中早期診斷HIV具有一定價值。當前臨床實際應用中多選用2種試劑盒進行檢測，對于有反應性的標本再進行驗證檢驗，結合本研究，在臨床中將三代及四代檢測試劑聯合進行檢測可能為HIV檢測的最佳組合，既能保證較好的檢測效能，也能縮短窗口期[15-16]。

開展本研究時受科研條件所限，分析指標較少，研究內容不夠深入，目前無法補充數據并增加分析指標，這是本研究的不足之處，在今后的研究中一定增加分析指標，更深入地開展相關研究。