胸腺依賴淋巴細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞活性檢測在不同化療療效彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者中的表達(dá)分析

李雯雯 周章軍

廈門市海滄醫(yī)院血液科，福建廈門 361000

彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤 （diffuse large B-cell lym phoma，DLBCL）是當(dāng)前臨床發(fā)病率最高的非霍奇金淋巴瘤。研究證實，DLBCL 的發(fā)生、發(fā)展與患者細(xì)胞免疫功能狀態(tài)存在緊密關(guān)系。胸腺依賴淋巴細(xì)胞（以下簡稱“T 淋巴細(xì)胞”）亞群所介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在抗腫瘤免疫過程中發(fā)揮著免疫調(diào)節(jié)、抑制腫瘤異常增殖等功能；自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞則發(fā)揮免疫監(jiān)視、殺滅腫瘤細(xì)胞等功能。此前研究證實：T 淋巴細(xì)胞亞群在DLBCL 患者中存在異常表達(dá)，與患者疾病分期和化療療效反應(yīng)密切相關(guān)。但有關(guān)NK 細(xì)胞在DLBCL 患者治療中檢測價值的研究較少。基于此，本次研究針對T 淋巴細(xì)胞亞群和NK 細(xì)胞活性檢測結(jié)果在DLBCL 患者治療中的應(yīng)用價值進(jìn)行探討，分析上述指標(biāo)變化與療效的關(guān)系，為臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年1月至2021年1月在廈門市海滄醫(yī)院初診并接受化療，且取得一定療效反應(yīng)（療效達(dá)完全緩解或部分緩解）的80 例DLBCL 患者作為研究對象，其中男48 例，女32 例；年齡32～80歲，平均（58.24±8.51）歲；疾病分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期21例，Ⅲ期30 例，Ⅳ期21 例。本組患者均依據(jù)中國臨床腫瘤學(xué)會淋巴瘤診療指南指導(dǎo)化療，方案包括R-CHOP（利妥昔單抗+環(huán)磷酰胺+多柔比星+長春新堿+潑尼松）、R-CHOEP（利妥昔單抗+環(huán)磷酰胺+多柔比星+長春新堿+依托泊苷+潑尼松）。依據(jù)淋巴瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)（Lugano 標(biāo)準(zhǔn)）將患者分為完全緩解組（n=44）和部分緩解組（n=36）。完全緩解組中，男25 例，女19例；年齡32～80 歲，平均（57.96±7.76）歲。部分緩解組中，男19 例，女17 例；年齡32～80 歲，平均（60.06±8.44）歲。選擇廈門市海滄醫(yī)院同期40 例體檢健康對象作為對照組。對照組中，男25 例，女15例；年齡30～80 歲，平均（59.56±8.22）歲。三組的性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)廈門市海滄醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：LW-2022003）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡≥18 歲；②DLBCL 組患者均完善淋巴結(jié)或組織病理檢查、免疫組化檢查，確診為DLBCL，患者診斷及分類符合WHO 2008 淋巴瘤新分類標(biāo)準(zhǔn)與Ann Arbor 臨床分期標(biāo)準(zhǔn)。化療后療效評估符合完全緩解、部分緩解標(biāo)準(zhǔn)；③DLBCL 組患者均接受標(biāo)準(zhǔn)劑量的R-CHOP 或R-CHOEP 方案化療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他疾病引起的免疫功能障礙患者；②伴有自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染性疾病、嚴(yán)重臟器功能不全患者；③合并其他腫瘤疾病患者。

1.2 方法

所有研究對象均使用流式細(xì)胞儀（Beckman 貝克曼公司生產(chǎn)，型號：DxFLEX）完成T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞活性檢測，使用配套試劑。取空腹靜脈血樣5 ml 并置于提前處理過的抗凝管中標(biāo)記。將10 μl 單抗置于流式管中，與抗凝處理后的100 μl 外周血樣混合，使用微型振蕩器以2 800 r/min 速度混合均勻，靜置20 min；加入500 μl 溶血素后使用微型振蕩器混合均勻，靜置20 min；加入500 μl 磷酸鹽緩沖液，靜置10 min。使用流式細(xì)胞儀完成對患者T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞的檢測，包括白細(xì)胞分化抗原（cluster of differentiation，CD）的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性。其中DLBCL 組患者檢測時間包括初治化療前，化療2、4 個周期后第10～14 天（骨髓抑制緩解后）。

1.3 觀察指標(biāo)

比較化療前、 化療2、4 個周期后完全緩解組、部分緩解組以及對照組CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平的差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組化療前T 淋巴細(xì)胞亞群及NK 細(xì)胞活性檢測結(jié)果的比較

化療前，完全緩解組、部分緩解組CD3、CD4、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平低于對照組，CD8水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。完全緩解組與部分緩解組CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表1）。

表1 三組化療前T 淋巴細(xì)胞亞群及NK 細(xì)胞檢測結(jié)果的比較（±s）

2.2 完全緩解組患者化療前后T 淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞活性檢測結(jié)果的比較

化療4 個周期后完全緩解組CD3、CD4、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平高于化療前及化療2 個周期后，CD8水平低于化療前及化療2 個周期后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；化療前與化療2 個周期后完全緩解組CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 完全緩解組患者化療前后T 淋巴細(xì)胞亞群及NK 細(xì)胞檢測結(jié)果的比較（±s，n=44）

2.3 部分緩解組化療前后患者T 淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞活性檢測結(jié)果的比較

化療前、化療2、4 個周期后部分緩解組患者CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。

表3 部分緩解組患者化療前后T 淋巴細(xì)胞亞群及NK 細(xì)胞檢測結(jié)果的比較（±s，n=36）

3 討論

DLBCL 是一組在臨床表現(xiàn)、預(yù)后等方面都具有極大差異性的惡性腫瘤。該病表現(xiàn)為腫瘤性的大B 淋巴細(xì)胞彌漫性增殖，正常淋巴細(xì)胞與組織功能受損，病情具有高度侵襲性，自然病程相對較短。而細(xì)胞免疫作為人體免疫系統(tǒng)的一項重要組成部分，主要通過對T 淋巴細(xì)胞各個亞群的調(diào)節(jié)以維持人體免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性，已有諸多疾病被證實與T 淋巴細(xì)胞亞群失衡存在密切關(guān)系。T 淋巴細(xì)胞的數(shù)量和比例是反映細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，在腫瘤的發(fā)病、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中都起著至關(guān)重要的作用，對治療反應(yīng)也有深遠(yuǎn)的影響。NK 細(xì)胞數(shù)量減少，活性降低，則會引起機(jī)的免疫功能下降，同樣是腫瘤進(jìn)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的一項重要原因。

CD3細(xì)胞反映體內(nèi)總T 細(xì)胞水平，分為CD4T細(xì)胞和CD8T 細(xì)胞兩大亞群，CD4T 細(xì)胞在人體中主要發(fā)揮輔助誘導(dǎo)功能，能夠誘導(dǎo)其他免疫細(xì)胞增殖，具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖功能。研究證實：CD4細(xì)胞參與激活體內(nèi)巨噬細(xì)胞、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞、 細(xì)胞毒性T 細(xì)胞等多種效應(yīng)細(xì)胞，并協(xié)同上述細(xì)胞共同發(fā)揮抗腫瘤功能；CD8T 細(xì)胞則對CD4細(xì)胞、B 細(xì)胞有抑制功能，能抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)和體內(nèi)抗腫瘤抗體形成。因此人體內(nèi)CD8細(xì)胞水平與抗腫瘤免疫功能呈負(fù)相關(guān)性，CD8細(xì)胞水平升高即代表患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞處于持續(xù)增殖狀態(tài)，疾病持續(xù)進(jìn)展。CD4/CD8值降低，T 淋巴細(xì)胞亞群失衡，即提示機(jī)體免疫功能低下，腫瘤增殖活躍。NK 細(xì)胞具有分泌多種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、產(chǎn)生直接細(xì)胞毒活性和介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞毒作用，可殺滅體內(nèi)腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮抗腫瘤活性。因此NK 細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)中防止細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要防線。

本研究對DLBCL 患者和健康對象的T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞活性檢測結(jié)果進(jìn)行研究分析，結(jié)果顯示T 淋巴細(xì)胞亞群和NK 細(xì)胞活性在DLBCL 患者中存在明顯表達(dá)異常。DLBCL 患者體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞數(shù)量與比例失衡，NK 細(xì)胞活性下降，與其他學(xué)者研究結(jié)果相近；進(jìn)一步對疾病組不同療效反應(yīng)上述指標(biāo)表達(dá)水平進(jìn)行分析： 化療4 個周期后完全緩解組患者CD3、CD4、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平高于治療前，并且高于化療2 個周期后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明經(jīng)過化療，隨疾病狀態(tài)的改善，患者免疫失衡得以糾正，體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞數(shù)量和比例均有明顯改善，NK 細(xì)胞活性上升，展現(xiàn)出良好的治療效果。與其他研究結(jié)果相近。亦有研究顯示，疾病臨床分期與T 淋巴細(xì)胞亞群的CD3、CD8水平、CD4/CD8比例有相關(guān)性，并且隨著腫瘤分期的增加患者免疫抑制與紊亂更加明顯，腫瘤負(fù)荷越大，NK 細(xì)胞功能也越差。在本研究結(jié)果中部分緩解組較對照組指標(biāo)異常差異更明顯，但組內(nèi)比較化療前、化療2、4 個周期后部分緩解組患者CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK 細(xì)胞活性水平，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。可能是由于本研究中Ⅲ～Ⅳ期患者數(shù)量較多，腫瘤負(fù)荷更大，免疫紊亂狀態(tài)更難糾正。因此對DLBCL 患者而言，T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞檢測結(jié)果能夠評估完全緩解患者的治療效果，但不能很好地預(yù)測部分緩解患者的治療效果。

綜上所述，T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞活性檢測，對DLBCL 患者的診斷及療效評估均有一定價值，流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞亞群、NK 細(xì)胞活性簡便易行，可以在更多的患者中推廣應(yīng)用，能更好地評估患者免疫功能狀態(tài)，并能在一定程度上預(yù)測療效反應(yīng)，指導(dǎo)治療。