煙草青枯病拮抗菌Streptomyces FQ-8分離篩選與抑菌活性物質(zhì)研究

摘要：利用生防菌株及其代謝產(chǎn)物防治煙草青枯病是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。從福建省龍巖市發(fā)病煙草根際土壤分離到一株煙草青枯病菌XQ23及其拮抗菌株鏈霉菌FQ-8。分離提取該菌株所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)，采用瓊脂擴(kuò)散法研究抑菌活性物質(zhì)與72%農(nóng)用硫酸鏈霉素、25%多菌靈可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油、3%中生菌素可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑及1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑6種常見(jiàn)殺菌劑的抑菌特性，采用紫外及紅外掃描技術(shù)研究抑菌活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明，拮抗菌抑菌活性物質(zhì)室內(nèi)毒力與3%中生菌素可濕性粉劑相近，低于72%農(nóng)用硫酸鏈霉素和1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑，高于80%乙蒜素乳油。煙草青枯病菌對(duì)拮抗菌株鏈霉菌FQ-8抑菌活性物質(zhì)的敏感性高于6種常見(jiàn)殺菌劑。紫外及紅外掃描結(jié)果顯示，鏈霉菌FQ-8所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)可能是一種含有酰胺鍵（—CO—NH2）的糖肽類(lèi)化合物。研究表明，拮抗菌FQ-8可能是一株新發(fā)現(xiàn)的煙草青枯病生防菌，所產(chǎn)生的活性物質(zhì)有希望用于煙草青枯病的防治。

關(guān)鍵詞：煙草青枯??；拮抗菌活性物質(zhì)；抑菌特性；分離篩選；室內(nèi)毒力

中圖分類(lèi)號(hào)：S482.2；S435.72 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2023）22-0125-07

由茄科勞爾氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的煙草青枯病是一種毀滅性土傳性病害［1］。該病菌喜高溫，寄主范圍廣泛，近年來(lái)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，防治非常困難［2］。2015年青枯病發(fā)病面積為 8.7萬(wàn)hm2左右，約造成5.5億元的經(jīng)濟(jì)損失［3］。當(dāng)前，化學(xué)藥劑防治依然是最有效、最簡(jiǎn)單、最容易被煙農(nóng)接受的防治措施之一［4］。但長(zhǎng)期高頻、單一使用化學(xué)藥劑，容易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性、農(nóng)藥殘留及土壤微生物生態(tài)平衡失調(diào)，致使土壤抵抗病原菌的能力降低［5-6］。生物防治因其環(huán)境友好、不易形成抗性等優(yōu)點(diǎn)為人們所重視［7］，特別是利用高效生防菌株及其代謝產(chǎn)物防治煙草青枯病成為研究的熱點(diǎn)［8-9］。目前，國(guó)內(nèi)相關(guān)研究主要集中于對(duì)拮抗菌的分離篩選鑒定及其室內(nèi)外抑菌效果，有關(guān)抑菌活性物質(zhì)組分、性質(zhì)及其作用機(jī)理的研究比較欠缺。趙倩等從煙草根際土壤中篩選枯草芽孢桿菌 CLB-17，該菌所產(chǎn)生的代謝物對(duì)煙草青枯病菌抑菌帶寬度為7.11 mm［10］。孫新城等篩選到的鏈霉菌所產(chǎn)生拮抗物質(zhì)在100 ℃以下對(duì)煙草青枯病菌都具有較強(qiáng)的抑菌活性，耐熱性好，pH值為3.8～9.0時(shí)拮抗能力無(wú)明顯差異［11］。董昆明等分離篩選到1株細(xì)菌5B18，對(duì)煙草青枯病菌具有強(qiáng)烈拮抗活性，其提取物為13種不同化合物組成的混合物［12］。

本項(xiàng)目前期獲得1株對(duì)煙草青枯病菌有良好拮抗效果的鏈霉菌FQ-8菌株。該菌抑菌機(jī)理及其活性物質(zhì)的研究有待開(kāi)展。筆者所在課題組于2020年8—12月，在現(xiàn)代設(shè)施農(nóng)業(yè)福建省高校工程研究中心微生物室，采用搖瓶發(fā)酵方式，發(fā)酵液經(jīng)離心、過(guò)濾、萃取、濃縮，獲得抑菌活性物質(zhì)粗提物；采用紫外掃描及紅外掃描分析其結(jié)構(gòu)特征，推測(cè)抑菌活性物質(zhì)的可能成分與結(jié)構(gòu)；應(yīng)用瓊脂擴(kuò)散法比較鏈霉菌FQ-8菌株所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)與6種常見(jiàn)的煙草青枯病菌殺菌劑的防治效果，以期為該菌的開(kāi)發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株 煙草青枯病菌XQ23菌株（Ralstonia solanacearum XQ23）的分離篩選參照文獻(xiàn)［13］。分菌株置于-80 ℃、25% 甘油中保存。煙草青枯病拮抗菌FQ-8菌株（Streptomyces FQ-8），分離自福建省龍巖市煙田發(fā)病煙草植株根際土壤，于福建技術(shù)師范學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 主要藥品 72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶性粉劑（華北制藥河北華諾有限公司）；25%多菌靈可濕性粉劑（四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司）；80%乙蒜素乳油（河南科邦化工有限公司）；3%中生菌素可濕性粉劑（福建凱立生物制品有限公司）；75%百菌清可濕性粉劑（霍州市綠洲農(nóng)藥有限公司）；1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑（西安近代農(nóng)藥科技股份有限公司）。其他藥品均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基 高氏1號(hào)培養(yǎng)基：20.0 g/L可溶性淀粉，0.5 g/L K2HPO4·3H2O，0.5 g/L MgSO4·7H2O，0.5 g/L NaCl，1.0 g/L KNO3，0.01 g/L FeSO4·7H2O，pH 值為7.4～7.6。

NA培養(yǎng)基：3.0 g/L牛肉膏粉，10.0 g/L蛋白胨，5.0 g/L氯化鈉，pH 值為7.1～7.5。

TTC培養(yǎng)基：3.0 g/L大豆胨，17.0 g/L胰蛋白胨，2.5 g/L氯化鈉，6.0 g/L葡萄糖，0.5 g/L硫乙醇酸鈉，0.25 g/L L-胱氨酸，0.1 g/L亞硫酸鈉，pH值為 7.1～7.3。

種子培養(yǎng)基：20.0 g/L可溶性淀粉，1.0 g/L KNO3，0.5 g/L NaCl，0.5 g/L K2HPO4，0.5 g/L MgSO4，0.01 g/L FeSO4·H2O。

基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：30.0 g/L大豆粉，20.0 g/L可溶性淀粉，2.0 g/L CaCO3，2.0 g/L NaCl。

優(yōu)化后基礎(chǔ)培養(yǎng)基：30.0 g/L氯化銨，20.0 g/L蔗糖，2.0 g/L CaCO3，2.0 g/L NaCl，pH 值為7.0。

1.1.4 主要儀器 LDZX-50KB手輪立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）；NRY-2102C恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海南榮試驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；H1850R高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（上海湘儀室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；RE-100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀［維根技術(shù)（北京）有限公司］；FD-IE臺(tái)式冷凍干燥機(jī)（北京德天佑科技發(fā)展有限公司）；UV-1800PC-ds2紫外分光光度計(jì)（上海美普達(dá)儀器有限公司）；Nicolet80紅外光譜儀（美國(guó)尼高力儀器公司）。

1.2 煙草青枯病拮抗菌的分離培養(yǎng)

參照文獻(xiàn)［13］進(jìn)行煙草青枯病拮抗菌的分離培養(yǎng)。

1.3 拮抗菌發(fā)酵培養(yǎng)及其活性檢測(cè)

1.3.1 拮抗菌種子液制備 取1環(huán)煙草青枯病拮抗菌FQ-8孢子，接種于100 mL種子培養(yǎng)基中，于28 ℃、200 r/min培養(yǎng)24 h。

1.3.2 拮抗菌抑菌活性檢測(cè) 采用瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)拮抗菌抑菌活性［14］。接種后的基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基于28 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)6 d，發(fā)酵液經(jīng)離心去雜蒸發(fā)濃縮后用0.22 μ m微孔濾膜除菌。移取200 μL XQ23菌株菌懸液于NA培養(yǎng)基中，倒平板后用無(wú)菌打孔器打孔3個(gè)，在每孔中加發(fā)酵液 100 μL，28 ℃培養(yǎng)24 h。用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑（mm），分別以72%農(nóng)用硫酸鏈霉素和無(wú)菌培養(yǎng)基為對(duì)照，重復(fù)3次。

1.4 拮抗菌活性物質(zhì)制備

參照吳興可等的方法［15］，以硅藻土為助濾劑，用布氏漏斗將其制成厚度約為0.5 cm的硅藻土濾層，發(fā)酵液離心后引流至濾層進(jìn)行抽濾，抽濾液分別用0.45 μm和0.22 μm微孔濾膜抽濾除菌得到粗提物。粗提物用1 ∶[KG-*3]1乙酸乙酯等體積萃取，取有機(jī)相蒸發(fā)濃縮，獲得的粗提物經(jīng)-80 ℃凍干備用。

1.5 拮抗菌活性物質(zhì)對(duì)煙草青枯病菌的藥效

選取80%乙蒜素乳油、75%百菌清可濕性粉劑、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶性粉劑、1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑、25%多菌靈可濕性粉劑及3%中生菌素可濕性粉劑等6種殺菌劑，按照推薦劑量配成適宜濃度，拮抗菌粗提物也稀釋成不同濃度梯度，備用。移取200 μL XQ23菌懸液與NA培養(yǎng)基混勻后倒平板。平板經(jīng)打孔分別注入100 μL殺菌劑，28 ℃ 培養(yǎng) 24 h，通過(guò)測(cè)量抑菌圈直徑計(jì)算抑菌率（%）。以抑菌率（%）為縱坐標(biāo)（y），藥劑濃度對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（x），獲得各藥劑的毒力回歸方程，比較拮抗菌 FQ-8 所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)與常見(jiàn)殺菌劑的藥效。

抑菌率=（（對(duì)照抑菌圈直徑-處理抑菌圈直徑）/對(duì)照抑菌圈直徑）×100%。

1.6 拮抗菌活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)表征

采用紫外和紅外光譜分析拮抗菌FQ-8所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)特征。將適量拮抗菌活性物質(zhì)粗提物溶解于甲醇溶液中，稀釋后移至石英比色皿內(nèi)，置于UV-1800PC-ds2紫外分光光度計(jì)中，于190～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。將提取的樣品用溴化鉀壓片后，于Nicolet80紅外光譜儀采集紅外光譜，波數(shù)范圍為 400～4 000 cm-1。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

采用OriginPro 8.0作圖，SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，利用LSD多重比較法分析各處理差異顯著性，顯著性水平設(shè)定為α=0.05。數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草青枯病菌及其拮抗菌培養(yǎng)特征

由圖1可知，TTC培養(yǎng)基上，煙草青枯病菌XQ23菌落特征為表面光滑濕潤(rùn)，稍突起，不規(guī)則圓形，流動(dòng)性強(qiáng)，菌落中央粉紅色，外圍乳白色菌帶。拮抗菌FQ-8在高氏1號(hào)培養(yǎng)基上表現(xiàn)為菌落呈輻射狀，表面干燥，難以挑取，氣生菌絲為白色，基內(nèi)菌絲有淡黃色色素，孢子顏色為青色。培養(yǎng)3 d時(shí)菌落表面白色，培養(yǎng)5～6 d后菌落邊緣覆蓋一層青色的孢子，青色范圍隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸擴(kuò)大，直至完全覆蓋菌落。個(gè)體形態(tài)上，拮抗菌 FQ-8 由基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲組成。氣生菌絲在上層，下層為基內(nèi)菌絲。氣生菌絲較細(xì)、較暗、直或曲折、少分支?；鶅?nèi)菌絲或粗或細(xì)、無(wú)橫隔、色亮、較透明、分支雜亂。孢子絲粗短，末端有孢子脫落，孢子為短柱狀。

2.2 拮抗菌抑菌活性檢測(cè)

參照李璐寧等的瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)拮抗菌FQ-8發(fā)酵液對(duì)煙草青枯病的抑菌活性［14］，結(jié)果（圖2）表明，拮抗菌FQ-8發(fā)酵液對(duì)煙草青枯病菌抑菌活性明顯，抑菌圈直徑為9.7 mm。

2.3 拮抗菌活性物質(zhì)的分離提取

拮抗菌活性物質(zhì)用乙酸乙酯1 ∶[KG-*3]1等體積萃取后為無(wú)色液體，經(jīng)濃縮后為淡黃色溶液，上下出現(xiàn)分層。其中，上層為有抑菌活性的拮抗菌活性物質(zhì)粗提物，下層為沒(méi)有抑菌活性的油狀液體（圖3-A）。

收集上層粗提物，經(jīng)揮發(fā)、冷凍干燥后，拮抗菌活性物質(zhì)呈深褐色，略帶黏性，不易研磨成粉末（圖3-B）。

2.4 常見(jiàn)殺菌劑對(duì)煙草青枯病菌的藥效

平板試驗(yàn)結(jié)果（圖4、表1）表明，選用的6種殺菌劑對(duì)煙草青枯病菌XQ23呈現(xiàn)不同的藥效。抑菌效果最佳的是農(nóng)用硫酸鏈霉素，乙蒜素與辛菌胺醋酸鹽次之，效果較差的是中生菌素。百菌清與多菌靈則沒(méi)有抑制作用。因此，后續(xù)試驗(yàn)選取農(nóng)用硫酸鏈霉素、乙蒜素、中生菌素和辛菌胺醋酸鹽，比較4種殺菌劑與拮抗菌活性物質(zhì)對(duì)煙草青枯病菌XQ23的殺菌效果。

毒力回歸方程斜率能反映病菌對(duì)殺菌劑的敏感程度，斜率越大，藥劑隨濃度的增大其抑菌效果提高得越快［16］。由表2可知，農(nóng)用硫酸鏈霉素、辛菌胺醋酸鹽、中生菌素、乙蒜素及拮抗菌活性物質(zhì)的毒力回歸方程斜率分別為0.593 5、0.530 6、0.439 9、0.335 9、0.846 4，拮抗菌活性物質(zhì)的斜率最大，其次是農(nóng)用硫酸鏈霉素和辛菌胺醋酸鹽，而中生菌素和乙蒜素稍低。說(shuō)明隨著藥劑濃度的提高，煙草青枯病菌對(duì)拮抗菌活性物質(zhì)和農(nóng)用硫酸鏈霉素的敏感性越高，即提高藥劑使用濃度可以達(dá)到更好的殺菌效果。

2.5 拮抗菌活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)表征

紫外掃描結(jié)果見(jiàn)圖5。拮抗菌抑菌活性物質(zhì)在284 nm附近有吸收峰，表明拮抗菌活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)上有一個(gè)簡(jiǎn)單的或非共軛的生色團(tuán)，含O，N 或 S，可能是 C[FY=，1]C、C[FY=，1]N、N[FY=，1]N、—NO2、—COOH、—CO—NH2，推測(cè)是多肽類(lèi)物質(zhì)。紅外光譜分析（圖6）表明，拮抗菌活性物質(zhì)在3 353.67 cm-1吸收峰可能是N—H鍵的伸縮振動(dòng)峰，2 943.48 cm-1和 2 826.09 cm-1 出現(xiàn)弱吸收的是C—H伸縮振動(dòng)峰。這2組吸收峰是糖類(lèi)的特征峰。1 663.35 cm-1強(qiáng)峰為羰基伸縮振動(dòng)峰，1 445.34 cm-1吸收峰表示可能含有甲基和亞甲基，1 417.39 cm-1處吸收峰可能是C—N鍵的伸縮振動(dòng)，1 026.09 cm-1處強(qiáng)吸收峰可能是C—O鍵的變角振動(dòng)吸收，包括C—O—H和C—O—C鍵［17］。第4區(qū)750～600 cm-1區(qū)域有1個(gè)寬的中等強(qiáng)度譜帶，即668.32 cm-1，可能是由N—H鍵面外搖擺振動(dòng)引起的。由于抑菌活性物質(zhì)溶于甲醇，因此1 445.34 cm-1與1 026.09 cm-1處的吸收[CM（21]峰不能作為拮抗活性物質(zhì)的特征吸收峰。綜上所述，可以推斷拮抗菌活性物質(zhì)為含有酰胺鍵（—CO—NH2）的有機(jī)化合物，可能是一種糖肽類(lèi)化合物，這與紫外掃描圖譜的結(jié)果相符。

3 討論與結(jié)論

生防菌株在植株根部的定殖能力往往決定了其生防效果，而從土壤中提取分離的拮抗菌可以讓生防菌更好的定殖［18］。本試驗(yàn)前期從福建省龍巖上杭區(qū)下枋煙田土壤中分離篩選到1株對(duì)青枯病菌有明顯抑菌效果的拮抗菌FQ-8，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液去雜后，經(jīng) 1 ∶[KG-*3]1乙酸乙酯萃取，蒸發(fā)濃縮收集拮抗菌活性物質(zhì)，檢測(cè)其抑菌特性并分析其結(jié)構(gòu)特征。

試驗(yàn)參照吳興可等的方法［15］，對(duì)發(fā)酵液過(guò)濾進(jìn)行了改進(jìn)，將助濾劑硅藻土制成濾層，顯著提高了過(guò)濾效率，節(jié)約了微孔濾膜等耗材，且發(fā)酵液粗提物的抑菌效果沒(méi)有改變。分離、提取濃縮后的拮抗菌粗提物呈淡黃色溶液，冷凍干燥后為深褐色黏性固體，不易磨成粉末。室內(nèi)毒力試驗(yàn)結(jié)果表明，在推薦濃度下，25%多菌靈可濕性粉劑和75%百菌清可濕性粉劑對(duì)煙草青枯病菌沒(méi)有抑制作用，而72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶性粉劑、1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑、3%中生菌素可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油以及拮抗菌活性物質(zhì)粗提物對(duì)煙草青枯病菌均有顯著的抑制作用。通過(guò)對(duì)比EC50發(fā)現(xiàn)，拮抗菌活性物質(zhì)的抑菌效果與3%中生菌素可濕性粉劑相近，弱于72%農(nóng)用鏈霉菌素而高于80%乙蒜素乳油。毒力回歸方程（表2）顯示，拮抗菌活性物質(zhì)斜率最大，表明煙草青枯菌對(duì)該活性物質(zhì)敏感性最強(qiáng)，抑菌效果提高快。本試驗(yàn)結(jié)果與林天然等的研究結(jié)果［19-20］基本一致，說(shuō)明拮抗菌 FQ-8 所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)具有成為防控?zé)煵萸嗫莶∷巹┑拈_(kāi)發(fā)潛力。

目前，已分離鑒定的煙草青枯病拮抗菌有100多株［21］，主要包括芽孢桿菌［10，22-24］、假單胞菌［25-26］、放線菌［7，11，13，27］及菌根真菌［28］等，從拮抗菌發(fā)酵液中提取的抑菌活性物質(zhì)種類(lèi)繁多。Xue等用超聲波破碎鏈霉菌Streptomyces alboflavus TD-1 菌絲，經(jīng)甲醇提取的拮抗物質(zhì)對(duì)煙草青枯病菌的最小抑菌濃度為3.125 mg/mL，該物質(zhì)通過(guò)影響病原菌細(xì)胞膜通透性，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整及干擾核酸、蛋白質(zhì)的合成等途徑起到生物防治的效果，但其化學(xué)性質(zhì)與結(jié)構(gòu)特征未知［7］。羅文建等從健康土壤中分離到1株鏈霉菌LC-7，所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)為一種新的氨基糖苷類(lèi)抗生素，分子量為 365.1［29］。吳翔等從高粱根際土中篩選出株銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）MT-002-B-7，其拮抗物質(zhì)經(jīng)紅外光譜和GC-MS分析，初步認(rèn)為主要成分是N-乙酰-3-甲基-1，4-二氮雜雙環(huán)［4.3.0］-壬烷-2，5-二酮、脂肪酸和酚嗪［30］。陳倩倩從煙草根際土壤分離到放線菌SA74，并得到其抗菌活性成分粗蛋白［31］。段燕平等從云南和貴州煙草青枯病重病區(qū)的健康煙草根際土壤篩選到1株枯草芽孢桿菌SH7，其抑菌活性物質(zhì)為蛋白多肽類(lèi)物質(zhì)［32］。本項(xiàng)目拮抗菌FQ-8抑菌活性物質(zhì)在284 nm附近有吸收峰，表明該活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)上含有C[FY=，1]C、C[FY=，1]N、N[FY=，1]N、—NO2、—COOH及—CO—NH2等基團(tuán)，有可能是多肽類(lèi)物質(zhì)。紅外光譜分析（圖6）表明，拮抗菌活性物質(zhì)在3 353.67、2 982.61、2 943.48、2 826.09、1 663.35、1 445.34、1 417.39、1 026.09、891.93、668.32 cm-1有吸收峰，推測(cè)該活性物質(zhì)為含有酰胺鍵（—CO—NH2）的有機(jī)化合物，印證了紫外圖譜的結(jié)果。綜合來(lái)看，拮抗菌FQ-8所產(chǎn)活性物質(zhì)可能是一種糖肽類(lèi)化合物。有關(guān)活性肽對(duì)植物病害的控制報(bào)道更多的源自一些芽孢桿菌，而源自放線菌的少見(jiàn)報(bào)道［33］。進(jìn)一步試驗(yàn)（另文發(fā)表）表明，該化合物冷凍干燥后不溶于水，但可以溶解于甲醇中。其抑菌活性受低溫抑制，但能耐受125 ℃的高溫。其確切成分、結(jié)構(gòu)特性、抑菌機(jī)理及田間的防治效果有待深入研究。

綜上，本研究從福建龍巖煙田發(fā)病煙草根際土壤分離到一株煙草青枯病拮抗菌株鏈霉菌FQ-8。室內(nèi)毒力試驗(yàn)表明，拮抗菌FQ-8活性物質(zhì)對(duì)煙草青枯病毒力與3%中生菌素可濕性粉劑相近，低于72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶性粉劑和1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑，高于80%乙蒜素乳油，煙草青枯病菌對(duì)拮抗菌FQ-8活性物質(zhì)的敏感性高于供試的6種殺菌劑。拮抗菌FQ-8所產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)可能是一種含有酰胺鍵（—CO—NH2）的糖肽類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)特性有待深入研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］Li X，Liu Y，Cai L，et al. Factors affecting the virulence of Ralstonia solanacearum and its colonization on tobacco roots［J］. Plant Pathology，2017，66（8）：1345-1356.

［2］李 想，劉艷霞，蔡劉體，等. 煙草青枯病菌在煙草根際的定殖及最適發(fā)病條件［J］. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2016，43（5）：796-804.

［3］Liu Y，Wu D S，Liu Q P，et al. The sequevar distribution of Ralstonia solanacearum in tobacco-growing zones of China is structured by elevation［J］. European Journal of Plant Pathology，2017，147（3）：541-551.

［4］王 垚，黃純楊，楊 亮，等. 煙草青枯病復(fù)配增效藥劑篩選及田間防效［J］. 農(nóng)藥，2022，61（10）：776-780.

［5］郭艾云，鮑艷宇，周啟星. 土壤農(nóng)藥污染與細(xì)菌農(nóng)藥-抗生素交叉抗性研究進(jìn)展［J］. 微生物學(xué)通報(bào)，2020，47（9）：2984-2995.

［6］易有金，劉如石，尹華群，等. 煙草青枯病拮抗內(nèi)生細(xì)菌的分離、鑒定及其田間防效［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2007（3）：554-558.

［7］Xue Y B，Yang M G，Li S H，et al. The antibiotic activity and mechanisms of active metabolites （Streptomyces alboflavus TD-1） against Ralstonia solanacearum［J］. Biotechnology Letters，2019，41（10）：1213-1222.

［8］何洪令，李鈉鉀，孫成成，等. 煙草青枯病的生物防治研究進(jìn)展［J］. 植物醫(yī)生，2021，34（2）：4-8.

［9］濮永瑜，包玲鳳，何 翔，等. 煙草青枯病和黑脛病拮抗細(xì)菌的篩選、鑒定及防效研究［J］. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2022，38（7）：116-123.

［10］趙 倩，李軍民，雷 庭，等. 嗜酸性PGPR菌株CLB-17的篩選、鑒定及其對(duì)煙草青枯病菌的生防活性［J］. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2022，49（2）：528-538.

［11］孫新城，司艷紅，張 莉，等. 抗煙草青枯病拮抗菌的篩選及抑菌活性研究［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（14）：5917-5918，5929.

［12］董昆明，陳 亮，周曉見(jiàn)，等. 1株抑煙草青枯病生防菌的篩選、鑒定及其活性物質(zhì)研究［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（31）：19172-19175.

［13］湯鳴強(qiáng)，林天然，李小芳，等. 煙草青枯病拮抗菌的分離篩選與抑菌活性物質(zhì)研究［J］. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021，60（18）：92-96.

［14］李璐寧，張 薇，趙永強(qiáng)，等. 放線菌Y23菌株發(fā)酵液抗菌活性及穩(wěn)定性測(cè)定［J］. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，41（1）：71-74.

［15］吳興可，祁 荃，卞婷婷，等. 珍貴橙色束絲放線菌發(fā)酵產(chǎn)安絲菌素P-3的分離純化工藝優(yōu)化［J］. 化工進(jìn)展，2020，39（3）：1122-1128.

［16］趙志祥，嚴(yán)婉榮，陳 圓，等. 幾種殺菌劑對(duì)生姜青枯病菌的毒力測(cè)定［J］. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（9）：76-78，81.

［17］Cai Y Q，Chen P，Wu C Y，et al. Sulfated modification and biological activities of polysaccharides derived from Zizyphus jujuba cv. Jinchangzao［J］. International Journal of Biological Macromolecules，2018，120：1149-1155.

［18］張潔梅，張仁軍，姚正平，等. 煙草青枯病生防菌的篩選及其田間防效評(píng)價(jià)［J］. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2020，36（28）：131-136.

［19］林天然，盧藝惠，曾文龍，等. 常見(jiàn)殺菌劑對(duì)煙草青枯病菌的毒力效應(yīng)［J］. 農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2020，10（8）：33-37.

［20］黃保宏，高正良，周本國(guó)，等. 四種殺菌劑對(duì)煙草青枯病菌的毒力比較［J］. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2015，21（1）：72-75.

［21］Hu Y，Li Y Y，Yang X Q，et al. Effects of integrated biocontrol on bacterial wilt and rhizosphere bacterial community of tobacco［J］. Scientific Reports，2021，11：2653.

［22］陸錚錚，蔣選利. 煙草青枯病菌土壤拮抗細(xì)菌的篩選及鑒定［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（6）：99-102.

［23］黎妍妍，李春黎，王 林，等. 生防菌使用方式對(duì)煙草青枯病的防效及根際土壤細(xì)菌群落的影響［J］. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2020，26（4）：101-107.

［24］Hu Y，Zhao W，Li X H，et al. Integrated biocontrol of tobacco bacterial wilt by antagonistic bacteria and marigold［J］. Scientific Reports，2021，11：16360.

［25］施河麗，譚 軍，譚紹安，等. 熒光假單胞菌緩解植煙土壤酸化效果及對(duì)煙草青枯病的防治作用［J］. 煙草科技，2023，56（2）：19-25.

［26］舒翠華，彭可為，戴林建，等. 煙草青枯病菌內(nèi)生拮抗菌株HN3的鑒定與高產(chǎn)抗菌物質(zhì)的培養(yǎng)基優(yōu)化［J］. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（10）：108-113.

［27］Liu Y X，Shi J X，F(xiàn)eng Y G，et al. Tobacco bacterial wilt can be biologically controlled by the application of antagonistic strains in combination with organic fertilizer［J］. Biology and Fertility of Soils，2013，49（4）：447-464.[HJ2mm]

［28］劉先良，習(xí)向銀，申 鴻，等. 接種叢枝菌根真菌對(duì)煙草青枯病抗性的影響［J］. 煙草科技，2014，47（5）：94-98.

［29］羅文建，劉雨虹，施河麗，等. 青枯雷爾氏菌拮抗放線菌的篩選及其抗菌活性物質(zhì)的分離［J］. 中國(guó)煙草科學(xué)，2017，38（2）：69-74.

［30］吳 翔，謝麗源，甘炳成，等. 一株煙草青枯拮抗細(xì)菌中活性物質(zhì)穩(wěn)定性和粗提物成分分析［J］. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2019，32（7）：1549-1554.

［31］陳倩倩. 煙草根際土壤拮抗放線菌SA74菌株活性代謝產(chǎn)物的研究［D］. 洛陽(yáng)：河南科技大學(xué)，2019.

［32］段燕平，楊金廣，楊繼洪，等. 抗煙草青枯病菌的枯草芽孢桿菌SH7的篩選與鑒定［J］. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（1）：52-57.

［33］Baysal ，Lai D，Xu H H，et al. A proteomic approach provides new insights into the control of soil-borne plant pathogens by Bacillus species［J］. PLoS One，2013，8（1）：e53182.

收稿日期：2023-03-22

基金項(xiàng)目：中國(guó)煙草總公司福建省公司科技項(xiàng)目（編號(hào)：20173500024112）。

作者簡(jiǎn)介：湯鳴強(qiáng)（1966—），男，福建霞浦人，博士，教授，從事微生物技術(shù)研究。E-mail：mqt-1022@163.com。