EBV抗體聯合DNA檢測診斷小兒呼吸道EB病毒感染的應用價值

郭曉輝

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一種雙鏈DNA病毒，人群普遍易感，其潛伏期較長[1]。EBV具有傳染性，為核細胞增多癥的病原體的一種，感染后可在患者口咽部的上皮細胞內進行增殖，進而向呼吸道進行侵入，造成呼吸道感染，當患者免疫功能下降，可能會出現復發性感染[2-3]。嬰幼兒為呼吸道感染性疾病多發群體，其感染病原包括肺炎衣原體、細菌、病毒等，其中病毒引發的兒童呼吸道感染性疾病占大多數[4]。兒童免疫力較成人更低，其感染EBV概率相應升高，且感染后治療時間長，因此EBV的早期篩查對于患兒的臨床治療和用藥考量有重要意義。鑒于此，本研究旨在對比EBV抗原檢測、EBV-DNA檢測和二者聯合檢測的診斷效能，詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2019年12月-2021年11月到臨沂市第三人民醫院就診的360例呼吸道感染患兒納入研究，（1）納入標準：①符合文獻[5]《兒童EB病毒感染相關疾病的診斷和治療原則專家共識》診斷標準，經臨床高度疑似為EB；②伴發熱、喘息、咳嗽等呼吸道感染癥狀；③臨床資料完整。（2）排除標準：①合并凝血功能障礙；②合并免疫系統疾病；③合并支氣管哮喘等呼吸道疾病；④患兒神志不清無法配合治療；⑤隨訪脫落。根據EB病毒診斷金標準分為EB組和非EB組。EB組為174例，男、女例數為93、81例；年齡0.5～14歲，平均（7.3±1.2）歲；病程2～20 d，平均（11.00±1.23）d。非EB組共186例，其中男、女例數97、89例；年齡0.9～13.5歲，平均（7.2±1.3）歲；病程3～20 d，平均（11.50±1.27）d。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），有可比性。家長簽署知情同意書。本研究經本院倫理委員會批準。

1.2 方法

EBV抗體檢測：于治療前后取兩組空腹清晨靜脈血3 ml，另取3 ml制作抗凝血。以3 000 r/min速度進行10 min離心處理后取上清液待檢，采用酶聯免疫吸附法（ELISA）對IgG、IgM、IgA抗體進行檢測，首先對樣本進行溫育，然后進行清洗后行底物溫育，完成后進行比色，處理流程嚴格按照試劑盒說明書進行。

EBV-DNA檢測：治療前后用生理鹽水為兩組清潔口腔后，用無菌壓舌板輕壓患兒舌后部，使咽喉部暴露，以無菌咽拭子在患兒兩腭弓、扁桃體和咽部擦拭并捻轉3次，取分泌物后插入無菌試管待檢。取樣管裝1.5 ml生理鹽水，將咽拭子置于其中攪動振蕩5 min，貼壁擠干后棄去，以12 000 r/min速度離心5 min后取上清液，經靜置沉淀后與滅菌生理鹽水1 ml混合，再次進行相同離心步驟，將其與處理后的抗凝全血樣本分別放入熒光定量PCR儀（美國ABI公司）進行檢測，所有流程嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標及評價標準

比較兩種檢測方式及其聯合檢測的陽性診出率和診斷效能。（1）EBV抗體陽性標準：EBV-IgA≥ 40 U/ml、EBV-IgG≥ 25 U/ml、EBVIgM≥ 40 U/ml為陽性。三種抗體有一種及以上陽性則診斷為EBV抗體陽性。（2）EBV-DNA陽性標準：EBV-DNA>400拷貝數/ml定義為陽性。（3）聯合檢測標準：二者有一項提示為陽性，則聯合檢測結果為陽性。

1.4 統計學處理

以SPSS 22.0軟件分析本研究數據，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 EBV抗體、EBV-DNA及其聯合診斷的陽性診出率對比

EBV抗體聯合EBV-DNA檢測對EB組的陽性診出率高于單一檢測，對非EB組的陽性診出率低于單一檢測，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 三種方式陽性診出率對比（%）

2.2 EBV抗體診斷效能對比

EBV-IgA的診斷敏感度和準確度低于EBV-IgG和EBV-IgM，差異有統計學意義（P<0.05），三種抗體診斷特異度比較差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

表2 三種EBV抗體診斷效能對比（%）

2.3 三種方式的診斷效能對比

EBV抗體聯合EBV-DNA檢測的敏感度、特異度、準確度均高于單一檢測，差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

表3 三種方式診斷效能對比（%）

3 討論

EBV是一種人類最容易感染的DNA病毒，也稱人類皰疹病毒4型，在兒童口腔及咽部的上皮細胞著床后可進行增殖，并進入呼吸道引起感染[6]。EBV感染早期缺乏典型癥狀，臨床表現具有多樣性，呼吸道感染是兒童最為常見的一種臨床表現，隨病程發展可引起多種嚴重并發癥，因此及時進行診斷和治療對患兒的預后具有重要意義[7]。據張蓉等[8]報道，新生兒EBV感染無明顯季節性，也非聚集性分布，除了呼吸道感染，還可能引發病毒性腸胃炎、心肌炎等，使患兒生長發育出現落后的情況。EBV感染早期診斷困難，EBV-DNA也僅在病毒活躍期才能檢出，因此臨床對于EBV的檢查有較高的漏診和誤診率。據研究，患兒感染EBV后其血清中會出現EBV抗體，但由于免疫過程的復雜性，其表達會出現不準確的情況[9]。因此，尋求一種高準確性的診斷方式對于EB病毒感染的兒童呼吸道感染疾病的診治具有極高價值。

本研究中，EBV抗體檢測聯合EBV-DNA檢測較任意單一檢測陽性檢出率和診斷效能更高，假陽性率更低，提示聯合檢測方式應用于兒童呼吸道感染性疾病診斷具有更高的診斷價值。EBV由于其嗜B淋巴細胞的特性，B淋巴細胞就成為該病毒最早也是最主要的宿主，但EBV僅可以在B淋巴細胞中進行病毒復制、轉化和傳代，當病毒存在超過一定數量，引發T淋巴細胞的強反應，使機體釋放炎癥介質，T淋巴細胞的分化過程出現異常，造成免疫應答的異常，其體現在臨床上就是多樣化的病癥表現[10-11]。EBV感染后發生體液免疫，從而形成EBV特異性抗原，對抗體表達進行檢測是判斷是否感染的可靠指標。但抗體檢測僅能反映EBV感染情況，對EBV的復制情況卻難以呈現[12]。EBV-DNA載量可反映患兒受損害程度，若長期處于高表達狀態，其機體健康狀態越差，長此以往淋巴系統等并發惡性腫瘤的風險也隨之上升[13]。由于當前EBV的治療主要靠藥物進行病毒抑制，或是干擾病毒DNA多聚酶，使病毒復制得到抑制，或是在DNA多聚酶的作用下，與EBV增長的DNA鏈進行結合，達到中斷DNA鏈的效果，因此其表達水平和病情有直接相關，因此EBV-DNA不僅可以用來進行EBV感染的診斷，還可幫助醫生判斷患兒病情嚴重程度以斟酌用藥，也可作為療效和預后情況判定的標準之一[14-15]。但EBV-DNA僅在病毒復制活躍時才可被檢出，在診斷中漏診率較高，而EBV抗體則需機體已經產生較強的免疫反應，因此二者聯合診斷可對單一檢測方式的不足進行彌補[16]。本研究中，EBV抗體中，IgM和IgG的診斷效能較IgA更高，提示在EBV感染急性期IgM和IgG具有較高準確度。機體發生免疫反應后則會出現抗體，最先出現的抗體為IgM，接著是IgG，其高表達水平可持續4～8周，通常被應用于觀察初期感染[17]。而IgA的血清半衰期更短，可用作監測病程發展情況[18]。但據吳振勇等[19]研究，3歲以下患兒IgM抗體檢測效能較其他年齡段更低，可能由于低齡段患兒免疫系統未發育完善，EBV對機體的刺激不足以使其產生達到檢測下限的抗體數量。但對IgM進行檢測目前仍是兒童EBV篩查的主要指標，在臨床篩查過程中可結合DNA檢測等以提高檢測準確性。受限于本次研究樣本數量和研究時間，EB血清抗體和EBVDNA對兒童呼吸道感染性疾病診斷的聯合檢測方案仍待進一步探索和完善，其相關理論仍需繼續分析與研究。

綜上所述，EBV抗體與DNA聯合應用于兒童呼吸道EBV感染性疾病診斷，其診斷價值高，值得進行臨床推廣。