煙草青枯病拮抗菌Streptomyces FQ-8分離篩選與抑菌活性物質研究

摘要：利用生防菌株及其代謝產物防治煙草青枯病是近年來的研究熱點。從福建省龍巖市發病煙草根際土壤分離到一株煙草青枯病菌XQ23及其拮抗菌株鏈霉菌FQ-8。分離提取該菌株所產抑菌活性物質，采用瓊脂擴散法研究抑菌活性物質與72%農用硫酸鏈霉素、25%多菌靈可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油、3%中生菌素可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑及1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑6種常見殺菌劑的抑菌特性，采用紫外及紅外掃描技術研究抑菌活性物質的結構特征。結果表明，拮抗菌抑菌活性物質室內毒力與3%中生菌素可濕性粉劑相近，低于72%農用硫酸鏈霉素和1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑，高于80%乙蒜素乳油。煙草青枯病菌對拮抗菌株鏈霉菌FQ-8抑菌活性物質的敏感性高于6種常見殺菌劑。紫外及紅外掃描結果顯示，鏈霉菌FQ-8所產抑菌活性物質可能是一種含有酰胺鍵（—CO—NH2）的糖肽類化合物。研究表明，拮抗菌FQ-8可能是一株新發現的煙草青枯病生防菌，所產生的活性物質有希望用于煙草青枯病的防治。

關鍵詞：煙草青枯病；拮抗菌活性物質；抑菌特性；分離篩選；室內毒力

中圖分類號：S482.2；S435.72 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）22-0125-07

由茄科勞爾氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的煙草青枯病是一種毀滅性土傳性病害［1］。該病菌喜高溫，寄主范圍廣泛，近年來呈增長趨勢，防治非常困難［2］。2015年青枯病發病面積為 8.7萬hm2左右，約造成5.5億元的經濟損失［3］。當前，化學藥劑防治依然是最有效、最簡單、最容易被煙農接受的防治措施之一［4］。但長期高頻、單一使用化學藥劑，容易導致病原菌產生抗藥性、農藥殘留及土壤微生物生態平衡失調，致使土壤抵抗病原菌的能力降低［5-6］。生物防治因其環境友好、不易形成抗性等優點為人們所重視［7］，特別是利用高效生防菌株及其代謝產物防治煙草青枯病成為研究的熱點［8-9］。目前，國內相關研究主要集中于對拮抗菌的分離篩選鑒定及其室內外抑菌效果，有關抑菌活性物質組分、性質及其作用機理的研究比較欠缺。趙倩等從煙草根際土壤中篩選枯草芽孢桿菌 CLB-17，該菌所產生的代謝物對煙草青枯病菌抑菌帶寬度為7.11 mm［10］。孫新城等篩選到的鏈霉菌所產生拮抗物質在100 ℃以下對煙草青枯病菌都具有較強的抑菌活性，耐熱性好，pH值為3.8～9.0時拮抗能力無明顯差異［11］。董昆明等分離篩選到1株細菌5B18，對煙草青枯病菌具有強烈拮抗活性，其提取物為13種不同化合物組成的混合物［12］。

本項目前期獲得1株對煙草青枯病菌有良好拮抗效果的鏈霉菌FQ-8菌株。該菌抑菌機理及其活性物質的研究有待開展。筆者所在課題組于2020年8—12月，在現代設施農業福建省高校工程研究中心微生物室，采用搖瓶發酵方式，發酵液經離心、過濾、萃取、濃縮，獲得抑菌活性物質粗提物；采用紫外掃描及紅外掃描分析其結構特征，推測抑菌活性物質的可能成分與結構；應用瓊脂擴散法比較鏈霉菌FQ-8菌株所產抑菌活性物質與6種常見的煙草青枯病菌殺菌劑的防治效果，以期為該菌的開發應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株 煙草青枯病菌XQ23菌株（Ralstonia solanacearum XQ23）的分離篩選參照文獻［13］。分菌株置于-80 ℃、25% 甘油中保存。煙草青枯病拮抗菌FQ-8菌株（Streptomyces FQ-8），分離自福建省龍巖市煙田發病煙草植株根際土壤，于福建技術師范學院微生物實驗室保存。

1.1.2 主要藥品 72%農用硫酸鏈霉素可溶性粉劑（華北制藥河北華諾有限公司）；25%多菌靈可濕性粉劑（四川國光農化股份有限公司）；80%乙蒜素乳油（河南科邦化工有限公司）；3%中生菌素可濕性粉劑（福建凱立生物制品有限公司）；75%百菌清可濕性粉劑（霍州市綠洲農藥有限公司）；1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑（西安近代農藥科技股份有限公司）。其他藥品均為國產分析純。

1.1.3 培養基 高氏1號培養基：20.0 g/L可溶性淀粉，0.5 g/L K2HPO4·3H2O，0.5 g/L MgSO4·7H2O，0.5 g/L NaCl，1.0 g/L KNO3，0.01 g/L FeSO4·7H2O，pH 值為7.4～7.6。

NA培養基：3.0 g/L牛肉膏粉，10.0 g/L蛋白胨，5.0 g/L氯化鈉，pH 值為7.1～7.5。

TTC培養基：3.0 g/L大豆胨，17.0 g/L胰蛋白胨，2.5 g/L氯化鈉，6.0 g/L葡萄糖，0.5 g/L硫乙醇酸鈉，0.25 g/L L-胱氨酸，0.1 g/L亞硫酸鈉，pH值為 7.1～7.3。

種子培養基：20.0 g/L可溶性淀粉，1.0 g/L KNO3，0.5 g/L NaCl，0.5 g/L K2HPO4，0.5 g/L MgSO4，0.01 g/L FeSO4·H2O。

基礎發酵培養基：30.0 g/L大豆粉，20.0 g/L可溶性淀粉，2.0 g/L CaCO3，2.0 g/L NaCl。

優化后基礎培養基：30.0 g/L氯化銨，20.0 g/L蔗糖，2.0 g/L CaCO3，2.0 g/L NaCl，pH 值為7.0。

1.1.4 主要儀器 LDZX-50KB手輪立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海申安醫療器械廠）；NRY-2102C恒溫培養振蕩器（上海南榮試驗室設備有限公司）；H1850R高速臺式冷凍離心機（上海湘儀室儀器開發有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；RE-100旋轉蒸發儀［維根技術（北京）有限公司］；FD-IE臺式冷凍干燥機（北京德天佑科技發展有限公司）；UV-1800PC-ds2紫外分光光度計（上海美普達儀器有限公司）；Nicolet80紅外光譜儀（美國尼高力儀器公司）。

1.2 煙草青枯病拮抗菌的分離培養

參照文獻［13］進行煙草青枯病拮抗菌的分離培養。

1.3 拮抗菌發酵培養及其活性檢測

1.3.1 拮抗菌種子液制備 取1環煙草青枯病拮抗菌FQ-8孢子，接種于100 mL種子培養基中，于28 ℃、200 r/min培養24 h。

1.3.2 拮抗菌抑菌活性檢測 采用瓊脂擴散法檢測拮抗菌抑菌活性［14］。接種后的基礎發酵培養基于28 ℃、180 r/min振蕩培養6 d，發酵液經離心去雜蒸發濃縮后用0.22 μ m微孔濾膜除菌。移取200 μL XQ23菌株菌懸液于NA培養基中，倒平板后用無菌打孔器打孔3個，在每孔中加發酵液 100 μL，28 ℃培養24 h。用十字交叉法測量抑菌圈直徑（mm），分別以72%農用硫酸鏈霉素和無菌培養基為對照，重復3次。

1.4 拮抗菌活性物質制備

參照吳興可等的方法［15］，以硅藻土為助濾劑，用布氏漏斗將其制成厚度約為0.5 cm的硅藻土濾層，發酵液離心后引流至濾層進行抽濾，抽濾液分別用0.45 μm和0.22 μm微孔濾膜抽濾除菌得到粗提物。粗提物用1 ∶[KG-*3]1乙酸乙酯等體積萃取，取有機相蒸發濃縮，獲得的粗提物經-80 ℃凍干備用。

1.5 拮抗菌活性物質對煙草青枯病菌的藥效

選取80%乙蒜素乳油、75%百菌清可濕性粉劑、72%農用硫酸鏈霉素可溶性粉劑、1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑、25%多菌靈可濕性粉劑及3%中生菌素可濕性粉劑等6種殺菌劑，按照推薦劑量配成適宜濃度，拮抗菌粗提物也稀釋成不同濃度梯度，備用。移取200 μL XQ23菌懸液與NA培養基混勻后倒平板。平板經打孔分別注入100 μL殺菌劑，28 ℃ 培養 24 h，通過測量抑菌圈直徑計算抑菌率（%）。以抑菌率（%）為縱坐標（y），藥劑濃度對數值為橫坐標（x），獲得各藥劑的毒力回歸方程，比較拮抗菌 FQ-8 所產抑菌活性物質與常見殺菌劑的藥效。

抑菌率=（（對照抑菌圈直徑-處理抑菌圈直徑）/對照抑菌圈直徑）×100%。

1.6 拮抗菌活性物質的結構表征

采用紫外和紅外光譜分析拮抗菌FQ-8所產抑菌活性物質結構特征。將適量拮抗菌活性物質粗提物溶解于甲醇溶液中，稀釋后移至石英比色皿內，置于UV-1800PC-ds2紫外分光光度計中，于190～800 nm范圍內進行掃描。將提取的樣品用溴化鉀壓片后，于Nicolet80紅外光譜儀采集紅外光譜，波數范圍為 400～4 000 cm-1。

1.7 數據處理與分析

采用OriginPro 8.0作圖，SPSS 22.0進行數據統計分析，利用LSD多重比較法分析各處理差異顯著性，顯著性水平設定為α=0.05。數據為平均值±標準差。

2 結果與分析

2.1 煙草青枯病菌及其拮抗菌培養特征

由圖1可知，TTC培養基上，煙草青枯病菌XQ23菌落特征為表面光滑濕潤，稍突起，不規則圓形，流動性強，菌落中央粉紅色，外圍乳白色菌帶。拮抗菌FQ-8在高氏1號培養基上表現為菌落呈輻射狀，表面干燥，難以挑取，氣生菌絲為白色，基內菌絲有淡黃色色素，孢子顏色為青色。培養3 d時菌落表面白色，培養5～6 d后菌落邊緣覆蓋一層青色的孢子，青色范圍隨著培養時間的延長而逐漸擴大，直至完全覆蓋菌落。個體形態上，拮抗菌 FQ-8 由基內菌絲、氣生菌絲和孢子絲組成。氣生菌絲在上層，下層為基內菌絲。氣生菌絲較細、較暗、直或曲折、少分支。基內菌絲或粗或細、無橫隔、色亮、較透明、分支雜亂。孢子絲粗短，末端有孢子脫落，孢子為短柱狀。

2.2 拮抗菌抑菌活性檢測

參照李璐寧等的瓊脂擴散法檢測拮抗菌FQ-8發酵液對煙草青枯病的抑菌活性［14］，結果（圖2）表明，拮抗菌FQ-8發酵液對煙草青枯病菌抑菌活性明顯，抑菌圈直徑為9.7 mm。

2.3 拮抗菌活性物質的分離提取

拮抗菌活性物質用乙酸乙酯1 ∶[KG-*3]1等體積萃取后為無色液體，經濃縮后為淡黃色溶液，上下出現分層。其中，上層為有抑菌活性的拮抗菌活性物質粗提物，下層為沒有抑菌活性的油狀液體（圖3-A）。

收集上層粗提物，經揮發、冷凍干燥后，拮抗菌活性物質呈深褐色，略帶黏性，不易研磨成粉末（圖3-B）。

2.4 常見殺菌劑對煙草青枯病菌的藥效

平板試驗結果（圖4、表1）表明，選用的6種殺菌劑對煙草青枯病菌XQ23呈現不同的藥效。抑菌效果最佳的是農用硫酸鏈霉素，乙蒜素與辛菌胺醋酸鹽次之，效果較差的是中生菌素。百菌清與多菌靈則沒有抑制作用。因此，后續試驗選取農用硫酸鏈霉素、乙蒜素、中生菌素和辛菌胺醋酸鹽，比較4種殺菌劑與拮抗菌活性物質對煙草青枯病菌XQ23的殺菌效果。

毒力回歸方程斜率能反映病菌對殺菌劑的敏感程度，斜率越大，藥劑隨濃度的增大其抑菌效果提高得越快［16］。由表2可知，農用硫酸鏈霉素、辛菌胺醋酸鹽、中生菌素、乙蒜素及拮抗菌活性物質的毒力回歸方程斜率分別為0.593 5、0.530 6、0.439 9、0.335 9、0.846 4，拮抗菌活性物質的斜率最大，其次是農用硫酸鏈霉素和辛菌胺醋酸鹽，而中生菌素和乙蒜素稍低。說明隨著藥劑濃度的提高，煙草青枯病菌對拮抗菌活性物質和農用硫酸鏈霉素的敏感性越高，即提高藥劑使用濃度可以達到更好的殺菌效果。

2.5 拮抗菌活性物質的結構表征

紫外掃描結果見圖5。拮抗菌抑菌活性物質在284 nm附近有吸收峰，表明拮抗菌活性物質結構上有一個簡單的或非共軛的生色團，含O，N 或 S，可能是 C[FY=，1]C、C[FY=，1]N、N[FY=，1]N、—NO2、—COOH、—CO—NH2，推測是多肽類物質。紅外光譜分析（圖6）表明，拮抗菌活性物質在3 353.67 cm-1吸收峰可能是N—H鍵的伸縮振動峰，2 943.48 cm-1和 2 826.09 cm-1 出現弱吸收的是C—H伸縮振動峰。這2組吸收峰是糖類的特征峰。1 663.35 cm-1強峰為羰基伸縮振動峰，1 445.34 cm-1吸收峰表示可能含有甲基和亞甲基，1 417.39 cm-1處吸收峰可能是C—N鍵的伸縮振動，1 026.09 cm-1處強吸收峰可能是C—O鍵的變角振動吸收，包括C—O—H和C—O—C鍵［17］。第4區750～600 cm-1區域有1個寬的中等強度譜帶，即668.32 cm-1，可能是由N—H鍵面外搖擺振動引起的。由于抑菌活性物質溶于甲醇，因此1 445.34 cm-1與1 026.09 cm-1處的吸收[CM（21]峰不能作為拮抗活性物質的特征吸收峰。綜上所述，可以推斷拮抗菌活性物質為含有酰胺鍵（—CO—NH2）的有機化合物，可能是一種糖肽類化合物，這與紫外掃描圖譜的結果相符。

3 討論與結論

生防菌株在植株根部的定殖能力往往決定了其生防效果，而從土壤中提取分離的拮抗菌可以讓生防菌更好的定殖［18］。本試驗前期從福建省龍巖上杭區下枋煙田土壤中分離篩選到1株對青枯病菌有明顯抑菌效果的拮抗菌FQ-8，進行發酵培養，發酵液去雜后，經 1 ∶[KG-*3]1乙酸乙酯萃取，蒸發濃縮收集拮抗菌活性物質，檢測其抑菌特性并分析其結構特征。

試驗參照吳興可等的方法［15］，對發酵液過濾進行了改進，將助濾劑硅藻土制成濾層，顯著提高了過濾效率，節約了微孔濾膜等耗材，且發酵液粗提物的抑菌效果沒有改變。分離、提取濃縮后的拮抗菌粗提物呈淡黃色溶液，冷凍干燥后為深褐色黏性固體，不易磨成粉末。室內毒力試驗結果表明，在推薦濃度下，25%多菌靈可濕性粉劑和75%百菌清可濕性粉劑對煙草青枯病菌沒有抑制作用，而72%農用硫酸鏈霉素可溶性粉劑、1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑、3%中生菌素可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油以及拮抗菌活性物質粗提物對煙草青枯病菌均有顯著的抑制作用。通過對比EC50發現，拮抗菌活性物質的抑菌效果與3%中生菌素可濕性粉劑相近，弱于72%農用鏈霉菌素而高于80%乙蒜素乳油。毒力回歸方程（表2）顯示，拮抗菌活性物質斜率最大，表明煙草青枯菌對該活性物質敏感性最強，抑菌效果提高快。本試驗結果與林天然等的研究結果［19-20］基本一致，說明拮抗菌 FQ-8 所產抑菌活性物質具有成為防控煙草青枯病藥劑的開發潛力。

目前，已分離鑒定的煙草青枯病拮抗菌有100多株［21］，主要包括芽孢桿菌［10，22-24］、假單胞菌［25-26］、放線菌［7，11，13，27］及菌根真菌［28］等，從拮抗菌發酵液中提取的抑菌活性物質種類繁多。Xue等用超聲波破碎鏈霉菌Streptomyces alboflavus TD-1 菌絲，經甲醇提取的拮抗物質對煙草青枯病菌的最小抑菌濃度為3.125 mg/mL，該物質通過影響病原菌細胞膜通透性，破壞細胞壁結構完整及干擾核酸、蛋白質的合成等途徑起到生物防治的效果，但其化學性質與結構特征未知［7］。羅文建等從健康土壤中分離到1株鏈霉菌LC-7，所產抑菌活性物質為一種新的氨基糖苷類抗生素，分子量為 365.1［29］。吳翔等從高粱根際土中篩選出株銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）MT-002-B-7，其拮抗物質經紅外光譜和GC-MS分析，初步認為主要成分是N-乙酰-3-甲基-1，4-二氮雜雙環［4.3.0］-壬烷-2，5-二酮、脂肪酸和酚嗪［30］。陳倩倩從煙草根際土壤分離到放線菌SA74，并得到其抗菌活性成分粗蛋白［31］。段燕平等從云南和貴州煙草青枯病重病區的健康煙草根際土壤篩選到1株枯草芽孢桿菌SH7，其抑菌活性物質為蛋白多肽類物質［32］。本項目拮抗菌FQ-8抑菌活性物質在284 nm附近有吸收峰，表明該活性物質結構上含有C[FY=，1]C、C[FY=，1]N、N[FY=，1]N、—NO2、—COOH及—CO—NH2等基團，有可能是多肽類物質。紅外光譜分析（圖6）表明，拮抗菌活性物質在3 353.67、2 982.61、2 943.48、2 826.09、1 663.35、1 445.34、1 417.39、1 026.09、891.93、668.32 cm-1有吸收峰，推測該活性物質為含有酰胺鍵（—CO—NH2）的有機化合物，印證了紫外圖譜的結果。綜合來看，拮抗菌FQ-8所產活性物質可能是一種糖肽類化合物。有關活性肽對植物病害的控制報道更多的源自一些芽孢桿菌，而源自放線菌的少見報道［33］。進一步試驗（另文發表）表明，該化合物冷凍干燥后不溶于水，但可以溶解于甲醇中。其抑菌活性受低溫抑制，但能耐受125 ℃的高溫。其確切成分、結構特性、抑菌機理及田間的防治效果有待深入研究。

綜上，本研究從福建龍巖煙田發病煙草根際土壤分離到一株煙草青枯病拮抗菌株鏈霉菌FQ-8。室內毒力試驗表明，拮抗菌FQ-8活性物質對煙草青枯病毒力與3%中生菌素可濕性粉劑相近，低于72%農用硫酸鏈霉素可溶性粉劑和1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑，高于80%乙蒜素乳油，煙草青枯病菌對拮抗菌FQ-8活性物質的敏感性高于供試的6種殺菌劑。拮抗菌FQ-8所產抑菌活性物質可能是一種含有酰胺鍵（—CO—NH2）的糖肽類化合物，其結構特性有待深入研究。

參考文獻：

［1］Li X，Liu Y，Cai L，et al. Factors affecting the virulence of Ralstonia solanacearum and its colonization on tobacco roots［J］. Plant Pathology，2017，66（8）：1345-1356.

［2］李 想，劉艷霞，蔡劉體，等. 煙草青枯病菌在煙草根際的定殖及最適發病條件［J］. 植物保護學報，2016，43（5）：796-804.

［3］Liu Y，Wu D S，Liu Q P，et al. The sequevar distribution of Ralstonia solanacearum in tobacco-growing zones of China is structured by elevation［J］. European Journal of Plant Pathology，2017，147（3）：541-551.

［4］王 垚，黃純楊，楊 亮，等. 煙草青枯病復配增效藥劑篩選及田間防效［J］. 農藥，2022，61（10）：776-780.

［5］郭艾云，鮑艷宇，周啟星. 土壤農藥污染與細菌農藥-抗生素交叉抗性研究進展［J］. 微生物學通報，2020，47（9）：2984-2995.

［6］易有金，劉如石，尹華群，等. 煙草青枯病拮抗內生細菌的分離、鑒定及其田間防效［J］.應用生態學報，2007（3）：554-558.

［7］Xue Y B，Yang M G，Li S H，et al. The antibiotic activity and mechanisms of active metabolites （Streptomyces alboflavus TD-1） against Ralstonia solanacearum［J］. Biotechnology Letters，2019，41（10）：1213-1222.

［8］何洪令，李鈉鉀，孫成成，等. 煙草青枯病的生物防治研究進展［J］. 植物醫生，2021，34（2）：4-8.

［9］濮永瑜，包玲鳳，何 翔，等. 煙草青枯病和黑脛病拮抗細菌的篩選、鑒定及防效研究［J］. 中國農學通報，2022，38（7）：116-123.

［10］趙 倩，李軍民，雷 庭，等. 嗜酸性PGPR菌株CLB-17的篩選、鑒定及其對煙草青枯病菌的生防活性［J］. 植物保護學報，2022，49（2）：528-538.

［11］孫新城，司艷紅，張 莉，等. 抗煙草青枯病拮抗菌的篩選及抑菌活性研究［J］. 安徽農業科學，2008，36（14）：5917-5918，5929.

［12］董昆明，陳 亮，周曉見，等. 1株抑煙草青枯病生防菌的篩選、鑒定及其活性物質研究［J］. 安徽農業科學，2011，39（31）：19172-19175.

［13］湯鳴強，林天然，李小芳，等. 煙草青枯病拮抗菌的分離篩選與抑菌活性物質研究［J］. 湖北農業科學，2021，60（18）：92-96.

［14］李璐寧，張 薇，趙永強，等. 放線菌Y23菌株發酵液抗菌活性及穩定性測定［J］. 山東農業科學，2009，41（1）：71-74.

［15］吳興可，祁 荃，卞婷婷，等. 珍貴橙色束絲放線菌發酵產安絲菌素P-3的分離純化工藝優化［J］. 化工進展，2020，39（3）：1122-1128.

［16］趙志祥，嚴婉榮，陳 圓，等. 幾種殺菌劑對生姜青枯病菌的毒力測定［J］. 貴州農業科學，2015，43（9）：76-78，81.

［17］Cai Y Q，Chen P，Wu C Y，et al. Sulfated modification and biological activities of polysaccharides derived from Zizyphus jujuba cv. Jinchangzao［J］. International Journal of Biological Macromolecules，2018，120：1149-1155.

［18］張潔梅，張仁軍，姚正平，等. 煙草青枯病生防菌的篩選及其田間防效評價［J］. 中國農學通報，2020，36（28）：131-136.

［19］林天然，盧藝惠，曾文龍，等. 常見殺菌劑對煙草青枯病菌的毒力效應［J］. 農學學報，2020，10（8）：33-37.

［20］黃保宏，高正良，周本國，等. 四種殺菌劑對煙草青枯病菌的毒力比較［J］. 中國煙草學報，2015，21（1）：72-75.

［21］Hu Y，Li Y Y，Yang X Q，et al. Effects of integrated biocontrol on bacterial wilt and rhizosphere bacterial community of tobacco［J］. Scientific Reports，2021，11：2653.

［22］陸錚錚，蔣選利. 煙草青枯病菌土壤拮抗細菌的篩選及鑒定［J］. 江蘇農業科學，2014，42（6）：99-102.

［23］黎妍妍，李春黎，王 林，等. 生防菌使用方式對煙草青枯病的防效及根際土壤細菌群落的影響［J］. 中國煙草學報，2020，26（4）：101-107.

［24］Hu Y，Zhao W，Li X H，et al. Integrated biocontrol of tobacco bacterial wilt by antagonistic bacteria and marigold［J］. Scientific Reports，2021，11：16360.

［25］施河麗，譚 軍，譚紹安，等. 熒光假單胞菌緩解植煙土壤酸化效果及對煙草青枯病的防治作用［J］. 煙草科技，2023，56（2）：19-25.

［26］舒翠華，彭可為，戴林建，等. 煙草青枯病菌內生拮抗菌株HN3的鑒定與高產抗菌物質的培養基優化［J］. 中國農學通報，2013，29（10）：108-113.

［27］Liu Y X，Shi J X，Feng Y G，et al. Tobacco bacterial wilt can be biologically controlled by the application of antagonistic strains in combination with organic fertilizer［J］. Biology and Fertility of Soils，2013，49（4）：447-464.[HJ2mm]

［28］劉先良，習向銀，申 鴻，等. 接種叢枝菌根真菌對煙草青枯病抗性的影響［J］. 煙草科技，2014，47（5）：94-98.

［29］羅文建，劉雨虹，施河麗，等. 青枯雷爾氏菌拮抗放線菌的篩選及其抗菌活性物質的分離［J］. 中國煙草科學，2017，38（2）：69-74.

［30］吳 翔，謝麗源，甘炳成，等. 一株煙草青枯拮抗細菌中活性物質穩定性和粗提物成分分析［J］. 西南農業學報，2019，32（7）：1549-1554.

［31］陳倩倩. 煙草根際土壤拮抗放線菌SA74菌株活性代謝產物的研究［D］. 洛陽：河南科技大學，2019.

［32］段燕平，楊金廣，楊繼洪，等. 抗煙草青枯病菌的枯草芽孢桿菌SH7的篩選與鑒定［J］. 吉林農業大學學報，2012，34（1）：52-57.

［33］Baysal ，Lai D，Xu H H，et al. A proteomic approach provides new insights into the control of soil-borne plant pathogens by Bacillus species［J］. PLoS One，2013，8（1）：e53182.

收稿日期：2023-03-22

基金項目：中國煙草總公司福建省公司科技項目（編號：20173500024112）。

作者簡介：湯鳴強（1966—），男，福建霞浦人，博士，教授，從事微生物技術研究。E-mail：mqt-1022@163.com。