復(fù)方苦參注射液配伍穩(wěn)定性研究

段秀梅，王鵬飛，張亞錳，畢小鳳，秦文杰，海麗娜

(北京振東光明藥物研究院，北京100085)

復(fù)方苦參注射液是由苦參、白土苓經(jīng)過(guò)提取精制而成的中藥注射液，具有清熱利濕、涼血解毒、散結(jié)止痛的功效，用于癌腫疼痛、出血，是山西振東制藥股份有限公司的獨(dú)家產(chǎn)品。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，其具有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、提高機(jī)體免疫力等多種藥理作用[1-2]，臨床應(yīng)用廣泛，包括非小細(xì)胞肺癌[3]、原發(fā)性肝癌[4]、胃癌[5]、結(jié)直腸癌[6]等重癥疾病的輔助治療。

研究表明，復(fù)方苦參注射液與參麥注射液配伍后治療晚期惡性腫瘤療效顯著，可有效改善患者免疫功能，值得臨床推廣應(yīng)用[7]，與腫瘤科常用藥物配伍后，穩(wěn)定性較好[8]。隨著復(fù)方苦參注射液在臨床上的廣泛應(yīng)用，其配伍也逐漸引起了人們的重視。目前復(fù)方苦參注射液配伍研究中稀釋劑的選擇，除了說(shuō)明書(shū)中已經(jīng)明確的0.9%氯化鈉注射液外，文獻(xiàn)報(bào)道的還有復(fù)方苦參注射液與氯化鈉及葡萄糖注射液的配伍穩(wěn)定性研究[9-12]，其配伍穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)項(xiàng)目主要有外觀性狀、pH值、不溶性微粒數(shù)量，有效成分含量測(cè)定較少。本研究在室溫條件下，除配伍液外觀、pH值、不溶性微粒數(shù)外，還增加了滲透壓、生物堿、黃酮、番石榴酸的含量變化、指紋圖譜等指標(biāo)，分別考察了復(fù)方苦參注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液和10%葡萄糖注射液配伍后的穩(wěn)定性，確定臨床配伍后使用時(shí)是否存在理化方面的變化，以期為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

Waterse2695型高效液相色譜儀-紫外檢測(cè)器；電子天平(梅特勒-托利多上海科技有限公司)；pH計(jì)(梅特勒-托利多上海科技有限公司)；微粒檢測(cè)儀(GWJ-16，天大天發(fā)科技有限公司)；澄明度檢測(cè)儀(YB-2，天大天發(fā)科技有限公司)；全自動(dòng)冰點(diǎn)滲透壓計(jì)(FM-8P，上海醫(yī)大儀器有限公司)。甲醇(FEPRUE)，色譜級(jí)；磷酸(北京化工廠)，優(yōu)級(jí)純；磷酸二氫鉀(北京邁瑞達(dá)科技有限公司)，分析純。

1.2 對(duì)照品及樣品

苦參堿(批號(hào)：10805-201709，純度98.7%)，氧化槐果堿(批號(hào)：111651-200301，純度100%)，槐定堿(批號(hào)：110784-201706，純度98.8%)，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；氧化苦參堿(批號(hào)：Y-013-171216，純度99.24%)，槐果堿(批號(hào)：H-031-171226，純度96.95%)，均購(gòu)自成都瑞芬斯生物科技有限公司；甲基氧化偶氮甲醇櫻草糖苷、番石榴酸、三葉豆紫檀苷(自制，經(jīng)面積歸一化法，純度>99%)。樣品信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 配伍方法

復(fù)方苦參注射液標(biāo)準(zhǔn)中的[用法與用量]為靜脈滴注，一次20 mL，用氯化鈉注射液200 mL稀釋后應(yīng)用，一日1次。但通常臨床使用時(shí)，常用氯化鈉注射液250 mL進(jìn)行稀釋。臨床輸液一般滴速控制在40～60滴/min。結(jié)合滴速，可計(jì)算出最長(zhǎng)滴注時(shí)間為2.25 h，最短滴注時(shí)間為1.5 h。綜上，本研究分別取20 mL復(fù)方苦參注射液與250 mL稀釋液(0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液)配伍，配伍后在室溫下靜置8 h，分別在0、1、2、4、8 h觀察配伍液的性狀，測(cè)定配伍液的pH值、不溶性微粒、含量及指紋圖譜等。

表1 樣品信息

2.2 溶液配制

取復(fù)方苦參注射液4 支(5 mL/支)，分別加入0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液中，混勻，常溫放置，備用。

2.3 性狀、溶液顏色、可見(jiàn)異物、澄清度考察

分別于配制后0、1、2、4、8 h考察配伍液的性狀、溶液顏色、可見(jiàn)異物、澄清度，結(jié)果顯示，復(fù)方苦參注射液與各稀釋液配伍后8 h內(nèi)性狀、顏色無(wú)明顯變化，始終保持澄清透明，且無(wú)可見(jiàn)異物產(chǎn)生。(參照2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》(四部)的“溶液顏色檢查法”“澄清度檢查法”“可見(jiàn)異物檢查法”)

2.4 pH值

分別于配制后0、1、2、4、8 h考察配伍液的pH值；復(fù)方苦參注射液與各稀釋液配伍后，8 h內(nèi)pH值均無(wú)顯著變化(RSD<2.00%)，詳見(jiàn)表2。(參照2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》(四部)的“pH值測(cè)定法”)

2.5 不溶性微粒測(cè)定

參照2020版《中華人民共和國(guó)藥典》(四部)通則中“不溶性微粒檢測(cè)法(光阻法)”，分別于配制0、1、2、4、8 h后取樣檢查，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，復(fù)方苦參注射液與各稀釋液配伍8 h內(nèi)，不溶性微粒數(shù)量略有波動(dòng)，但均符合2020版《中華人民共和國(guó)藥典》(四部)對(duì)于注射液的相關(guān)規(guī)定(標(biāo)示裝量為100 mL或100 mL以上的靜脈用注射液，除另有規(guī)定外，每1 mL中含10 μm及10 μm以上的微粒數(shù)不得過(guò)25粒，含25 μm及25 μm以上的微粒數(shù)不得過(guò)3粒)，推測(cè)可能配制過(guò)程中注射液與稀釋液混勻產(chǎn)生的微小氣泡“假粒”的干擾，導(dǎo)致不溶性微粒數(shù)據(jù)不穩(wěn)定。

2.6 含量測(cè)定

2.6.1 色譜條件 采用Waters XSelect CSHTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相甲醇(A)-0.2%磷酸二氫鉀(磷酸調(diào)pH=3.0)(B)，梯度洗脫(0～10 min，3%甲醇；10～15 min，3%→5%甲醇；15～24 min，5%→15%甲醇；24～30 min，15%甲醇；30～55 min，15%→85%甲醇；55～60 min，85%甲醇)。檢測(cè)波長(zhǎng)211 nm，柱溫30 ℃，流速0.6 min/mL，進(jìn)樣量10 μL。

2.6.2 空白溶液制備 0.2%磷酸二氫鉀溶液-甲醇=85∶15混合溶液，過(guò)濾即得。

2.6.3 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取苦參堿對(duì)照品，氧化苦參堿對(duì)照品，氧化槐果堿對(duì)照品適量，加空白溶液制成每1 mL含苦參堿0.3 mg，氧化苦參堿0.9 mg，氧化槐果堿0.3 mg的混合對(duì)照品溶液Ⅰ，搖勻，即得；精密稱(chēng)取槐果堿對(duì)照品，槐定堿對(duì)照品，甲基氧化偶氮甲醇櫻草糖苷對(duì)照品適量，加空白溶液制成每1 mL含槐果堿0.1 mg，槐定堿0.1 mg，甲基氧化偶氮甲醇櫻草糖苷0.1 mg的混合對(duì)照品溶液Ⅱ，搖勻，即得。分別精密量取混合對(duì)照品溶液Ⅰ、Ⅱ 2 mL，置10 mL量瓶中，用空白溶液稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液1。精密稱(chēng)取番石榴酸及三葉豆紫檀苷對(duì)照品適量，加空白溶液制成每1 mL含番石榴酸0.05 mg、三葉豆紫檀苷0.03 mg的混合對(duì)照品溶液2。

表3 8 h內(nèi)各配伍液不溶性微粒數(shù)量測(cè)定結(jié)果

2.6.4 供試品溶液 分別精密量取“2.1”項(xiàng)下配制0、1、2、4、8 h后的溶液各2 mL，置10 mL量瓶中，加空白溶液至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。色譜見(jiàn)圖1。

注：a.空白溶液；b.對(duì)照品1；c.對(duì)照品2；d.復(fù)方苦參注射液樣品。峰1：甲基氧化偶氮甲醇櫻草糖苷；峰2：苦參堿；峰3：槐果堿；峰4：槐定堿；峰5：氧化槐果堿；峰6：氧化苦參堿；峰7：番石榴酸；峰8：三葉豆紫檀苷。

2.6.5 含量測(cè)定 精密量取“2.6.3”項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液和“2.6.4”項(xiàng)下制備的供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算甲基氧化偶氮甲醇櫻草糖苷、苦參堿、槐果堿、槐定堿、氧化槐果堿、氧化苦參堿、番石榴酸、三葉豆紫檀苷的含量，以0 h的含量為100%，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的相對(duì)百分含量。結(jié)果見(jiàn)表4、表5、表6，8 h內(nèi)各配伍液中檢測(cè)組分含量百分比無(wú)顯著變化。

表4 8 h內(nèi)各配伍液含量測(cè)定結(jié)果(一)(以0 h含量為100計(jì))

表5 8 h內(nèi)各配伍液含量測(cè)定結(jié)果(二)(以0 h含量為100計(jì))

表6 8 h內(nèi)各配伍液含量測(cè)定結(jié)果(三)(以0 h含量為100計(jì))

2.6.6 指紋圖譜相似度分析 參照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，按“2.6.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，記錄色譜圖。使用國(guó)家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012.130723版)”進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過(guò)與對(duì)照指紋圖譜比對(duì)，計(jì)算相似度，結(jié)果見(jiàn)表7。各配伍液的相似度均在0.98以上，說(shuō)明各樣品在0～8 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

表7 8 h內(nèi)各配伍液相似度結(jié)果

3 討論

關(guān)于復(fù)方苦參注射液的配伍穩(wěn)定性，相關(guān)文獻(xiàn)中也有報(bào)道。溫虹[13]發(fā)現(xiàn)復(fù)方苦參注射液與5%葡萄糖注射液配伍30 min時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)顆粒狀乳黃色沉淀，4 h時(shí)顆粒狀乳黃色沉淀更多，但是另幾篇報(bào)道中未出現(xiàn)該情況，此次實(shí)驗(yàn)也未出現(xiàn)此情況。

雖然實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示復(fù)方苦參注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍均無(wú)明顯變化，但是本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)3批5%葡萄糖注射液的pH 值為4.31～4.84，3批10%葡萄糖注射液的pH值為3.95～4.17，而復(fù)方苦參注射液中含大量生物堿類(lèi)成分，因此建議臨床最好選擇0.9%氯化鈉注射液配伍使用。