ＨＰＬＣ法測定不同產地雞屎藤葉中雞屎藤苷、雞屎藤苷酸含量

摘要：目的：建立高效液相色譜法（HPLC）同時測定不同產地雞屎藤葉中雞屎藤苷、雞屎藤苷酸含量。方法：采用HPLC法對13批雞屎藤葉進行測定，色譜柱：Shim-pack GIST C18-AQ（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-0.1%磷酸為流動相，梯度洗脫，檢測波長240 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃。結果：雞屎藤苷和雞屎藤苷酸在標準曲內線均有較好的線性關系（r2＞0.999 5），且該方法具有良好的精密度、靈敏度、重復性和準確度；同時測定了13批不同產地雞屎藤葉中雞屎藤苷、雞屎藤苷酸的含量。結論：該方法快速、可靠，適用于雞屎藤藥材及其制劑的質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜；含量測定；雞屎藤苷；雞屎藤苷酸

雞屎藤［Paederia scandens（Lour.）Merr］為茜草科植物雞屎藤的全草及根，又名雞矢藤、牛皮凍、斑鳩飯［1］，屬多年生草質藤本，因其莖葉揉爛時有一股雞屎味而得名［2-3］，具有消炎解毒、祛風除濕、消食化積、活血止痛等功效［4-5］，雞屎藤的葉可治痢疾、濕疹、風濕筋骨痛、跌打損傷、瘡瘍腫毒等癥，是我國南方民間常用的藥材和食物，搗粉為湯可治咳嗽、痢疾，鮮葉搗爛敷患處可治背疽。除此之外，雞屎藤葉還是海南著名小吃雞屎藤粑仔的主要原料［6］。

雞屎藤廣泛分布于我國南方，主要產地包括海南、廣東、廣西、四川、貴州、云南、安徽、江蘇、浙江、湖南、江西、福建、臺灣、香港等［7-8］。雞屎藤在我國產地眾多，資源豐富，但品質良莠不齊，缺乏道地性，極大地限制了其發展。雞屎藤環烯醚萜苷類成分是雞屎藤的主要藥理活性成分［9］，含有S元素（甲硫基），是一類特殊結構的環烯醚萜苷類化合物［10］，具有抗炎、鎮痛、抗菌、保腎及抗腫瘤等［11-12］多種藥理作用，故選擇雞屎藤苷和雞屎藤苷酸為指標，建立其高效液相色譜（HPLC）含量測定方法，測定不同產地雞屎藤葉中雞屎藤苷和雞屎藤苷酸的含量，為雞屎藤道地產區和質量標準的制定提供科學依據。

1材料

UltiMate-3000型高效液相色譜儀（賽默飛世爾儀器有限公司），KQ5200DB型超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司），AR2140 Adventurer 電子分析天平（上海奧豪斯公司）。

雞屎藤苷、雞屎藤苷酸對照品，娃哈哈純凈水，色譜純乙腈，分析純甲醇，13批雞屎藤藥材分別采摘于海南、廣東、四川、湖南、浙江、貴州、福建等地，經遼寧中醫藥大學康廷國教授鑒定為茜草科植物雞屎藤Paederia scandens（Lour.）Men的葉。

2方法與結果

2.1對照品溶液制備

精確稱取雞矢藤苷15.48 mg、雞矢藤苷酸對照品9.675 mg，置25 mL棕色瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度線處，搖勻，制成雞屎藤苷（0.619 mg/mL）和雞屎藤苷酸對照品（0.387 mg/mL）儲備溶液，0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2供試品溶液制備

取自然干燥后的雞矢藤葉，粉碎，過80目篩。分別精確稱取粉末0.8 g，置于具塞錐形瓶中，精確加入80%甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，過濾，用甲醇補足減失的質量，0.45 μm 微孔濾膜過濾，備用。

2.3色譜條件

色譜柱：Shim-pack GIST C18-AQ（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A：0.1%磷酸水溶液，流動相B：乙腈，梯度洗脫條件：0～10 min，A：80%；10～20 min，A：68%；20～25 min，A：66%；25～28 min，A：85%；流速1 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

2.4方法學考察

2.4.1線性關系考察

準確吸取雞屎藤苷酸、雞屎藤苷對照品溶液0.25、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度線，得到不同質量濃度的對照品液，經0.45 μm 微孔濾膜過濾，按照“2.2”項下液相色譜分析條件進行測定，以對照品質量濃度（mg/mL）為橫坐標（X），峰面積A為縱坐標（Y）進行線性回歸，得到回歸方程，雞矢藤苷：Y=160.8X＋0.223 7，R2=0.999 5，線性范圍在0.001 238～0.619 000；雞矢藤苷酸：Y=246.9X＋0.598 1，R2=0.999 6，線性范圍在0.003 870～0.309 600，表明在范圍內線性關系良好。

2.4.2精密度考察

精密吸取S1雞屎藤葉供試品溶液，按照“2.2”項色譜條件連續分析檢測6次，測2種成分峰面積，RSD值分別為0.68%和0.35%，結果表明儀器的精密度良好。

2.4.3穩定性考察

精密吸取S1雞屎藤葉供試品溶液1.5 mL，置于自動進樣瓶中，分別在0、2、4、8、12、24 h時，按照“2.2”項色譜條件測定2種成分峰面積，RSD值分別為0.71%和0.89%。結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.4.4重復性考察

精密稱取S1雞屎藤葉樣品6份，每份0.8 g，按“2.2”項下方法制備的供試品溶液，按照“2.3”項下的色譜條件進行檢測，記錄2種成分峰面積，計算RSD值分別為1.87%和1.16%。結果表明本實驗方法重復性良好。

2.4.5加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的S1雞屎藤葉粉末0.8 g，精密稱定，按照0.8∶1.0，1.0∶1.0，1.0∶1.5比例，精密加入質量濃度為0.619 mg/mL雞屎藤苷和0.387 mg/mL雞矢藤苷酸對照品，配制成低、中、高質量濃度供試品溶液各3份，共9份，進行測定，按“2.2”項下制備供試品溶液，按照“2.3”項下液相色譜分析條件進行測定，記錄峰面積，計算RSD值。雞屎藤苷的平均回收率為98.92%，RSD值為1.360；雞屎藤苷酸的平均回收率為99.39%，RSD值為1.004。

2.5樣品測定

取不同產地13批雞屎藤藥材0.8 g，精密稱定，按“2.2”項下方法制備的供試品溶液，精密量取1.5 mL，置于自動進樣瓶中，按照“2.3”項下的色譜條件進行測定，雞屎藤苷與雞屎藤苷酸質量分數（mg/g）分別為：海口，9.373 6、2.456 8；萬寧，2.755 6、1.000 8；儋州，5.604 2、2.971 2；揭陽，22.568 2、2.115 4；陽江，31.702 8、2.164 8；欽州，18.174 8、0.738 6；玉林，18.814 4、0.742 6；廣元，1.266 6、0.845 8；內江，1.899 6、1.547 1；永州，2.460 2、0.672 4；臺州，1.005 2、0.302 1；畢節，1.120 4、2.033 1；廈門，7.419 6、0.495 4。

3討論

對100%甲醇、80%甲醇、60%甲醇3種溶劑以及超聲和加熱回流兩種提取方法進行了單因素考察，結果表明80%甲醇提取效果最好，超聲和加熱回流兩種提取方法含量相近，故選擇節約時間的超聲提取方式。

建立了一種同時測定雞屎藤中雞屎藤苷和雞屎藤苷酸含量的方法，通過方法學考察證明該方法重復性較好，方法準確、科學、操作簡便，可為完善桑葉質量標準提供標準化、規范化的依據。含量測定的結果表明，雞屎藤苷含量排前三的產地為廣東陽江、廣東揭陽、廣西玉林；雞屎藤苷酸含量排名前三的產地為海南儋州、海南海口、廣東陽江。為雞屎藤的開發利用提供科學依據，為建立雞屎藤質量標準提供參考信息。

參考文獻：

［1］高天元，馬羚，蔣桂華.雞矢藤的藥用情況考證［J］.中國藥房，2020，31（1）：67-74.

［2］HOSHIKA Y，MURAYAMA N.Analysis of odorants discharged from paederia chinsis［J］.Kogai to Taisaku，1983，19（5）：491-493.

［3］黃國凱，黃海波.雞矢藤的質量標準研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2017，28（4）：519-522.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·臨床用藥須知：中藥飲片卷［S］. 2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2011：644-645.

［5］上海市衛生局. 上海市中藥材標準［S］. 1994：158.

［6］陸文，曾冬琴，李曉斌，等.海南省藥食兩用植物雞屎藤資源調查［J］.熱帶林業，2017，45（3）：38-41.

［7］唐超玲，韓冬苗，孫萬瑩，等.南藥雞矢藤的現代藥學研究進展［J/OL］.海南醫學院學報：1-10［2023-03-29］.

［8］王星星，王重娟，李仲昆.雞矢藤的化學成分及藥理活性研究進展［J］.世界中醫藥，2021，16（5）：826-830.

［9］WU Z J，WANG J H，FANG D M，et al． Analysis of iridoid glucosides from Paederia scandens using HPLC-ESI-MS /MS［J］．J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2013，923-924（4）： 54-64．

［10］李紅霞，楊磊，陳小麗，等.雞矢藤環烯醚萜苷體外抗腫瘤活性研究［J］.中國藥師，2017，20（12）：2117-2122.

［11］譚玉琴，山光強，陳志剛，等.雞屎藤的化學成分、提取工藝與藥理作用研究進展［J］.中獸醫醫藥雜志，2016，35（1）：18-21.

［12］高天元，雷雨恬，唐國琳，等.藥用雞矢藤藥材化學成分的UPLC-Q-TOF-MS分析［J］.中國實驗方劑學雜志，2020，26（17）：134-141.