新生兒線粒體12S rRNA基因篩查對預防藥物性耳聾的價值

孫東蘭，王少雄，張 晶，彭園園，喬彥霞，胡亞芳，張 靜

線粒體12S核糖體核糖核酸(ribosomal rbonucleic acid，rRNA)基因位于人類線粒體DNA編碼區，是線粒體核糖體的重要組件，負責完成線粒體內的翻譯，參與線粒體相關蛋白質的合成。線粒體12S rRNA基因是藥物性耳聾相關的突變熱點區域，攜帶此基因突變的個體對氨基糖苷類抗生素(aminoglycosides antibiotic，AmAn)高度敏感，接觸AmAn可導致不可逆的聽力損傷。因此，對新生兒進行線粒體DNA(mtDNA)12S rRNA的A1555G、C1494T藥物敏感突變位點篩查，對安全用藥具有重要的指導意義。本研究應用熒光定量PCR技術對新生兒進行上述基因突變位點篩查，依據結果給予用藥指導和后代遺傳性耳聾發病的風險評估，并對陽性個體進行疫苗預防接種隨訪分析。

1 對象與方法

1.1 對象 2018-12至2021-10在石家莊市第四醫院出生的46 376例新生兒為研究對象，男女比例1.12∶1。全部新生兒均于出生后2～3 d通過TEOAE和AABR進行了聽力篩查，參與藥物性聾基因檢測者由其監護人簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 藥物性聾基因檢測試劑盒(熒光PCR法)(英盛，濟南)，ABI 7500擴增儀(Thermo Fisher，美國)，ND 2000紫外分光光度計(Thermo Fisher，美國)。

1.2.2 樣本采集和DNA提取 新生兒出生后采集臍帶血滴血片，或在生后2～3 d采取足跟末梢血3～4滴，自然晾干后從血斑提取基因組DNA，取2 μl用紫外分光光度計檢測DNA濃度和純度。

1.2.3 熒光定量PCR PCR反應液完全解凍后放置室溫30 min，充分混勻并短暫離心。每個PCR反應管分裝23 μl待測位點的PCR反應液，加入2 μl待檢DNA后上ABI 7500擴增儀擴增。擴增程序按試劑盒說明書進行。

1.2.4 結果判定 FAM曲線成S形，且Ct值小于35，HEX(VIC)曲線無擴增或Ct值大于37，結果為野生型。……