瑤藥五指山參藥材性狀鑒別研究*

歐春麗，龔小妹，莫單丹，唐炳蘭，候小利，周小雷，王 碩，宋志軍△

（1.廣西壯族自治區中藥資源智慧創制工程研究中心，廣西 南寧 530023；2.廣西藥用資源保護與遺傳改良重點實驗室，廣西 南寧 530023）

五指山參為錦葵科植物箭葉秋葵Abelmoschus sagittifolius（Kurz）Merr.的根，別名銅皮、小紅芙蓉（云南）、巖酸（云南思茅）、榨桐花（貴州）和紅花參等［1-4］，常見于低丘、草坡、曠地、稀疏松林下或干燥的貧瘠地。在國外主要分布于越南、老撾、柬埔寨、澳大利亞等地［1，5］，在我國主要分布于廣東、海南、廣西、云南等地，其中廣西主要在南寧、桂林、崇左等地分布［6］。五指山參味甘、淡，性微溫，具有滋陰潤肺、和胃、解毒排膿功效，內服用于肺燥咳嗽、肺癆、胃痛、疳積、神經衰弱及腸鳴痢疾等病癥［1-2］，外用可祛瘀消腫，用于跌打扭傷和接骨等。現代藥理學研究表明，五指山參具有調血脂、清除氧自由基、抗氧化、抗腫瘤和調節免疫等活性［6-7］。既往主要集中于對其植物學特征和栽培方式的探索［8-12］，相關的藥材性狀鑒別研究報道極少。五指山參為廣西瑤族民間習用藥材，《廣西壯族自治區瑤藥材質量標準（第二卷）》擬收載該品種，在此對廣西產五指山參的性狀、顯微鑒別、薄層色譜（TLC）鑒別及其灰分、水分、浸出物等進行系統研究，旨在為該藥材的鑒別及開發利用提供依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

RM2255 型石蠟切片機、DM2000 型生物顯微鏡、（德國Leica 公司）；CP224S 型電子分析天平（德國Sartorius 公司）；SX2-4JOA 型箱式電阻爐（上海比爾得儀器實業有限公司）；101-1型電熱鼓風干燥箱（上海滬南科學儀器聯營廠）；W201型恒溫浴鍋（上海申生科技有限公司）；高速萬能粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；Milli-Q Academic超純水儀（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

薄層色譜硅膠GF254板（青島海洋化工有限公司，批號為20180609，規格為50 mm × 100 mm、厚度0.20～0.25 mm）；甲醇、乙醇、乙酸、乙酸乙酯均為分析純，水為超純水。五指山參藥材采集于廣西各地（見表1），經廣西中醫藥大學韋松基教授及廣西中醫藥研究院賴茂祥教授和黃云峰副研究員鑒定為箭葉秋葵Abelmoschus sagittifolius（Kurz）Merr.，樣品保存于廣西藥用植物研究所中藥標本室。

表1 藥材樣品信息Tab.1 Information of Abelmoschus sagittifolius samples

2 方法與結果［8-12］

2.1 藥材性狀

觀察藥材的形狀、大小、顏色、斷面、氣味等并描述分析藥材性狀。藥材樣品長約14 cm，肉質較膨大，呈圓柱狀或圓錐狀，上端有不明顯橫紋，中部橫紋較明顯，無蘆頭，根頂部有殘留莖基，顯柴性，略顯青色；質柔軟易斷，表面顯淡黃色或淡白色，斷面白色略顯粉性，有筋脈點突起的同在。詳見圖1。

圖1 藥材樣品外觀Fig.1 Appearance of Abelmoschus sagittifolius

2.2 顯微鑒別

顯微鏡下觀察藥材樣品根部橫切面的石蠟切片，木栓層細胞數列，長方形，為4～8 余列扁平細胞；栓內層細胞為2～5余列長方形細胞，壁稍增厚，有時可見石細胞散在；皮層窄，類圓形，皮層附近薄壁細胞處有較多棕色塊和菊糖；中柱鞘纖維和石細胞相伴，斷續排列成環狀；韌皮部以內纖維束成群散在，其外側散有石細胞；導管大小不一，2～10 個相連徑向排列或單個散在，其中木質部導管較大，單個或數個聚集；薄壁細胞中富含淀粉粒；木纖維成群分布；髓部細胞類圓形，胞間隙小三角形。詳見圖2。

圖2 藥材樣品根橫切面顯微圖1.Phellem layer 2.Brown lump 3.Phloem 4.Cortex 5.Vessel 6.Starch 7.Cracks 8.InulinFig.2 Micrograph of the cross section of the root of Abelmoschus sagittifolius

2.3 粉末顯微特征

顯微鑒別要點，草酸鈣簇晶大而棱角尖銳是其顯微鑒別的主要特征。顯微鏡下觀察藥材樣品粉末（過40目篩）。呈淡黃白色；淀粉粒多見，單粒呈類球形，直徑約1～6 μm，臍點點狀、裂隙狀，不規則棒球形偶見，臍點在小端，復粒由2～3 分粒組成；草酸鈣簇晶棱角尖銳，直徑10～30 μm；方晶少見。導管多為具緣紋導管和螺紋導管，直徑23～31 μm；纖維單個散在或成束，壁連珠狀增厚。詳見圖3。

圖3 藥材樣品粉末顯微圖1.Fiber bundle 2.Starch granule 3.Inulin 4.Calcium oxalate cluster crystal 5.VesselFig.3 Micrograph of the powder of Abelmoschus sagittifolius

2.4 TLC 鑒別

取藥材樣品粉末2 g，加80%乙醇50 mL，超聲（功率200 W，頻率40 kHz，下同）處理60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL 使溶解，依次用石油醚（60～90 ℃）和乙酸乙酯提取，各提取2 次，每次10 mL，棄去石油醚提取液，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。取對照藥材粉末2 g，加80%乙醇50 mL，超聲處理60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL 使溶解，用甲醇提取2 次，每次10 mL，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，作為對照藥材溶液。按2020年版《中國藥典（四部）》通則0502，吸取上述溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以劑為石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（10∶9，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點A。詳見圖4。

圖4 薄層色譜圖A.Main spots1-2，4-12.Test solution 3 Reference medicinal materials solutionFig.4 TLC chromatograms

2.5 水分、總灰分、酸不溶性和浸出物含量測定

按2020 年版《中國藥典（四部）》通則0832，2302，2201 測定藥材樣品的水分、酸不溶成分、灰分和浸出物含量。結果見表2。10 批藥材樣品的總灰分含量為3.08%～8.56%，酸不溶性灰分含量為0.23%～0.87%，70%乙醇浸出物含量為11.12%～19.31%，水分含量為9.38%～12.55%。鑒于藥材樣品來自于野生資源，產地和采收情況較復雜，暫定為總灰分含量不得超過9.0%，酸不溶性灰分含量不得超過0.9%，70%乙醇浸出物含量不得少于11.0 %，水分含量不得超過13%。

表2 藥材樣品水分、灰分、酸不溶性灰分及浸出物含量測定結果（%）Tab.2 Results of the content determination of moisture，ash，acidinsoluble ash and extracts in samples（%）

3 討論

以不同體積分數的乙醇和水為溶劑提取五指山參浸出物時，水溶液浸出物含量為44.18%；用50%，60%，70%，80%，95%乙醇冷浸五指山參，其浸出物含量分別為30.66%，26.89%，17.62%，16.97%，10.31%，表明隨著乙醇體積分數的升高，浸出物含量減少。為了重點兼顧富集五指山參脂溶性和水溶性等主要活性成分，最終選取70%乙醇作為浸取液。結果以70%乙醇冷浸法浸提，10 批藥材樣品的浸出物含量均大于11.0%，因此將五指山參浸出物含量擬訂為不少于11.0%。

采用有效、簡便和重復性良好的方法可快速判定藥材質量。五指山參的TLC 鑒別目前僅能以自選藥材作對照，建立瑤藥五指山參藥材性狀鑒別方法有重要意義。本研究中所采用的方法簡單，易操作，重現性好，穩定性高，可為五指山參性狀鑒別提供科學依據。下一步課題組將繼續對其活性成分進行分離、純化，制訂其含量限度，進一步完善其質量標準。