紅細胞貧血指標和血紅蛋白電泳聯合地中海貧血基因檢測在α-地中海貧血診斷中的臨床價值

盧新兆 黃曉華 鄭小鳳 李新才 黃浩南

[關鍵詞]紅細胞貧血；地中海貧血；血紅蛋白電泳；基因診斷

地中海貧血是人體血液中珠蛋白基因發生突變或者缺失引起珠蛋白生成障礙的單基因遺傳性疾病。患者紅細胞中血紅蛋白的組分和含量發生改變，導致不同程度的溶血貧血，影響紅細胞的攜氧能力，因此地中海貧血患者容易發生感染、發熱、免疫功能低下并會引起黃疸、肝脾腫大、小兒發育不良、心臟肺功能不全[1]。本研究通過全自動血液分析儀和毛細管電泳儀及PCR檢測儀器對患者進行地中海貧血篩查，紅細胞貧血指標先進行初篩，血紅蛋白電泳檢測提高效率，地中海貧血基因檢測提高準確率，聯合檢測才能進一步明確診斷。通過紅細胞貧血指標和血紅蛋白電泳聯合地中海貧血基因檢測，提高患者地中海貧血的診斷水平，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2021年6月福建醫科大學附屬龍巖市第一醫院門診及住院治療的診斷為α-地中海貧血患者51例為α-地中海貧血組，其中男15例，女36例。納入標準[2]：根據中華醫學會臨床血液學分會關于地中海貧血診斷標準進行確診的患者。排除標準：①骨髓造血功能引起的貧血；②缺鐵性貧血；③惡性腫瘤性貧血；④其他原因貧血。對照組為本院體檢健康人群50例，其中男24例，女26例。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。本研究已經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 紅細胞貧血指標檢測

患者空腹抽靜脈抗凝血2ml，紅細胞血紅蛋白（Hb），紅細胞平均體積（MCV），紅細胞平均血紅蛋白量（MCH），紅細胞平均血紅蛋白濃度（MCHC），利用日本希森美康公司生產的全自動血液分析流水線及配套質控品試劑進行檢測。男性血紅蛋白<120g/L，女性血紅蛋白<110g/L判斷為貧血。

1.3 血紅蛋白電泳檢查

患者空腹抽靜脈抗凝血2ml，使用法國西比亞公司生產的全自動毛細管血紅蛋白電泳儀進行分析，所用的質控品和試劑為公司配套生產，嚴格按照儀器操作規程及試劑說明書進行，儀器全自動完成血紅蛋白電泳結果的分析處理，最后得出血紅蛋白的各種電泳區帶。男女HbA2正常參考值為2.2～3.3，HbA2<2.2判斷為α-地中海貧血表型陽性。

1.4 地中海貧血基因檢測

空腹采取患者抗凝血液標本，試劑為深圳亞寧生物公司生產的α-地中海貧血點突變基因和缺失型基因檢測試劑盒。應用聚合酶鏈反應反向斑點雜交與聚合酶鏈反應進行地中海貧血基因檢測，分別檢測常見的α-地中海貧血三種缺失型（α-SEA，α-3.7，α-4.2）和三種非缺失型突變基因（α-WS，α-QS，α-CS）。嚴格按照操作規程進行，首先提取全血DNA，利用PCR儀進行擴增，再用導流雜交技術顯色，最后結果判斷與分析。

1.5 統計學方法

應用SPSS20.0統計學軟件進行數據處理，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數資料用[n（%）]表示，P<0.05為差異有統計學意義。根據紅細胞貧血各指標及血紅蛋白電泳HbA2等結果繪制ROC曲線，通過AUC值判斷對地中海貧血診斷效能。

2 結果

2.1 地中海貧血患者貧血情況

51例地中海貧血患者有46例貧血，貧血總發生率為90.20%，其中15例男性患者中14例都有貧血，貧血發生率為93.33%。36例女性患者中32例都有貧血，貧血發生率為88.89%，紅細胞貧血指標值及各種貧血百分比見表1。在本研究結果中，α-地中海貧血組HbA2，Hb，MCV，MCH及MCHC均低于正常對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.2 α-地中海貧血患者血紅蛋白電泳分析

51例α-地中海貧血患者，有50例HbA2<2.2，表型陽性率為98.04%，大部分地中海貧血患者同時檢出HbH、HbBart’s、HbCS的一種或多種區帶[3]。其中男性15例，女性36例，血紅蛋白電泳結果見表3。33例α-地中海貧血患者進行地中海貧血基因檢測，31例檢出三種基因缺失型和三種基因突變型中的一種或混合型，以α-SEA型為主，2例未檢出常見基因型。見表4。

2.3 各指標ROC曲線分析

分析各貧血指標及血紅蛋白電泳對α-地中海貧血組的診斷價值，計算敏感度和特異度，以1-特異性為橫坐標，敏感度為縱坐標，繪制HbA2、Hb、MCV、MCH、MCHC等指標的ROC曲線，AUC分別為0.990、0.987、0.994、0.970、0.960，各指標AUC和對照組比較均顯著提高地中海貧血診斷的敏感度和特異度。見圖1。

3 討論

α-地中海貧血是因為16號常染色體α蛋白質肽鏈基因發生缺失或突變引起的貧血性疾病[4]。貧血是地中海貧血最主要的臨床體征，在本研究中，51例α-地中海貧血患者有46例出現貧血，貧血陽性率90.20%，其中以中度貧血為主，部分發生重度貧血，甚至出現極重度貧血，嚴重危及患者的生命。α-地中海貧血組Hb、MCV、MCH、MCHC均顯著低于對照組，差異有統計學意義。

紅細胞貧血指數是地中海貧血篩查最簡單實用的方法，缺鐵性貧血和輕型地中海貧血在臨床上都是小細胞低色素性貧血，因而單純貧血指標不能鑒別這兩種疾病，容易造成輕型地中海貧血的漏檢，因此敏感度和特異度不足，存在一定的假陽性和假陰性。全自動毛細管血紅蛋白電泳分析儀是地中海貧血篩查的重要方法，自動化程度高，操作簡單速度快，敏感度和特異度顯著提高。本研究發現51例α-地中海貧血患者有50例HbA<2.2，同時檢出α-地中海貧血可能出現的HbH、HbBart’s、HbCS等區帶，這些區帶可以出現其中一種或者多種，濃度也不同，與α-地中海貧血類型和病情嚴重程度相關。因此，紅細胞貧血指數和全自動毛細管電泳儀檢測血紅蛋白，可以提高地中海貧血的檢出率，減少地中海貧血的漏診[5]。

小部分α-地中海貧血靜止型及輕型在紅細胞貧血指標大部分是正常的，臨床上也沒有明顯癥狀，這是由于靜止型及輕型地中海貧血基因型多數是只有一種或者兩種α-珠蛋白缺失或者發生突變，可以通過紅細胞的代償功能增強，使得靜止型和輕型地中海貧血患者的紅細胞指標正常，血紅蛋白電泳也存在部分α-地中海貧血的漏檢，沒有嚴重的貧血及與貧血有關的并發癥[6]。因此為了減少α-地中海貧血靜止型及輕型的漏診率，根據臨床診斷需要進行增加地中海貧血基因檢測是必需的，因為地中海貧血基因檢測是地中海貧血診斷的金標準，雖然檢測方法比較復雜，費用較高，但是能夠防止紅細胞貧血指數及血紅蛋白電泳儀篩查地中海貧血的漏診，提高地中海貧血的檢出率[7]。本研究在33例α-地中海貧血患者進行常見的三種缺失型和三種突變型基因檢測中，31例檢出地中海貧血基因陽性，2例靜止型α-地中海貧血未檢測出地中海貧血基因。本地區α-地中海貧血最常見的基因型為東南亞缺失型α-SEA，其次是α-3.7缺失型和α-4.2缺失型，跟華南地區及福建泉州地區地中海貧血的基因型的研究報道比較接近[8-9]。α-地中海貧血基因突變型最常見的是α-CS突變，其次是α-QS突變這跟廣東地區的報道也相似[10-11]。

通過多項目ROC曲線分析，聯合檢測在地中海貧血的診斷符合率顯著升高，有效地減少輕型地中海貧血的誤診和漏診率，提高地中海貧血確診的準確度[12]。

紅細胞貧血指標和紅細胞血紅蛋白電泳檢測是篩查地中海貧血的重要方法，同時具有高度的敏感度和特異度，顯著提高地中海貧血患者的檢出率[13-14]。由于少數輕型地中海貧血患者及罕見型存在漏診，聯合地中海貧血基因檢測以及蛋白測序技術，可以大大提高地中海貧血的確診和檢出率[15-16]。地中海貧血是一種嚴重危害人類健康的遺傳性疾病，提早預防是關鍵，特別是做好婚前及孕產前診斷和羊水檢查，降低地中海貧血發生率具有重要的臨床指導意義。