胃癌組織中COX-2蛋白、UHRF1蛋白表達及其與胃癌患者臨床病理特征的相關性分析

張凱 高建華 路志宇 謝元元

(榆林市第一醫院，(1.普通外科二病區；(2.消化內科，陜西 榆林 719000)

研究[1]證實，環氧化酶2(COX-2)在腫瘤的發生、發展中具有重要作用，且在消化道大部分腫瘤中有過度表達。泛素樣含PHD和環指域蛋白1(UHRF1)屬于表觀遺傳學調節因子，主要與細胞生長有關，現有研究[2-3]發現其在喉癌、肺腺癌等腫瘤疾病的發生發展過程具有重要的作用。本文主要探討胃癌組織中COX-2蛋白、UHRF1表達及其與胃癌患者臨床病理特征的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年5月至2019年4月于我院普通外科就診的124例胃癌患者作為研究對象。納入患者符合胃癌相關診斷標準[4]，并經影像學及病理活檢證實者；患者TNM分期：Ⅰ～Ⅳ期；凝血及造血功能正常；未合并其他腫瘤者；患者均經外科手術切除治療，且術前均未行放化療。已排除轉移情況或胃癌分期存在分歧者；既往胃部手術史者；臨床資料不完整，伴有嚴重臟器功能不全、精神性疾病、認知功能以及交流障礙等的患者；出現肝腎肺等遠處轉移，無法耐受手術切除治療者；胸膜粘連、肺膿腫等導致鄰近臟器轉移者；手術未能順利完成或術中切除脾臟者。納入患者中，男95例，女29例；年齡(59.14±6.79)歲；腫瘤≤5 cm 86例，腫瘤>5 cm 38例；局部浸潤深度T1+242例，T3+482例；高分化5例，中分化39例，低分化80例；伴淋巴結轉移63例，無淋巴結轉移61例；臨床病理分期：Ⅰ～Ⅱ期70例，Ⅲ～Ⅳ期54例；病變部位：胃體癌28例，胃食管交界癌96例?；颊呔鶎Ρ狙芯恐橥?，并經我院醫學倫理研究協會同意。

1.2方法 患者均經外科手術切除治療，并于手術中留取距腫瘤邊緣>1 cm處的胃癌組織以及距腫瘤邊緣5 cm處的癌旁組織，常規脫水，石蠟包埋，連續切片(厚度4 μm)。COX-2蛋白及UHRF1蛋白的表達水平均采用免疫組織化學法(SP法)進行檢測，主要試劑包括鼠抗人UHRF1的多克隆抗體及免疫組化染色試劑盒(英國Abcam公司)，鼠抗人COX-2單克隆抗體及免疫組化染色試劑盒(美國Cay-man公司)，DAB顯色試劑盒、SP免疫組化試劑盒、磷酸緩沖鹽溶液(PBS)均由武漢博士德生物工程有限公司提供。實驗步驟參照試劑盒說明書進行，以試劑公司提供的陽性照片作陽性對照。

1.3結果判定 采用雙盲法進行判定，依據每個點的陽性染色細胞構成比和染色強度進行評分和判讀。COX-2的判定：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細胞<5% 0分，陽性細胞構成比為5%～25% 1分，陽性細胞構成比為26%～50% 2分，陽性細胞構成比為51%～75% 3分，陽性細胞構成比為>75% 4分。根據染色強度分值與陽性細胞百分比分值的乘積判定，陰性(-)：0～1分，弱陽性(+)：2～3分，中等陽性(++)：4～6分，強陽性(+++)：6分以上。UHRF1的判定：無色0分，淺黃色1分，淺黃色和棕黃色之間2分，深黃色3分，陽性染色細胞構成比為0為0分，陽性細胞構成比為0%～25% 1分，陽性細胞構成比為25%～50% 2分，陽性細胞構成比為50%～75% 3分，陽性細胞構成比為>75% 4分。根據染色強度分值與陽性細胞百分比分值的乘積判定，陰性(-)：0分，弱陽性(+)：1～4分，中等陽性(++)：5～8分，強陽性(+++)：9～12分。

1.4統計學方法 采用SPSS21.0軟件對數據進行分析，計數資料使用頻數表示，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1COX-2蛋白及UHRF1蛋白 胃癌組織中COX-2蛋白表達陽性率為66.94%，高于癌旁組織的22.58%(χ2=54.669，P<0.05)；HRF1蛋白表達陽性率為65.32%，高于癌旁組織的48.39%(χ2=27.811，P<0.05)。見表1。

表1 COX-2蛋白及UHRF1蛋白在胃癌組織及癌旁組織中的比較[n(%)，N=124]

2.2相關性分析 COX-2蛋白表達與局部浸潤程度、是否淋巴結轉移、臨床分期有關(χ2=8.231、14.09、11.622，P均<0.05)；UHRF1蛋白表達與腫瘤大小、局部浸潤程度、是否淋巴結轉移、臨床分期有關(χ2=11.201、8.788、16.66，P均<0.05)。見表2。

表2 COX-2蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的相關性分析

3 討 論

研究[5]顯示，胃癌在我國的惡性腫瘤發病率中位列第一位，以腺癌較為多見?，F階段胃癌的診斷主要借助于胃十二指腸鏡檢查及病理學檢查，但大部分胃癌患者就診時已處于進展期，分析與胃癌患者相關的生物學標志物對其早期診斷、控制胃癌進展及探討治療靶點均有重要意義。COX是花生四烯酸轉化為前列腺素(PG)過程中的限速酶，也是炎癥發展過程中的一個重要的誘導酶。COX-2屬于COX中與腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移及預后密切相關的同工酶，受COX-2基因的控制，存在于核膜和微粒體膜，研究[6]指出其具有促進腫瘤增殖、腫瘤血管新生等作用，還可以通過誘導腫瘤細胞的侵襲、抑制細胞凋亡等多種途徑參與腫瘤的發生和發展。研究[7]顯示，胃癌組織中COX-2陽性表達率顯著高于癌旁組織，可明顯促進胃癌組織中腫瘤血管新生；本研究得到了與之相似的結果，胃癌組織中COX-2蛋白表達陽性率高于癌旁組織，且卡方分析顯示，COX-2蛋白表達與局部浸潤程度、是否淋巴結轉移、臨床分期有關，進一步說明COX-2蛋白的陽性表達與胃癌細胞的生物學行為、淋巴結轉移等密切相關。

UHRF1屬UHRF超家族成員之一，含有多個功能結構域，是新發現的一種與細胞生長相關的核蛋白基因，可參與機體維持子細胞的DNA甲基化狀態、調控細胞生長及維持基因組穩定、調節淋巴細胞的發育和功能等多種生理及代謝過程，在增殖旺盛的正常組織具有較高表達。UHRF1現已成為某些腫瘤早期診斷和預后評價的重要指標之一，既往研究[8]顯示其在多種腫瘤組織中呈過表達狀態，還能通過調控抑癌基因失活、細胞周期、凋亡等多種過程來影響腫瘤的發生發展。本研究結果顯示，胃癌組織中UHRF1蛋白表達陽性率高于癌旁組織，且卡方分析顯示，UHRF1蛋白表達與局部浸潤程度、是否淋巴結轉移、臨床分期有關，提示UHRF1 在胃癌組織中過表達，且其表達與胃癌發生、發展密切相關。研究[9-10]指出，UHRF1可通過其SRA 結構域結合半甲基化的DNA，并趨化DNA甲基轉移酶到DNA復制的分叉處，催化新合成的DNA鏈發生甲基化，進而調控基因表達。UHRF1可通過增加p16 INK4A 、hMLH1、p21和RB等腫瘤抑癌基因甲基化，從而抑制其表達，最終促進腫瘤的發生發展有關。此外，UHRF1還能調節淋巴細胞的發育和功能，調控細胞生長等，加之UHRF1在維持基因組的穩定性以及細胞中的DNA甲基化方面具有重要作用，一旦機體受到外力侵害或刺激破壞這種維持作用，將觸發多基因的隨機表達，破壞細胞內的穩態，使得細胞凋亡或者細胞周期阻滯，促進腫瘤的發生發展。

綜上所述，胃癌組織中COX-2蛋白及UHRF1蛋白呈過表達狀態，且與胃癌腫瘤大小、局部浸潤程度、是否淋巴結轉移、臨床分期有關。