左乙拉西坦緩釋片制備工藝研究*

楊 鑫，楊廣德，張繼業，徐 晶

（1.西安交通大學第二附屬醫院，陜西 西安 710004；2.西安交通大學醫學部藥學院，陜西 西安 710061；3.陜西省人民醫院，陜西 西安 710068）

我國癲癇總體患病率7.0‰，年發病率28.8/10萬，每年新增癲癇患者40 萬，其在我國已成為僅次于頭痛的第二大常見病［1-2］。左乙拉西坦（LEV）屬吡咯烷酮衍生物，主要用于治療局限性及繼發性全身性癲癇［3-5］，高效低毒，口服吸收快且安全，生物利用度幾近100%，其藥物代謝動力學（簡稱藥代動力學）分布與抗癲癇藥物理想的動力學分布模型相似［6-7］。2008 年美國批準UCB 公司的左乙拉西坦緩釋片（levetiracetam，Keppra XRTM）上市。2006 年11 月原國家食品藥品監督管理局（SFDA）批準進口LEV。目前國內僅原研產品在售，LEV原料藥成本較低，因此，其緩釋片的仿制藥在國內具有廣闊的應用前景。本研究中參考相關文獻、UCB公司在美國上市申請的專利、《美國藥典》（USP32-NF27）及《歐洲藥典》（EP8.0）關于LEV 質量標準的規定，擬研制以羥丙甲基纖維素（HPMC）為骨架材料、與Keppra XRTM的釋藥行為相似的LEV 緩釋片（規格為每片500 mg），且所建制備工藝需簡單易行，適合大規模生產，以為國產LEV緩釋片的開發提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜系統（含SPD -10Avp 型紫外檢測器、LC-10ATvp，LC-Solution 色譜工作站）、AY120 型電子天平（日本Shimadzu 公司）；ZRS -8G 型溶出度測試儀、YD -I 型片劑硬度測試儀、CS -2 型脆碎度測試儀（天津市鑫洲科技有限公司）；DP -30A 型單沖壓片機（北京國藥龍立科技有限公司）；TD 型電子天平（余姚市金諾天平儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；PHS -29A 型pH 計（上海雷磁創益儀器儀表有限公司）；KH5200 型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；CH-10 型槽型混合機、YK-160 型搖擺式顆粒劑（上海天和制藥機械有限公司）；HPX -250B 型恒溫恒濕箱（上海悅車儀器儀表有限公司）。

1.2 試藥

LEV原料藥（北京師宏藥物研制中心）；LEV對照品（美國國家標準局）；左乙拉西坦酸對照品（北京百靈威科技有限公司）；左乙拉西坦緩釋片（比利時UCB 公司，商品名開浦蘭）；HPMC（上海卡樂康公司，黏度類型包括K4M、K15M、K100M）；滑石粉（廣西龍勝華美滑石開發有限公司）；硬脂酸鎂、二氧化硅（浙江湖州展望藥業）；聚乙烯吡咯烷酮K30（PVPK30，西安富力化學廠）；無水乙醇（廣東省化學試劑工程技術研究開發中心）；乙腈（天津市科密歐化學試劑有限公司）；硫酸（北京化工廠）；磷酸二氫鉀、氫氧化鈉（廣東光華化學廠有限公司）；氫氧化鉀（中國化學試劑三廠）；異丙醇（美國TEDIA公司）；正己烷（美國Tedia公司）。

2 方法與結果

2.1 處方篩選

粘合劑選擇：稱取500 mg 左乙拉西坦原料藥和200 mg HPMC K15M，混勻后加入不同的粘合劑（85%乙醇、5%PVP溶液、10%PVP溶液、90%乙醇、95%乙醇）制軟材，過篩制顆粒，烘干，整粒后將干顆粒與5 mg二氧化硅、10 mg 硬脂酸鎂混勻、壓片，制備樣品緩釋片。原研片質量為（715 ± 15）mg，平均硬度為23，而兩種PVP 溶液作為粘合劑制備得到的樣品片劑硬度值均小于12，不符合要求；90%乙醇溶液制備得到的樣品片劑硬度大于18，同時片劑表面光滑無斑點，可壓性好，故選擇90%乙醇溶液作為粘合劑［8］。

緩釋材料選擇：稱取500 mg 左乙拉西坦原料藥和200 mg 不同黏度HPMC［9］，分別混勻后加入90%乙醇制軟材，過篩制顆粒，烘干，整粒后將干顆粒與5 mg二氧化硅、10 mg 硬脂酸鎂混勻、壓片，制備樣品緩釋片，溶出曲線見圖1 A。可見，隨著HPMC 黏度的增加，藥物溶出度呈逐漸降低趨勢。K4M 溶出較快，8 h 時即基本釋放完全，與原研片溶出曲線的相似因子（f2）值為60.06（＞60 為相似性較好），但與12 h 緩釋的實驗目的不符；K100M 和K15M 在前期溶出與原研片的溶出量差距較大，其12 h溶出曲線與原研片溶出曲線的f2值均小于60［10］。故考慮單用1 種緩釋材料不能很好控制LEV的12 h 有效釋放，采用不同配比的HPMC K15M 及HPMC K100M作為混合緩釋材料。結果配比為7∶3、8∶2、9∶1（m/m）時的f2值分別為78.61，68.5，65.9，可見，以7∶3 為配比的混合緩釋材料溶出曲線與原研片的溶出曲線相似度最高，12 h溶出釋放效果最理想，故選擇。溶出曲線見圖1 B。

圖1 溶出曲線A.Samples prepared by a single sustained-release material and original tablets B.Samples prepared by sustained-release materials with different ratios and original tabletssFig.1 Dissolution profiles

2.2 工藝篩選

制片方法：預試驗考察了粉末直接壓片法和濕法制粒壓片法對藥物釋放的影響。濕法制粒壓片法制得的樣品片劑表面光滑，質量為（720 ± 25）mg，且硬度值大于22，形狀與原研片接近；粉末直接壓片法制得的片劑可壓性差，片劑外表面光滑性較差，易松散，且制得的片劑質量差異較大，含量均勻度不如濕法制粒壓片。故選用濕法制粒壓片法。

篩網大小：根據常用篩網大小和文獻［11］，按處方濕法制粒后分別過16 目和24 目篩，烘干后制備樣品片劑。兩種篩網制得的樣品片劑在質量、硬度及藥物釋放方面無明顯差異，但24目篩所得樣品片劑表面更光滑、色澤更均勻。故選擇24目篩。

壓片壓力：一般通過控制片劑硬度來控制壓片壓力的大小。根據原研片的硬度和緩釋制劑常見硬度［12］，根據處方濕法制粒并干燥后考察，壓力為7 N 時，制得的樣品片劑表面光澤度較差，且有斑點出現，硬度值小于12，而壓力為8 N 及9 N 時，樣品片劑外觀無明顯差異，但以9 N 壓力壓制樣品片劑的硬度及質量均勻度與原研片更接近。故選擇壓片壓力為9 N。

2.3 中試樣品制備

按處方量1 萬片稱取LEV 原料藥粉末及選定的混合緩釋材料粉末，在槽型混合機中混勻，平行3 個批次（批號分別為20120209，20120210 -1，20120210 -2），按每片消耗約0.8 mL 90%乙醇制備軟材，使用搖擺式制粒機制成濕顆粒，放入真空干燥箱中70 ℃干燥3 h，取出，整粒。稱取處方量的二氧化硅、硬脂酸鎂和滑石粉粉末混合后，與整粒后的顆粒混勻，調節好壓力（9 N）及填充量后用單沖壓片機壓片。壓片得到的樣品片劑使用歐巴代包衣液包衣后進行包裝放置，即得中試樣品片劑3萬片。

2.4 中試樣品片劑質量檢查

硬度測定：取3 批中試樣品片劑各10 片，使用硬度儀測定中試樣品片劑和原研片的硬度值（長端）。結果3 批次中試樣品片劑硬度值與原研片接近，RSD均小于4.0%（n=10），符合檢查標準。詳見表1。

表1 中試樣品片劑硬度測定結果（n=10）Tab.1 Results of the hardness test of pilot sample tablets（n=10）

質量差異：取3 批中試樣品片劑各20 片，精密稱定總質量并計算平均片質量，再分別精密稱定各片的質量。比較每片質量與平均每片質量，超出質量差異限度的片劑不得多于2片，且不得有1片超出限度1倍。結果3 批中試樣品片劑質量差異小（RSD均小于2%），符合檢查標準。詳見表2。

表2 中試樣品片劑質量差異測定結果（n=20）Tab.2 Results of the determination of weight difference of pilot sample tablet（n=20）

脆碎度測定：按2015 年版《中國藥典》片劑脆碎度檢查法檢查。取3 批中試樣品片劑各10 片，稱定初始質量，吹去脫落粉末，精密稱定質量，置脆碎度檢查儀圓筒中，25 r/min轉動4 min；取出，同法除去粉末，精密稱定質量，計算減失的質量，觀察片劑本身有無斷裂、龜裂及粉碎。詳見表3。

表3 中試樣品片劑脆碎度檢查結果（n=10）Tab.3 Results of the fragility assay of pilot sample tablets（n=10）

含量測定：取3批中試樣品片劑各10片，精密稱定，研成細粉，分別稱取約72 mg，置50 mL 容量瓶中，加入40 mL流動相，超聲（功率200 W，頻率40 kHz，下同）處理20 min后，放至室溫，用流動相定容，搖勻，經0.45 μm濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取1 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，作為自身對照溶液。取LEV 對照品和左乙拉西坦酸對照品適量，分別制成質量濃度為1 mg/ mL 的LEV 對照品溶液及質量濃度為0.78 μg/ mL 的左乙拉西坦酸對照品溶液，各取適量，進樣測定，計算樣品片劑中LEV 及左乙拉西坦酸的含量［13］。結果樣品片劑中LEV 含量為98%～102%，左乙拉西坦酸含量小于0.3%，供試品溶液和自身對照溶液中未檢測到雜峰。詳見表4。

表4 中試樣品片劑中左乙拉西坦及左乙拉西坦酸含量測定結果Tab.4 Results of content determination of levetiracetam and levetiracetamic acid of pilot sample tablets

溶出均一性考察：參照國家藥品監督管理局藥品審評中心局《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》，量取經脫氣處理的溶出介質（pH 6.0 PBS）900 mL，置溶出杯，在溶劑溫度（37 ± 0.5）℃，轉速100 r/ min條件下，取同一批中試樣品片劑6 片，分別投入6 個轉籃，至1，2，4，6，8，12 h 時吸取溶出液1 mL（立即補加等溫等量溶出介質）、經0.45 μm 濾膜濾過，取續濾液，進樣測定，計算溶出液中LEV 濃度并計算該批制劑不同時間累計溶出度，結果的RSD均小于3%（n=6），詳見表5。表明其批內均一性良好。

表5 中試樣品片劑累計溶出率（%）Tab.5 Cumulative dissolution percentage of pilot sample tablets（%）

穩定性考察：取中試樣品片劑適量，分別在高溫（40 ℃、60 ℃）、高濕［相對濕度（RH）為75%、92.5%］和強光照［（4 500±500）lx］條件下貯存5 d 和10 d 時各取10 片，研成細粉，分別取3 份72 mg 粉末，置50 mL 容量瓶中，加入40 mL 流動相超聲處理20 min，放至室溫，加流動相定容，搖勻，經0.45 μm濾膜濾過，取續濾液進樣測定。結果左乙拉西坦、左乙拉西坦酸含量均符合《美國藥典》和《歐洲藥典》標準（正常值分別為98%～102%，＜0.3%），表明樣品片劑在高溫、高濕、光照條件下穩定性良好。詳見表6。

表6 樣品片劑高溫、高濕、光照條件下放置后含量測定結果（%）Tab.6 Results of content determination of sample tablets after placing under high temperature，high humidity and light conditions（%）

3 討論

LEV 緩釋片是比利時UCB 公司開發的抗癲癇新藥，與傳統抗癲癇藥物相比，其藥效好、安全性高、耐受性好，臨床廣泛應用［14-15］，但其作用機制尚未明確。LEV 緩釋片可減少血藥濃度的峰谷現象，從而提高藥物的安全性；其次，LEV 緩釋片使血藥濃度在較長時間內維持在有效治療濃度范圍內，可降低給藥頻率，使用更方便。但該藥也存在一些不足，如生產工藝較普通制劑復雜，需特別謹慎對待藥物突然釋放導致的中毒，不能靈活調節給藥劑量和時間等［16］。

本研究結果顯示，中試樣品片劑質量差異及脆碎度檢查符合2015 年版《中國藥典（二部）》中有關規定，樣品片劑的硬度與原研片相近。不同溶出介質中12 h溶出曲線與原研片溶出曲線的相似度符合要求，兩者12 h 溶出度無明顯差異。還發現，中試樣品片劑中LEV含量、雜質含量及溶出度在加速和長期試驗放置后穩定性良好。本研究中確立了自制緩釋片劑處方及制備工藝和質量標準，對于國產LEV 緩釋片的早日問世具有一定意義。