黃連花薹復配茶的研制

◎ 劉 暢，王嬌楊，胡榜文，呂賽楠，李任時，張朝鳳

（1.中國藥科大學中藥學院中藥健康產品研究開發聯合實驗室，江蘇 南京 211198；2.鎮坪縣農業科學研究所，陜西 鎮坪 725600）

黃連花薹是多年生草本植物黃連的干燥花序，每年2 ～3 月開花，花葶1 ～2 條，二歧或多歧聚傘花序有3 ～8 朵花。歷版《中國藥典》規定根莖為黃連的傳統入藥部位。在黃連種植過程中，為提高根莖產量，在種植的第2 年，會摘除丟棄黃連花薹，只留下少量便于后期育種?，F代研究表明黃連花薹含有大量的生物堿、黃酮和酚類等化學成分，具有降血脂、降血糖、降血壓、抗氧化和保護心肌缺血再灌損傷等藥理作用[1]。

現代研究表明，黃連花薹提取液可顯著調節高血糖大鼠腸道菌群和改善腸道微生物結構[2]。其提取物能顯著降低小鼠的空腹血糖值，促進胰島素的釋放，降低醛糖還原酶的活性，從而改善2 型糖尿病[3]。體內血糖水平主要來源于淀粉的消化吸收，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是參與淀粉水解生成葡萄糖的關鍵酶。α-葡萄糖苷酶抑制劑能減緩碳水化合物分解葡萄糖的速度，可有效降低餐后血糖濃度，是治療2 型糖尿病的關鍵因素[4]。α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的酶抑制率廣泛用于評估中藥降血糖[5]。本研究擬用茶湯感官評價和兩種糖苷酶總百分抑制率作為考察指標，確定了一款復配茶的配比方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃連花薹為陜西省鎮坪縣種植的中藥黃連干燥花序，標本存放于中國藥科大學中藥資源系本課題組實驗室；紅茶為陜西省鎮坪縣牛頭店鎮陜西小石茶葉有限公司出品；α-葡萄糖苷酶，合肥巴斯夫生物科技有限公司；4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷，南京源葉生物科技有限公司；阿卡波糖和PNP，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；α-淀粉酶，北京奧博星生物有限公司等。

1.2 儀器與設備

Multiskan MK3 酶標儀、移液槍，美國賽默飛公司；電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司；pH 計、十萬分之一電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 α-葡萄糖苷酶抑制率的測定

以0.1 mol·L-1磷酸鈉緩沖液（pH 6.8）為溶劑，分別配制5.0 U·mL-1α-葡萄糖苷酶溶液和7 mmol·L-1底物PNPG 溶液。在EP 管中先加入PBS 緩沖液和 α-葡萄糖苷酶試液，加入樣品，混勻，37 ℃反應5 min 后加入PNPG 溶液，混勻，37 ℃反應50 min，加入Na2CO3（0.1 mol·L-1）終止反應，405 nm 下測定α-葡 萄糖苷酶抑制率，每組3 個復孔[6]。各組反應試劑的用量如表1 所示，α-葡萄糖苷酶抑制率的計算公式為

表1 α-葡萄糖苷酶體外抑制實驗反應體系表

式中：Ab為陰性空白吸光度；Ac為陰性對照吸光度；Asb為樣品空白吸光度；Asc為樣品吸光度。

1.3.2 α-淀粉酶抑制率的測定

在各組EP 管中加入PBS 緩沖液和酶（0.5 mg·mL-1）試液后加入樣品溶液，混勻，37 ℃恒溫水浴10 min 后加入淀粉（0.5 mg·mL-1）溶液，混勻，37 ℃水浴反應30 min，加入碘液。565 nm 波長下測定各組吸光度值，每組3 個復孔[7]。各組反應試劑的用量如表2 所示，α-淀粉酶抑制率的計算公式為

表2 α-淀粉酶體外抑制實驗反應體系表

式中：A為陰性空白吸光度；B為陰性對照吸光度；C為樣品空白吸光度；D為樣品吸光度。

1.3.3 黃連花薹與紅茶配比的確定

取經干燥后粉碎后的黃連花薹和紅茶粉末，分別按黃連花薹比紅茶為2 ∶3、1 ∶1、3 ∶2 精確稱取，每包3 g。以茶水比3 ∶100 加沸水浸泡15 min 后，取茶湯。參考《茶葉感官審評方法》（GB/T 23776—2018），隨機邀請50 名受試者，從茶湯湯色、香氣、滋味3 方面對復配茶進行感官評分，初步確定黃連花薹與紅茶的配比。復配茶的感官評分標準見表3。

表3 復配茶的感官評分標準表

1.3.4 復配茶的制備工藝

試驗以α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率作為評價指標，確定過篩目數，茶水比、沖泡溫度、時間和次數。①取經干燥、粉碎后過20 目篩的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比精密稱取3 g，分別以不同的茶水比3∶100、3∶150、3∶200、3∶250、3∶300的比例加沸水浸泡15 min，確定復配茶的最佳茶水比。②取經干燥、粉碎后的黃連花薹和紅茶粉末，分別過 0 目、10 目、20 目、30 目和60 目的藥篩，按其最佳配比，每包為3 g，按茶水比3 ∶200，沸水浸泡15 min，確定復配茶的最佳過篩目數。③取粉碎后過20 目篩的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比，每包為3 g，茶水比3 ∶200，分別在50 ℃、75 ℃、80 ℃、90 ℃和100 ℃水溫下，浸泡15 min 后，確定復配茶的最佳浸泡水溫度。④取粉碎后過20 目篩的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比，每包為3 g，茶水比3 ∶200，在80 ℃條件下分別沖泡2 min、3 min、5 min、10 min 和15 min，確定復配茶的最佳沖泡時間。⑤取最佳過篩目數的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比，每包為3 g，茶水比3 ∶200，在80 ℃條件下，分別沖泡1 次、2 次、3 次、4 次和5 次，每次各5 min，確定復配茶的最佳沖泡次數。

2 結果與分析

2.1 黃連花薹與紅茶配比的確定

由表4 可知，當黃連花薹∶紅茶配比為2 ∶3 時，茶湯感官評分最高，因此確定最佳配比為2 ∶3。

表4 復配茶感官評價結果及評分表（n=50）

2.2 制備工藝的確定

由圖1（a）可知，α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率隨茶水比的變化趨勢為先升高后下降，在茶水比為3 ∶200 時，總抑制率最大，故確定最佳茶水比為3 ∶200。由圖1（b）可知，未打粉時，黃連花薹漂浮于水面，沖泡不充分，對兩種酶基本沒有抑制作用；粉碎后，總抑制率升高，且在過篩目數為20 目 時達到最高，但隨著過篩目數的繼續增加，總抑制率下降，且粉末過于細微會導致茶湯不澄清，因此確定20 目為最佳過篩目數。由圖1（c）可知，總抑制率隨浸泡水溫度的增加呈現先上升后下降趨勢，80 ℃時總抑制率達到最高，因此確定復配茶的最佳浸泡水溫度為80 ℃。由圖1（d）可知，隨著沖泡時間的延長，沖泡越來越充分，茶湯對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率也隨之增大。當沖泡時間在10 min 時達到最大，為63.7%，但與沖泡第5 min 時的61.4%相差不大。考慮到飲茶時的沖泡習慣與茶湯溫度，最終確定復配茶的最佳沖泡時間為5 min。由圖1（e）可知，隨著沖泡次數的增加，茶湯對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率顯著下降。當沖泡次數增加到3 次及以上時，其對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均沒有抑制作用，因此沖泡次數最多不超過2 次。

圖1 復配茶不同制備工藝對兩種酶總抑制率的影響圖

3 結論

黃連可用于治療糖尿病，且降血糖效果顯著，其中黃連水煎液和活性成分小檗堿等均能用于治療糖尿病。黃連花薹作為黃連的干燥花序，其中的生物堿、茶多酚與茶多糖等活性物質均具有降糖作用，可以用來輔助治療糖尿病及其并發癥。本文通過單因素試驗，以感官評分和復配茶對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率為評價指標，最終確定最佳工藝為黃連花薹和紅茶的配比2 ∶3，過篩目數20 目，沖泡時間 5 min，茶水比3 ∶200，沖泡溫度80 ℃，沖泡次數最多不超過2 次。