肝細胞癌組織中PHF2表達與臨床病理特征及預后的關系

楊軍 孫龍 趙健全 季驪 宋輝

原發性肝癌是我國常見惡性腫瘤，死亡率占惡性腫瘤前三[1-2]。目前關于肝細胞癌發生機制尚未完全明確[3]。有學者發現，PHF手指蛋白2(PHF2)參與惡性腫瘤的發生和發展[4]。PHF2是Jmjc家族成員之一，位于9q22.31，能夠調控靶基因的轉錄。PHF2在結腸癌、胃癌組織中呈低表達，并且低表達影響預后，并能促進腫瘤進展，但在肝細胞癌作用沒有完全清楚[5]，與腫瘤臨床病理特征及預后關系尚不清楚。我們檢測肝細胞癌病人癌組織及癌旁組織中PHF2表達情況，分析其與臨床病理特征、預后的關系。

對象與方法

一、對象

2015年1月～2019年1月診治的肝細胞癌病人121例，術前未做過任何針對本病的治療。年齡44～81歲，平均年齡(50.50±5.15)歲；男性86例、女性35例；脈管癌栓97例；腫瘤直徑1.25～11.51 cm，平均(5.26±1.45)cm；病理分級Ⅰ級16例、Ⅱ級64例、Ⅲ級26例、Ⅳ級15例；血清HBsAg陰性21例、陽性100例；肝硬化97例；吸煙史94例；飲酒史106例。納入標準：(1)病理檢查為肝細胞癌；(2)成年病人；(3)知情同意。排除標準：酒精性脂肪肝；妊娠期哺乳期；合并其他惡性腫瘤；合并代謝性疾病；血液性疾病。

二、方法

1.臨床資料收集：包括年齡、性別、腫瘤直徑、病理分級、血清HBsAg、肝硬化、吸煙史和飲酒史。血清HBsAg陽性標準≥20 ng/ml，陰性<20 ng/ml。病理分級參考《中國常見惡性腫瘤診治規范》中的Edmondson分級法，Ⅰ級癌細胞形態似正常肝細胞、Ⅱ級癌細胞略異型、Ⅲ級癌細胞異形明顯、Ⅳ級癌細胞形態變異大。

2.肝細胞癌病人癌組織及癌旁組織中PHF2表達檢測：手術取除肝細胞癌組織及癌旁組織(近腫瘤邊緣2 cm)。采用免疫組化SP法。組織切片經二甲苯、不同濃度酒精脫蠟，枸櫞酸鈉修復抗原，過氧化物酶封閉15分鐘。加入兔抗人PHF2抗體(1∶200，Abcam 公司)，4 ℃冰箱過夜。二抗1小時，3,3'-二氨基聯苯胺四鹽酸鹽顯色5分鐘，依次通過蘇木素、鹽酸酒精、氨水，通過不同濃度酒精、二甲苯，封片。PHF2陽性位于細胞核。(1)染色程度：無0分，淺黃色1分,黃色2分，棕黃色3分。(2)每張高倍鏡下選5個視野，計算陽性細胞百分比：<5% 為0分。5%～25%為1分，25%～50%為 2分，>50%為3分。(1)+(2)<2為陰性，≥2為陽性。

3.隨訪：采用電話隨訪及門診復查等方式統計病人3年生存情況及生存時間，如病人失聯則聯系其親屬。

三、統計學方法

結果

1.癌組織及癌旁組織的PHF2表達情況比較見表1、圖1。結果表明，癌旁組織中PHF2陽性表達率高于癌組織，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 癌組織及癌旁組織的PHF2表達情況比較(例，%)

A.癌旁組織(SP×20);B.癌組織(SP×20)圖1 癌旁組織及癌組織PHF2表達

2.癌組織中PHF2表達情況與肝細胞癌臨床資料關系分析見表2。結果表明，PHF2表達與年齡、性別、吸煙史、飲酒史無關(P>0.05)；PHF2表達與腫瘤直徑、病理分級、血清HBsAg、肝硬化有關(P<0.05)。

表2 癌組織中PHF2表達情況與肝細胞癌臨床資料的關系(例，%)

3.肝細胞癌病人組織中PHF2表達與預后的關系分析：PHF2陰性表達病人平均生存時間為(16.24±2.11)個月，陽性表達為(21.29±2.18)個月，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖2。多因素Cox回歸分析顯示，病人預后與腫瘤直徑、年齡、性別、飲酒史、肝硬化、血清HBsAg無關，而與病理分級、PHF2表達相關(P<0.05)。見表3。

圖2 肝細胞癌病人組織中PHF2表達與預后的關系

表3 多因素Cox回歸分析肝細胞癌預后相關的危險因子

討論

近年來肝細胞癌發病率逐漸升高，大部分病人確診時已是中晚期，錯失最佳手術時機。早期診斷對改善預后尤為重要。

PHF2也稱為KDM7C，主要在正常組織表達，可通過甲基化賴氨酸進行調控基因的轉錄。多項研究表明，PHF2在多種惡性腫瘤組織中低表達，與腫瘤的臨床病理特征、預后有關。但PHF2在肝細胞癌中的表達尚不清楚[6-8]。本研究結果顯示，肝細胞癌組織中PHF2低表達，提示PHF2可能參與了肝細胞癌的發生。我們分析可能是PHF2的去甲基化，促進凋亡基因轉錄，導致腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞的增殖，從而抑制腫瘤生長。病理分級與腫瘤預后密切相關，分級越高病人預后越差，本研究發現PHF2表達水平與病理分級、腫瘤直徑有關，可能是因為PHF2下調失去了對腫瘤的抑制作用，從而使腫瘤的侵襲、遷移等行為增強，導致分期的升高，腫瘤直徑的增加。乙肝病毒是肝癌的病因之一，此類病人預后不佳。本研究結果顯示，PHF2表達水平與血清HBsAg、有肝硬化有關，提示PHF2在乙肝病毒感染病人中起到特殊作用。

我們分析了PHF2表達與肝細胞癌病人預后的關系，結果顯示，PHF2陰性表達病人的預后較差，與文獻結果相似[9-10]。有研究顯示，Wnt、P13K/AKt/mTOR信號通路在原發性腫瘤表達上調[11-12]；與腫瘤的增殖、凋亡及轉移關系密切，但關于PHF2是否通過抑制Wnt、P13K/AKt/mTOR信號通路或激活P53信號通路發揮抑癌作用的尚不清楚。我們還將進一步探索PHF2是通過何種信號通路對肝癌的發生、發展及生物學行為產生影響。

綜上所述，肝細胞癌病人癌組織中PHF2低表達，與臨床病理特征及預后有關，有望成為潛在的靶點。