血漿miR-124水平與冠心病的關系及其臨床意義

【摘要】 "目的 "探討血漿miR-124水平與冠心病（CHD）的關系，評估血漿miR-124用于CHD無創診斷的價值。方法 "收集醫院診斷的CHD患者共30例為CHD組及健康人員28例為對照組。應用實時熒光定量PCR方法，檢測兩組血漿中miR-124的表達水平；應用受試者工作特征曲線（ROC），分別分析血漿miR-124對于CHD的診斷價值，進一步分析其診斷效果。結果 "單因素分析顯示，CHD組血漿miR-124水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（Plt;0.05）；多因素Logistic回歸分析顯示，血漿miR-124水平降低發生冠心病的風險顯著升高（OR=110.245; 95%CI：1.019～375.963）。血漿miR-124診斷CHD的AUC=0.812（95%CI：0.686～0.938）；根據約登指數最大原則，篩選出血漿miR-124診斷CHD的臨界值為0.003156（2-?CT轉換后）。血漿miR-124診斷CHD靈敏度73.333%，特異度100.000%，Kappa值為0.726，診斷結果與實際結果具有較高的一致性，且無漏診。結論 "血漿miR-124的表達水平與CHD有關系，血漿miR-124水平降低發生冠心病的風險顯著升高，對CHD的診斷有一定價值。

【關鍵詞】 "miR-124；冠心病；實時熒光定量PCR；受試者工作特征曲線

中圖分類號 "R541.4 " "文獻標識碼 "A " "文章編號 "1671-0223（2023）04--04

目前，對冠心病（coronary heart disease，CHD）的診斷主要依賴于臨床醫生對患者臨床癥狀的判斷，進行心電圖檢查以及進一步的冠狀動脈造影術進行確診，在疾病早期仍缺乏無創性診斷的手段。microRNA是一類非編碼的小分子RNA，在動植物以及人類組織細胞中廣泛存在，在蛋白質形成過程中通過轉錄后翻譯抑制，參與細胞增生、分化，調控細胞的凋亡[1-2]。miR-124是miRNA家族的組成部分，根據目前的研究可知，miR-124在血管皮細胞、平滑肌細胞等細胞功能上發揮調節的作用[3-4]。CHD患者由于血管內皮細胞及平滑肌細胞功能障礙引發血管狹窄，但其血漿miR-124表達水平是否會發生變化尚未見報道。本實驗以經冠狀動脈造影確診的CHD患者為對象，探討血漿miR-124表達水平與CHD的關系及其臨床意義。

1 "對象與方法

1.1 "研究對象

選取2018年1月至2020年1月醫院經冠狀動脈造影檢查確診的CHD患者30例為CHD組（病例組），同期選擇醫院年齡、性別等與CHD組患者相匹配的健康人員28例為對照組。本研究由醫院倫理委員會批準通過，所有研究對象對研究內容知情，并均簽署了知情同意書。

（1）CHD納入標準：首先參照2011年《美國心臟學會以及不穩定型心絞痛/非ST段抬高心肌梗死指南》，CHD患者需要滿足以下特點之一方可診斷：①既往存在心絞痛的癥狀，但近1個月內，癥狀加重或發作頻繁；②心絞痛癥狀為近1個月之內新發生的；③靜息性心絞痛的發作：在休息或者安靜時發作的心絞痛；④患者近1個月內心絞痛癥狀發作的持續時間長，并且經含服硝酸酸甘油治療后效果差的。其次經冠狀動脈造影檢查后提示至少一支冠狀動脈血管其直徑狹窄程度≥50%。

（2）CHD排除標準：①患有先天性心臟病或心臟瓣膜受累的，臨床確診的嚴重的充血性心衰患者；②目前合并各臟器嚴重疾病及免疫類、腫瘤類疾病，其他循環系統疾病如嚴重的腦血管病、下肢動脈栓塞等；③近3個月出現各種損傷血管的疾病，近1個月出現各種急性炎癥感染等。

1.2 "資料收集

通過問卷及查閱病歷資料，收集研究對象的年齡、性別、現病史、既往史、吸煙史及體檢指標，包括體重、身高、BMI（體重kg/身高m2）、空腹血糖（FPG）、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。

1.3 "實驗室檢測方法

1.3.1 "標本采集 "早8點在行冠狀動脈造影之前，空腹狀態下進行靜脈采血，離心機分離血漿，收集血標本。

1.3.2 "冠狀動脈造影檢查術 "經評估，CHD患者具有冠狀動脈造影的手術指征，并且無臨床禁忌，由科室專業心血管介入醫生，對患者進行冠狀動脈造影檢查術，在病情需要時行冠狀動脈球囊擴張輸或支架植入術。

1.3.3 "血漿總RNA提取 "應用mirVana Paris Kit反應試劑盒進行試驗，根據試劑盒的說明書，按步驟分步提取血漿中的總RNA，實驗結束后將提取的標本放置于-80℃的冰箱內凍存保留。

1.3.4 "cDNA的合成 "本實驗應用實時熒光定量PCR技術采用Taqman探針法進行，第一步配置RT-PCR的反應體系：10×緩沖液0.8μl、RNA 4.5μl、dNTP 0.2μl、抑制劑為 0.1μl、無水的RNase 0.4μl、RNA引物1.5μl、RTase 0.5μl，總體系為8μl，經充分搖勻后離心機離心，全過程均需在冰板上進行操作。反應條件設置為：16℃60 分鐘、42℃ 60分鐘、85℃ 5分鐘、4℃下保持循環。

1.3.5 "qRT-PCR 配置 "輕輕吸取各種物質配置反應體系，其中2×TaqMAN universal PCR Master 混合物為10μl、無水RNase 5μl、TaqMAN 探針為1μl、cDNA為 4μl，其總反應量為20μl，充分震蕩搖勻后離心。反應條件設定：模板預變性為95℃經10 分鐘，中模板變性為95℃經15 秒、60℃經60 秒進行退火，共40次循環；試驗中的樣本均做一個副管，對于每個實驗要重復3次，記錄每一次實驗的CT值，經計算取平均值錄入，后期再次經2-?CT轉換，進行統計。

1.4 "數據分析方法

采用SPSS 17.0以及GraphPAD Prism 5.0 統計軟件對實驗數據進行統計分析及作圖。計數資料計算百分率，兩組間率的比較采用卡方檢驗；正態分布的計量資料使用“±s”表示，兩組間均數比較采用獨立樣本t檢驗；非正態分布的計量資料用“M（P25，P75）”來表示，兩組間中位數比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗。多因素分析采用Logistic回歸模型。雙側檢驗，Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 "結果

2.1 "兩組臨床特征比較

CHD組BMI水平、吸煙比例顯著高于對照組，差異有統計學意義（Plt;0.001），兩組性別、年齡、FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表1。

2.2 "兩組血漿miR-124表達水平比較

CHD組血漿miR-124表達水平明顯低于對照組，組間差異有統計學意義（Plt;0.05），見表2。

2.3 "血漿miR-124表達水平與冠心病關系的多因素分析

以是否冠心病為因變量（是=1，否=0），以血漿miR-124表達水平是否降低（是=1，否=0）及上述分析中具有統計學意義的因素為自變量，進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，血漿miR-124表達水平與冠心病仍然存在關系（Plt;0.05），血漿miR-124水平降低發生冠心病的風險顯著升高，見表3。

2.4 "血漿miR-124表達水平診斷CHD的價值評估

ROC曲線分析結果顯示，血漿miR-124表達水平診斷CHD曲線下面積為0.812（95%CI：0.686～0.938），說明血漿miR-124表達水平可用于CHD診斷。根據約登指數最大原則，篩選出血漿miR-124診斷CHD的臨界值為0.003156（2-?CT轉換后），見圖1。

2.5 "血漿miR-124用于CHD的診斷結果

以血漿miR-124表達水平（2-?CT轉換后）lt;0.003156為診斷CHD的標準，診斷結果見表4。結果顯示，血漿miR-124診斷CHD的靈敏度為73.33%，特異度為100.00%，Kappa值為0.726，表明診斷結果無誤診，且與實際結果具有中高度一致性，具有臨床應用價值，但有一定的漏診率。

3 "討論

miRNA是一類短的，保守、單鏈和非編碼RNA分子，它作為靶基因表達的負調節因子抑制mRNA翻譯或促進mRNA降解[5]。miRNA作為多種生理或病理過程中的重要調節因子正在逐漸被認識，包括血管生成。miR-124是miRNA的組成部分，目前的研究證實miR-124具有調節心血管發育及調節血管內皮細胞功能的作用[3-4]。

miR-124在心臟相關血管新生中發揮一定的作用，有研究表明其通過抑制CD151的作用發揮促進的心臟血管生成，加重患者的心力衰竭[6]。miR-124據報道可以顯著抑制血管生成以及MCF7細胞中的腫瘤生長[7]。此外，miR-124在膠質瘤標本中能夠下調和抑制膠質瘤中的血管生成[8]。此外，miR124的水平與多種心血管疾病相關，在急性冠狀動脈綜合征相關動脈閉塞的患者中miR-124表達顯著增加，觀察到這種水平可能是緊急冠狀動脈血運重建的指標[9]。吸煙者動脈粥樣硬化以及晚期動脈粥樣硬化疾病患者miR-124水平越高[10]，在某些特定的試驗中還能夠觀察到循環miR-124表達顯著變化，被確定為心臟驟停的預后指標[11]。然而，miR-124在CHD患者血漿中的表達水平目前尚未見報道。該研究顯示與對照組相比，CHD組血漿miR-124表達水平顯著降低，通過ROC曲線發現其對CHD的診斷具有一定準確性。根據約登指數最大原則，篩選出血漿miR-124診斷CHD的臨界值為0.003156（2-?CT轉換后），miR-124降低發生冠心病的風險顯著升高，血漿miR-124診斷CHD靈敏度73.333%，特異度100.000%，Kappa值為0.726，說明其診斷CHD與臨床診斷高度一致，但有一定漏診率。

綜上所述，血漿miR-124的表達水平與CHD有關系，血漿miR-124水平降低發生冠心病的風險顯著升高，并且對CHD的診斷有一定價值。

4 "參考文獻

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[2022-12-26收稿]