p16/Ki-67檢查在宮頸不典型鱗狀上皮細胞及低級別鱗狀上皮內病變中的診斷價值＊

吳飛榮 馮書梅 陳婉儀

子宮頸癌屬于女性生殖器高發惡性腫瘤，且多數患者發病早期臨床癥狀缺乏典型性，導致臨床診療難度較大[1]。液基細胞學檢查、人乳頭瘤病毒（HPV）DNA檢查是子宮頸癌常用的篩查方法，而對于宮頸不典型鱗狀上皮細胞（ASCUS）及低級別鱗狀上皮內病變（LSIL）臨床上可選擇HPV DNA分流方法進行評估及篩查。盡管上述方法能提高子宮頸癌早期檢出率，但是不同方法存在一定局限性，臨床漏診率較高[2]。國內學者研究表明：宮頸細胞學篩查和HPV檢查的普遍展開，可提高早期子宮頸癌檢出率，降低臨床死亡率。但是，上述方法敏感度、特異度較低，對儀器及設備要求較高，難以在基層醫院推廣應用。檢索大量文獻發現，p16/Ki-67細胞學雙染色檢查用于宮頸高級別上皮內瘤變中敏感度較高，但是該結論尚未得到證實。p16/Ki-67細胞學雙染色技術是一種新型的診斷方法，在子宮頸癌篩查中應用較為廣泛，是指子宮頸癌病灶組織中能同時篩查出p16、Ki-67兩種抗體，能反映細胞周期失調，可動態了解高級別病變情況，但是該方法的診斷效能研究較少。因此，本研究以ASCUS和LSIL患者為對象，探討p16/Ki-67在ASCUS及LSIL中的應用，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選擇2020年9月-2021年11月東莞市東部中心醫院疑似ASCUS患者56例作為觀察組。選擇同期診療的疑似LSIL患者52例為對照組。納入標準：（1）參考ASCUS和LSIL有關標準進行評估[3]；（2）均完成p16/Ki67檢測，且患者均可耐受；（3）具有完整的報告結果，且檢測前未接受放化療、生物免疫治療。排除標準：（1）精神異常、認知功能異?；蛱幱谌焉锲诓溉槠谂?；（2）伴有其他宮頸疾病、宮頸尖銳濕疣或宮頸息肉；（3）嚴重肝腎功能異?；虬橛凶陨砻庖呦到y疾病。觀察組年齡28～67歲，平均（45.29±5.63）歲；體重指數（BMI）18～29 kg/m2，平均（23.53±2.69）kg/m2。對照組年齡29～68歲，平均（45.61±5.66）歲；BMI 17～30 kg/m2，平均（23.61±2.73）kg/m2。兩組臨床資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。本研究在醫院倫理批準下完成，患者簽署同意書。

1.2 方法

（1）陰道鏡活檢。所有患者均完成陰道鏡檢查，并由本院5年經驗以上醫生完成病灶定位，對于單一陰道鏡檢查取材不滿意者，可選擇宮頸管搔刮術，由醫院病理醫生對其結果進行判讀，完成ASCUS和LSIL疾病的判定和鑒別。（2）p16/Ki-67檢查。①檢測方法。檢查前常規選擇宮頸細胞標本，借助免疫細胞化學法，利用新柏氏2000系統完成p16/Ki-67測定，上述所有操作均根據試劑盒說明書完成；待上述操作完畢后采用p16/Ki-67雙染色細胞學試劑盒（購自于廣州安必平醫藥科技股份有限公司）及全自動染色儀對細胞涂片進行檢查，常規染色后清洗、晾干及封固，上述所有操作均嚴格遵循儀器、試劑盒說明書完成。②判讀方法。p16/Ki-67檢查時陽性滿足同一個細胞同時表達p16/Ki-67，整張玻片有一個雙染色細胞（胞核紅色、胞漿棕色）[4]。

1.3 觀察指標

以陰道鏡活檢檢查結果為“金標準”，分析p16/Ki-67在ASCUS及LSIL中的診斷價值。敏感度=真陽/（真陽+假陰）×100%；特異度=真陰/（真陰+假陽）×100%；陽性預測值=真陽/（真陽+假陽）×100%；陰性預測值=真陰/（真陰+假陰）×100%。

1.4 統計學處理

本研究數據采用SPSS 24.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 p16/Ki-67在ASCUS中的診斷價值

56例疑似ASCUS患者經陰道鏡活檢檢查確診45例，確診率為80.36%。p16/Ki-67在ASCUS中檢查確診42例，與“金標準”檢查準確度為80.36%；p16/Ki-67診斷敏感度為84.44%，特異度為63.64%，陽性預測值為90.48%，陰性預測值為50.00%，見表1。

2.2 p16/Ki-67在LSIL中的診斷價值

52例疑似LSIL患者經陰道鏡活檢檢查確診41例，確診率為78.85%。p16/Ki-67在LSIL中檢查確診37例，與“金標準”檢查準確度為80.77%；p16/Ki-67診斷敏感度為82.93%，特異度為72.73%，陽性預測值為91.89%，陰性預測值為53.33%，見表2。

2.3 p16/Ki-67在不同疾病中的診斷價值比較

p16/Ki-67在ASCUS和LSIL兩種疾病中均具有較高的檢查準確度，且p16/Ki-67診斷兩種疾病敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值比較差異均無統計學意義（P>0.05），見表3。

表3 p16/Ki-67在不同疾病中的診斷價值比較（%）

3 討論

子宮頸癌是威脅女性健康的公共健康衛生問題，且全世界各地均在探索適合本國國情的子宮頸癌篩查方法[5]。目前，我國對于子宮頸癌的篩查多以TCT和高危型HPV檢測為主，對于發達國家醫療水平較高，常采用HPV聯合液基細胞學檢查，能獲得較高的篩查準確性，但是該方法對醫生專業技能要求較高，價格亦昂貴，導致上述篩查方法難以在基層醫院推廣應用。而細胞學檢查能提高宮頸異常細胞檢出率，但是其敏感度較低，導致臨床診斷誤診、漏診率較高[6]。TCT結果中ASCUS和LSIL檢查多數已經超過炎性反應范疇，但是難以進一步篩選出高級別鱗狀上皮病變，容易漏診。因此，積極探討價格低廉、無創及準確的宮頸疾病篩查方法，成為當前研究的熱點[7]。

近年來，p16/Ki-67逐步在ASCUS和LSIL患者中得到應用，且效果理想[8]。本研究中，56例疑似ASCUS患者經陰道鏡活檢檢查確診陽性結果45例，p16/Ki-67檢查確診42例，檢查準確度為80.36%；診斷敏感度為84.44%，特異度為63.64%；52例疑似LSIL患者經陰道鏡活檢檢查確診41例，p16/Ki-67檢查確診37例，與“金標準”檢查準確度為80.77%；診斷敏感度為82.93%，特異度為72.73%，從本研究結果看出，p16/Ki-67用于ASCUS和LSIL患者中篩出陽性結果診斷敏感度均較高。p16屬于是一種細胞周期依賴性的激酶抑制蛋白，能直接抑制細胞周期紊亂，介導細胞的無限制增殖，廣泛用于ASCUS和LSIL級別的鑒別和評估中。國內學者研究表明：p16在ASCUS和LSIL的發生、發展中發揮了重要的作用，能參與細胞周期的調控，屬于是一種抑癌基因[9]。持續的p16高表達能影響腫瘤細胞周期及細胞活性，部分患者中同時伴有Ki-67和p16高表達。由此看出，p16/Ki-67共同表達用于ASCUS和LSIL中能獲得較高的篩查效能。Ki67屬于是一種增殖性細胞核抗原，僅在G0期表達缺失，廣泛用于惡性腫瘤的輔助診斷及預后評估中[10]。對于ASCUS和LSIL患者而言，宮頸組織是良性或惡性，其增殖情況不同，正常細胞增殖率低于3%，屬于正常細胞需更新換代。對于良性腫瘤其增殖在5%～10%，而惡性腫瘤一般情況下增殖率>10.0%，對于部分低度惡性腫瘤，Ki-67的表達率<5%。但是，多數情況下Ki-67的增殖會隨著腫瘤細胞的惡性程度增高而增加。國內學者研究表明：在生理功能正常的細胞中，p16、Ki67相互拮抗，在同一細胞中如均有表達，代表細胞周期失調，患者高級別鱗狀上皮內病變可能性大[11]。因此，p16、Ki67細胞雙染色檢查能實現對病變細胞的進一步診斷，且該方法不依賴于細胞形態學測定，能指導臨床診療。檢索大量文獻可以發現，HPV篩查用于ASCUS和LSIL患者中存在諸多局限性，該方法并不適合我國子宮頸癌的篩查，而p16/Ki-67雙染檢測檢測，對于儀器及設備要求較低，檢查時不需要依賴細胞形態學，學習周期較短，能減輕檢驗人員工作壓力及強度。同時，p16/Ki-67雙染的實施診斷敏感度及特異度較高，能動態了解病情變化情況，預測子宮頸癌的發展方向，能提高子宮頸癌篩查效能，節約醫療資源，提高病灶早期檢出率[12]。本研究中，p16/Ki-67在ASCUS和LSIL兩種疾病中均具有較高的檢查準確度，且p16/Ki-67診斷兩種疾病敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值比較差異均無統計意義（P>0.05），從本研究結果看出，p16/Ki-67用于ASCUS和LSIL患者中均可以獲得較高的診斷價值。因此，臨床上對于疑似ASCUS和LSIL患者中，應加強p16/Ki-67檢查，幫助患者早期確診，必要時可聯合其他方法檢查，發揮不同檢查方法優勢，幫助患者早期確診[13]。

綜上所述，p16/Ki-67用于ASCUS和LSIL患者中，能獲得較高的篩查效能，診斷敏感度高，且該方法對醫生專業技能要求較低，能彌補傳統篩查方法存在的弊端，可為臨床診療提供參考依據。