三亞全球動植物種質資源引進中轉基地引進活兔傳帶4 種重要疫病的風險評估

劉曉飛，仇松寅，梅 琳，劉 晗，吳紹強

（1.三亞中國檢科院生物安全中心，海南三亞 572000；2.中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100176）

我國以經濟發展為目的的養兔生產始于20 世紀50 年代中后期，伴隨著經濟的騰飛，我國兔產業得到了長足發展。根據FAO 統計數據，我國兔總量占全球總量的比例從1970 年的1/4 發展到現在的2/3，我國已成為名副其實的世界兔產品生產與出口大國，在世界兔產品貿易中占有重要地位[1]。進入21 世紀，我國生物醫藥產業蓬勃發展，兔作為重要的實驗動物，在免疫學、心血管疾病、微生物學、遺傳學等諸多科研領域發揮著重要作用。

2018 年9 月，國務院印發《中國（海南）自由貿易試驗區總體方案》[2]，明確提出“劃定特定區域，通過指定口岸管轄和加強生物安全管理，建設全球動植物種質資源引進中轉基地（簡稱“引進中轉基地”），探索建立中轉隔離基地（保護區）、檢疫中心、種質保存中心、種源交易中心”。在中轉基地建設運行過程中，引進中轉優質種兔將進一步帶動相關產業在海南省的發展，為三亞成為具有世界影響力的全球種質資源合作示范區以及先進生物技術合作交流平臺助力。然而活兔引進過程中所伴隨的潛在生物安全風險不容忽視。

本研究以兔出血癥、野兔熱、兔黏液瘤病和兔球蟲病4 種重要兔疫病為研究對象，根據世界動物衛生組織（WOAH）動物及動物產品進境風險分析框架，基于已有的科學研究數據，對引進活兔可能傳帶的4 種疫病風險進行了評估并提出相應的風險管理措施，以期為保障中轉基地進境兔的生物安全和我國兔產業健康持續發展提供參考。

1 危害識別

1.1 病原學

1.1.1 兔出血癥 兔出血癥（rabbit hemorrhagic disease，RHD），俗稱兔瘟，是由兔出血癥病毒（rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）引起兔的一種高度接觸性傳染病，以全身器官出血為主要特征[3]。WOAH 將其列為須通報動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。RHDV 在環境中有非常強的穩定性。研究[4]表明，RHDV 對酸（pH 3.0）、熱（60 ℃，30 min）、乙醚（20%）和氯化鎂（1 mol/L）均具有較強的抵抗力。

1.1.2 野兔熱 野兔熱（tularaemia）是由土拉熱弗朗西斯菌（Francisella tularensis，俗稱土拉桿菌）引起的一種人獸共患急性傳染病，屬于自然疫源性疫病[5]。WOAH 將其列為須通報動物疫病。土拉熱弗朗西斯菌在低溫條件和水中能長時間存活，對熱、紫外線和化學藥物敏感，56 ℃作用30 min 或日光直射30 min 即可將其滅活，煮沸立即失活；一般消毒藥物均能很快將其殺滅[6-7]。

1.1.3 兔黏液瘤病 兔黏液瘤病（myxomatosis）是由黏液瘤病毒（myxoma virus）引起的一種高度接觸性致死性傳染病[8]。WOAH 將其列為須通報動物疫病。該病毒對干燥有較強的抵抗力，其毒力在干燥的黏液瘤結節中可保持3 周；對熱敏感，50 ℃作用30 min 即被滅活；對乙醚敏感，但能抵抗去膽酸鹽，這是黏液瘤病毒區別于其他痘病毒的獨特性質[9-10]。

1.1.4 兔球蟲病 兔球蟲病（coccidiosis）是小腸或膽管上皮細胞內寄生了艾美耳屬或等孢屬球蟲而引發的一種寄生蟲病，是對家兔危害較嚴重的寄生蟲病之一[11]。我國將其列為三類動物疫病。家兔可感染的球蟲共有17 種，其中艾美耳屬球蟲16 種、等孢屬球蟲1 種[12]。目前公認的兔球蟲有效種有11 個[13]，其中腸艾美耳球蟲、黃艾美耳球蟲和斯氏艾美耳球蟲呈高致病性。斯氏艾美耳球蟲寄生在肝臟膽管，黃艾美耳球蟲和梨形艾美耳球蟲寄生在大腸，其他8 種均寄生于家兔小腸[14]。球蟲卵囊對外界的抵抗力很強，在惡劣環境中也可長期存活[15]。

1.2 流行病學

1.2.1 兔出血癥 經典RHDV 于1984 年首次在我國被發現和報道，1986 年該病毒在歐洲出現后迅速傳播，目前已在全球養兔密集地區流行[16]。2010 年法國首次發現RHDV2[17]，隨后在西班牙、英國、澳大利亞以及北非和北美等國家和地區傳播和流行[18-19]。我國于2020 年發現首例RHDV2 感染病例[20]。目前海南島僅有經典RHDV 感染發病的報道，未見有RHDV2 流行。經典RHDV 主要感染成年兔，對6～8 周齡兔感染性較低，對4 周齡以下幼齡兔不具備感染性。RHDV2 宿主譜更廣，可感染各種年齡家兔及歐洲野兔Cape hares 品種，是該屬唯一一個可跨種傳播的病毒[21]。RHD 潛伏期為1～6 d，持續排毒的病兔是RHD 的主要傳染源，通過與感染兔直接或間接接觸傳播，經鼻、結膜和口腔等途徑感染。RHDV 在環境中的高穩定性為其傳播提供了有利條件。

1.2.2 野兔熱 根據培養特性、致病性和地理分布，土拉熱弗朗西斯菌分為4 個亞種：A 型亞種（Tularensis，Type A）、B 型亞種（Holarctica，Type B）、中亞亞種（Mediasiatica）和新兇手亞種（Novicida）。其中A 型亞種主要分布于北美洲，對人及大多數哺乳動物具有強毒性；B 型亞種幾乎遍布整個北半球，對動物高度致病，人類也易感但致死率較低[22]；中亞亞種主要分布在中亞沙漠地區，報道病例較少，很少引起人類感染；新兇手亞種毒性較低，對人類基本無致病性。我國流行的菌株為B 型亞種[23-24]。海南島未有野兔熱發病的報道。嚙齒類哺乳動物和兔形目動物是野兔熱最主要的易感動物[25]，也有其他哺乳動物、鳥類、兩棲動物和無脊椎動物被感染的報道。野兔熱潛伏期為15 d[26]，主要通過蜱、蠅叮咬或直接接觸感染動物傳播，也可通過食入污染的水或食物傳播。

1.2.3 兔黏液瘤病 兔黏液瘤病首次于1896 年發現于烏拉圭，目前在大洋洲、美洲、歐洲、北非均有流行，我國尚未見有關報道。本病有高度的宿主特異性，只有兔類易感，其他動物和人沒有易感性。兔黏液瘤病傳染源為病兔和帶毒兔，病兔可通過眼、鼻分泌物或皮膚滲出液向外排毒。在自然界中兔黏液瘤病主要通過吸血昆蟲，如蚊子、跳蚤、刺蠅等機械傳播[27]。

1.2.4 兔球蟲病 兔球蟲病流行廣泛，呈世界性分布，在我國呈地方性流行[28]。該病一年四季均可發生，其中陰雨季節多發。病兔和帶蟲兔可持續向外界排出卵囊，經口食入被卵囊污染的水或飼料可被感染，任何品種、年齡的兔都易感，其中20～45 日齡幼兔易感性最高，發病率和致死率都較高[29]。

1.3 臨床癥狀

1.3.1 兔出血癥 經典RHDV 感染常為急性發病，表現神經和呼吸癥狀。在流行初期常見無癥狀突然抽搐死亡，死亡率可達80%～90%；5%～10%的病兔表現為亞急性或慢性發病，以明顯肝損傷和脾大為特征。RHDV2 感染以亞急性和慢性病癥為主，死亡率為50%～80%，慢性發病以全身性黃疸、體重減輕和嗜睡為特征，病程持續更久[30]。

1.3.2 野兔熱 一般表現為體溫升高，淋巴結腫大、化膿。急性病例不表現臨床癥狀呈敗血癥死亡，慢性病例多呈高度消瘦和衰竭狀[31]。

1.3.3 兔黏液瘤病 有黏液瘤型和無黏液瘤型（呼吸型）2 種表現型。嚴重的瞼結膜炎是兔黏液瘤病最常見的癥狀之一，身體各天然孔周圍及面部皮下水腫，頭部皮下腫脹嚴重時呈現典型的“獅子頭”狀，一般在感染后1～2 周死亡；呼吸型主要表現為呼吸道癥狀，皮膚結節較少且較小[32]。

1.3.4 兔球蟲病 分為肝型、腸型和混合型。肝型以幼齡兔居多，腸型以3～4 月齡兔多見，多數呈混合感染而引發混合型。肝型球蟲病主要出現黏膜黃疸、腹瀉和腹圍增大等癥狀，在高溫季節死亡率較高。腸型球蟲病急性感染時病兔表現側身倒地、四肢僵直、痙攣、角弓反張、迅速死亡；慢性經過時，表現食欲減退、腹部膨脹、腹瀉、排血便。混合型球蟲病會表現肝型和腸型混合的臨床癥狀，剖檢可見白色結節病灶[33]。

1.4 診斷

1.4.1 兔出血癥 RHDV 具有凝集人“O”型紅細胞的特性，故可用血凝試驗（HA）進行初步診斷，但不可作為確診依據[34]。ELISA、膠體金試紙條等免疫學方法可以用于RHDV 檢測。RT-PCR、熒光RT-PCR、RT-LAMP 等分子生物學方法能夠鑒別經典RHDV 和RHDV2 感染[35]。我國已發布檢測兔出血癥病毒的農業行業標準[36]。

1.4.2 野兔熱 病原分離鑒定是確診野兔熱最傳統、最經典的方法，但耗時較長，也易引發實驗室感染[37]。目前常用的方法有血清凝集試驗和ELISA 等血清學方法，PCR、實時熒光PCR 等分子生物學方法[38]。我國已發布診斷野兔熱的農業行業標準[39]。

1.4.3 兔黏液瘤病 通常使用兔腎原代細胞或RK13 進行病毒分離培養，采用免疫熒光試驗、中和試驗、瓊脂擴散試驗、PCR 和組織病理學方法進行病毒鑒定[40]。我國已發布瓊脂擴散試驗檢測兔黏液瘤病毒的農業標準和行業標準[41-42]。

1.4.4 兔球蟲病 傳統形態學診斷可采取飽和鹽水漂浮法檢查病兔糞便或者腸道內容物中是否有球蟲卵囊；實驗室診斷多采用多重PCR、熒光PCR等分子生物學技術或補體結合試驗、ELISA[43]等血清學方法。我國已發布兔球蟲檢測行業標準[44]。

1.5 防控

1.5.1 兔出血癥 本病尚無有效的治療方法，只能采取以預防為主的綜合防控措施，注射疫苗是防控該病最有效的手段。目前已有數種針對經典RHDV 的商品化疫苗，但是經典RHDV 疫苗不能有效保護RHDV2 感染。

1.5.2 野兔熱 鏈霉素是治療野兔熱最有效的抗生素，此外慶大霉素、金霉素、土霉素也可用于該病的治療。預防該病的方法主要是驅除野生嚙齒動物和吸血昆蟲，嚴格做好防疫和隔離消毒工作。另外，接種土拉桿菌凍干減毒活菌苗也可預防該病[45]。

1.5.3 兔黏液瘤病 本病尚無有效的治療方法。免疫接種、控制媒介昆蟲、防止與野兔直接或間接接觸、加強疫區運輸工具的消毒處理可防控本病的發生。國外一般用黏液瘤病毒減毒活疫苗進行免疫，目前一種新型三價重組減毒黏液瘤病毒載體RHDV 和RHDV2 疫苗已獲準在歐盟使用[46]。

1.5.4 兔球蟲病 本病尚無商品化疫苗。一般采用磺胺喹噁啉、二甲氧嘧啶、地克珠利和復方新諾明等抗球蟲藥物進行治療，由于兔球蟲非常容易產生耐藥性，因此治療過程中要注意交替使用不同藥物。此外，加強飼養管理，做好兔舍內的清掃工作，定期對兔舍和周圍環境進行消毒，引進兔種時進行嚴格檢驗檢疫并隔離，定期取兔糞進行鏡檢，發現球蟲卵囊立即采取隔離治療或淘汰[47]等措施，也可有效防控該病發生。

2 風險評估

2.1 傳入評估

RHDV 和RHDV2 在世界范圍內廣泛分布，近年來RHDV2 在歐洲、非洲、北美以及澳大利亞均有流行。病兔可通過糞便、尿液、鼻液、淚液、皮膚及生殖道分泌物向外排毒。因此，來自疫區活兔的帶毒風險為“高”。

野兔熱的傳染源為帶菌兔。根據亞種的分布，來自北美洲的活兔攜帶A 型亞種的可能性高，來自北半球的兔均有攜帶B 型亞種的可能。因此，來自疫區活兔的帶毒風險為“高”。

兔黏液瘤病主要流行于大洋洲、美洲和歐洲諸國，我國尚無兔黏液瘤病的公開報道。該病的傳染源為病兔和帶毒兔。病兔可通過眼、鼻分泌物，皮膚滲出液或生殖道分泌物向外排毒，臨診癥狀不典型的病兔或者健康攜帶者也可向外排毒。因此，來自疫區活兔的帶毒風險為“高”。

兔球蟲病在世界范圍內廣泛分布。病兔以及健康攜帶者均可持續向外界排出卵囊。因此，來自疫區活兔的攜帶球蟲風險為“高”。

綜上所述，4 種疫病均可由活兔攜帶，因此進境活兔傳帶4 種疫病的風險均為“高”。

2.2 暴露評估

RHD 可經消化道和呼吸道傳播，接觸糞便等排泄物或污染的飼料、飲水、設備等均可被感染，經典RHDV 主要感染成年兔，RHDV2 可感染不同年齡和品種的兔；野兔熱主要通過蚊、蜱、蠅的叮咬或直接接觸感染動物而傳播，也可能通過食入污染的水或食物傳播，野兔熱是人獸共患病，人類也可能通過直接接觸患病動物而被感染；兔黏液瘤病主要通過吸血節肢動物的口器而機械傳播；健康兔可通過與感染兔球蟲病兔直接或間接接觸而被傳染，同時也可通過被污染的飼料、飲水、灰塵、用具、兔毛、環境及飼養管理人員和獸醫工作人員的手、衣服和鞋子等而被感染。

若進境兔為種兔，在引進中轉基地隔離后將進入市場流通環節，進入全國各地養殖場所，用于后續的配種和繁育，與易感動物接觸的可能性很高。因此，判定暴露風險為“高”。

若進境兔為實驗用兔，進境后將在相對封閉的環境下飼養，用于科學實驗或教學等，與原有的實驗兔直接接觸風險高，與外界的易感動物直接接觸可能性小，但不排除在節肢動物活動的季節，由節肢動物將野兔熱、兔黏液瘤病等傳播給外界易感動物的可能性。因此，判定暴露風險為“高”。

綜上所述，易感動物暴露風險為“高”。

2.3 后果評估

RHD 在我國呈地方性流行，被稱為養兔業頭號殺手，兩種病毒型均可引發較高的發病率和致死率，且RHDV2 感染的控制難度和危害高于經典RHDV 感染。我國于2020 年首次發現RHDV2，因其與經典RDHV 交叉免疫性較弱，現有疫苗不能提供完全免疫保護，一旦發病將迅速在群體內傳播，且無有效的治療手段，感染后的清除難度大。

兔黏液瘤病在我國目前尚未被發現，試驗證明兔黏液瘤病毒對我國家兔的感染率和致死率均為100%。如果傳入，造成的危害和經濟損失將無法估量，且兔黏液瘤病以機械性傳播為主，一旦傳入，將難以根除。

我國歷次暴發的野兔熱均由B 型亞種引起。一旦致病性強的A 型亞種傳入我國并流行，除了引發兔養殖業的嚴重經濟損失外，作為人獸共患病，還可能會導致人類感染甚至死亡。

兔球蟲病在我國呈地方性流行，是養兔業長期面臨的難題之一。幼兔的球蟲感染率為90%，死亡率為60%。兔感染球蟲后通常表現亞臨床癥狀，即兔表觀正常，但飼料轉化率下降，生長受阻，影響各項生理指標。在我國現行的國家標準中，球蟲被列為實驗兔應排除（除普通級外）的寄生蟲之一[48]。球蟲病傳入中轉基地后將持續產生負面影響。

上述4 種疫病隨進境兔種質資源進入中轉基地并暴露后將產生一系列的負面影響，短期內會造成大量易感動物感染淘汰，長期可能嚴重影響相關科研進展和生物醫藥產業生產，在造成大量經濟損失的同時，對三亞打造全球種質資源引進中轉保藏交易平臺也具有極大的負面影響。與此同時，上述疫病的傳入將對以海南兔（lepus hainanus）為代表的珍稀瀕危野生動物帶來毀滅性打擊，威脅我國的生態安全。

因此，4 種疫病傳入我國的后果評估風險為“極高”。

2.4 綜合評估

綜合分析認為，在不采取任何風險管理措施的情況下，兔出血癥、兔黏液瘤病、野兔熱和兔球蟲病4 種疫病隨活兔傳入的風險為“高”，暴露評估結果為“高”，依據綜合評價矩陣，4 種疫病傳入并暴露的風險為“高”，結合后果評估，進境活兔傳帶4 種疫病的風險為“極高”。

3 風險管理

根據上述風險評估結果，需根據實際引種需求和全球動植物種質資源引進中轉基地保障能力制定適當的風險管理措施，以控制活兔帶毒為關鍵控制點，將4 種疫病隨兔種質資源引進而傳入的風險降至可接受水平。

3.1 高水平設施建設與技術保障能力提升

3.1.1 建設高水平隔離檢疫設施 建設符合種兔隔離檢疫生物安全要求的高水平設施；選址遠離東方大田、白沙邦溪、陵水南灣等自然保護區；隔離檢疫設施與外界設置合理的生物安全屏障；配套相應的無害化處理設施。

3.1.2 提升檢疫實驗室技術保障能力 針對兔出血癥、兔黏液瘤病、野兔熱和兔球蟲病的檢測診斷技術需求，在實驗室現有的技術基礎上開展能力建設，通過CNAS 等認證認可，獲得相應的實驗室等級資質；開展相關項目的實驗室能力驗證；提升技術人員業務水平，持續保障種質資源的引進中轉生物安全。

3.2 進出境動物檢疫監管能力建設與提升

3.2.1 提升動物疫情風險預警能力 研究建立適合中轉基地的全球動物疫病疫情風險預警系統，針對兔出血癥、野兔熱、兔黏液瘤病和兔球蟲病進行全數據采集和分析，及時發布疫情風險預警信息。

3.2.2 提升風險評估與風險管理能力 建設中轉基地動物檢疫風險分析專家隊伍，針對中轉基地及引種需求，科學靈活對特定輸出國、疫病流行情況、種質資源類型、國內應用場景開展針對性風險評估。根據風險評估結果，提出針對性境外檢疫技術要求和管理要求，同時根據中轉基地可接受風險水平制定境內檢疫監管技術要求（包括抽樣策略、試劑敏感性和特異性等檢測要求及隔離飼養要求等）。

3.2.3 制定新型檢疫監管制度 根據全球動植物種質資源引進中轉基地的特殊情況，在海南自由貿易港“一線放開，二線管住”的制度框架下，制定科學高效的進境活兔隔離檢疫管理制度。對于遺傳背景清晰、來源明確、入境后在僅在島內使用的科研用兔，在開展針對性風險評估后可適當放寬檢疫要求，在指定場所邊隔離邊科研，在確保生物安全的同時保障科研進度和產業發展。

3.2.4 提升風險監測和信息追溯能力 種質資源引進后，在繁育和使用過程中進行持續性抗原抗體檢測，構建生物安全信息全鏈條追溯系統。制定科學的應急預案，一旦發現風險及時采取相應的措施，保障風險不外泄。

3.2.5 充分開展風險交流 在引種前組織境外農場、進出口商、引種企業、境外監管部門、國內監管部門、研究機構等利益相關方充分開展風險交流，就引種可能帶來的風險交換意見，提升風險管理措施的一致性和科學性。