高效液相色譜法檢測絞股藍茶中的蔗糖含量

◎ 馬 倩，杜 雨

（安康市質量技術檢驗檢測中心，陜西 安康 725000）

絞股藍是一種被人們廣泛認知的藥食同源植物，分布于中國陜西南部和長江以南各省[1]。早期絞股藍作為一種草藥被用于中國民間醫藥中，具有清熱解毒、止咳祛痰的功效，長期喝絞股藍茶可以保護人體臟器及內分泌器官，從而達到降血糖和改善糖代謝的作用[2-3]。

現代人對食品安全的要求不再僅限于吃得好，還要吃得健康。糖是普通食物中的主要成分之一，但是對一些特殊的消費群體，例如糖尿病患者和肥胖癥患者的消費者，他們對糖的攝入量有著嚴格的要求，因此有必要對食物中的糖含量進行檢測，以免消費者誤用[4]。糖類主要包括葡萄糖、果糖、蔗糖等，高效液相色譜技術具備較高的靈敏度，能對碳水化合物進行測定和分析，能對多糖類物質進行準確判定，提高檢測的準確性和科學性，受到檢測人員的青睞[5-6]。

目前，國內外關于絞股藍茶中蔗糖的研究鮮有報道，我國也沒有出臺絞股藍茶中蔗糖含量的測定方法標準。本文使用高效液相色譜法對樣品的前處理條件進行優化試驗，建立了一種高效、可靠的絞股藍茶中蔗糖測定的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市售絞股藍22個樣品。蔗糖標準物質（99.7%，中國計量科學研究院）；色譜純乙腈；分析純亞鐵氰化鉀；分析純乙酸鋅；超純水。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀LC-20T—示差折光檢測器（島津公司）；H1850臺式離心機（湖南湘儀試驗室儀器開發有限公司）；PL-820J智能超聲清洗器（上海五湘儀器儀表公司）；電子分析天平BS-224S（0.1 mg，賽多利斯科學儀器有限公司）；電子天平JA5003（0.001 g， 上海良平儀器儀表有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 標液配制

（1）蔗糖標準物質溶液（20 mg·mL-1）。準確稱取蔗糖標準物質0.5000 g于50 mL燒杯中，加少量超純水溶解，轉移至25 mL容量瓶中，燒杯經超純水少量多次淋洗，淋洗液一并轉移至容量瓶中，用超純水定容至刻度，混勻。4 ℃冰箱保存，有效期一個月。

（2）蔗糖標準物質工作液。配制濃度為0.1 mg·mL-1、 0.8 mg·mL-1、2.0 mg·mL-1、4.0 mg·mL-1、6.0 mg·mL-1、10.0 mg·mL-1標準系列使用液，臨用時現配。

（3）亞鐵氫化鉀溶液。稱取10.6 g亞鐵氫化鉀，用超純水溶解定容至100 mL。

（4）乙酸鋅溶液。稱取21.9 g乙酸鋅，用少量水溶解后，加入3 mL冰乙酸，用超純水定容至100 mL。

1.3.2 樣品制備及前處理

取100 g絞股藍茶樣品，用粉碎機粉碎至粉末狀，裝入樣品袋中，密封，標明唯一性標記。準確稱取均勻絞股藍茶樣品約5.000 g，置于50 mL刻度離心管中，加入大約20 mL超純水，渦旋混勻，超聲提取，冷卻后，加入亞鐵氰化鉀溶液及乙酸鋅溶液后，混勻，定容，離心，取上清液，過0.22 μm微孔濾膜于樣品瓶中，上機檢測。

1.3.3 色譜條件

流動相：乙腈+超純水=70+30，流速：1.0 mL·min-1，柱溫40 ℃，進樣量：20 μL。

色譜柱：氨基的色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），廣州研創生物技術發展有限公司。

示差折光檢測器條件：溫度40 ℃。

1.3.4 樣品前處理條件的優化

（1）超聲時間。在亞鐵氰化鉀溶液、乙酸鋅溶液加入量為各3 mL，轉速8000 r·min-1，離心3 min的條件下，設置超聲時間分別為5 min、10 min、20 min、 30 min、40 min，進行樣品制備。

（2）亞鐵氰化鉀、乙酸鋅溶液加入量。在超聲20 min，轉速8000 r·min-1，離心3 min的條件下，分別設置亞鐵氰化鉀溶液、乙酸鋅溶液加入量為各 0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL，進行樣品制備。

（3）離心轉速。在超聲20 min，亞鐵氰化鉀溶液、乙酸鋅溶液加入量為各2.0 mL，離心3 min條件下，設置轉速分別為3000 r·min-1、5000 r·min-1、 8000 r·min-1、10000 r·min-1，進行樣品制備。

2 結果與分析

2.1 超聲時間優化結果

優化結果如圖1所示，蔗糖含量隨著超聲時間的延長而不斷增加，增加到最高值后基本保持不變。分析其原因，可能是因為超聲時間較短時，蔗糖沒有被完全提取，蔗糖被完全提取后，再增加超聲時間，含量便幾乎不再變化，因此，考慮時間成本以及蔗糖含量，選擇超聲時間為20 min。

圖1 超聲時間優化結果圖

2.2 亞鐵氰化鉀、乙酸鋅溶液加入量優化結果

優化結果如表1所示，亞鐵氰化鉀、乙酸鋅溶液加入量不影響蔗糖含量，隨著加入量的增加，雜質峰有所減少，加入量達到一定程度，雜峰數量幾乎不再變化。分析其原因，可能是因為樣品含有一定量蛋白質，而加入2 mL亞鐵氰化鉀和乙酸鋅時，已將蛋白質完全沉淀，因此，考慮試劑成本，選擇加入量為2 mL。

表1 亞鐵氰化鉀、乙酸鋅加入量優化結果表

2.3 離心轉速優化結果

優化結果如表2所示，離心機轉速大小只與分離效果有關，同等時間，轉速越大，分離效果越佳，考慮離心效果和儀器成本，選擇8000 r·min-1離心3 min。

表2 離心機轉速優化結果表

經上述優化，得到樣品前處理最優流程如下。準確稱取絞股藍茶樣品5.000 g左右，置于50 mL刻度離心管中，加入大約20 mL超純水，渦旋混勻，超聲20 min，冷卻后，加入亞鐵氰化鉀溶液、乙酸鋅溶液各2.0 mL，混勻，定容，以8000 r·min-1的轉速，離心3 min，取上清液，過0.22 μm微孔濾膜于樣品瓶中，上機檢測。

2.4 線性回歸方程

將蔗糖標準使用液依次按照色譜條件上機測定，以標準工作液的濃度為縱坐標（y），以峰面積為橫坐標（x），繪制標準曲線，得到圖2。線性方程為y=239800x+19980，R2=0.9998。

圖2 蔗糖標準溶液校準曲線圖

2.5 方法檢出限與回收率試驗

按照前述方法處理，以未添加蔗糖的絞股藍茶樣品為基質，在同等條件下添加標液含量為0.1 g/100 g、2.0 g/100 g、6.0 g/100 g蔗糖標品，進行3個水平的加標回收試驗，每個水平各重復6次，加標結果見表3。結果表明，依據優化的最佳條件進行試驗，所得的蔗糖的回收率在85.9%～92.3%，RSD在2.19%～3.07%，該方法的檢出限為0.10 g/100 g。

表3 絞股藍茶中蔗糖的加標回收率表

2.6 樣品的檢測與分析

在對市場上的22份絞股藍茶樣品（編號為1～22）檢測后發現，不同絞股藍茶蔗糖含量存在一定的差異，檢測結果見表4。樣品中蔗糖最低含量為未檢出（＜0.10 g/100 g），最高含量為1.9 g/100 g。一些絞股藍茶蔗糖含量計算得到負值，是因為絞股藍茶本身蔗糖含量較低，測量存在一定誤差，結果以未檢出計。未檢出蔗糖含量的樣品有13個，檢出樣品含量范圍在0.32～1.90。

表4 絞股藍茶樣品蔗糖含量檢測結果表

3 結語

目前市面上有人工添加蔗糖的現象存在，可能有以下原因。①絞股藍自重較輕，為了增重，不法商販會通過添加蔗糖來達到增加成品重量的目的。②絞股藍茶口感微苦，人們為了調節口感而添加蔗糖。目前，國內外關于絞股藍茶中蔗糖含量的檢測方法、判定標準沒有明確的相關規定，監管部門和檢測部門缺乏標準技術支撐，對將蔗糖摻入絞股藍茶的行為只能依靠生產領域現場取證和現場查處，執法難度大，讓不法商人有機可乘。本文利用高效液相色譜法檢測絞股藍茶中蔗糖的含量，樣品經水超聲提取，去除蛋白等雜質后，進行定性定量分析，蔗糖的回收率在85.9%～92.3%，RSD%在2.19～3.07，方法檢出限 0.10 g/100 g，適合于絞股藍茶中蔗糖的檢測。