深圳地區0～2歲健康兒童淋巴細胞亞群參考區間的建立*

王甩艷,黃 濤,盧文深,莫紅梅△

1.廣東省深圳市羅湖區人民醫院醫學檢驗科,廣東深圳 518001;2.廣東省深圳市兒童醫院檢驗科,廣東深圳 518026

體內不同的免疫功能狀態是輔助臨床疾病診斷、探索疾病發病機制、病程、預后、監測、指導臨床治療方案的重要依據之一。淋巴細胞或淋巴細胞亞群的數量和功能變化在臨床各種類型免疫缺陷癥、自身免疫性疾病及腫瘤等疾病的診療中具有十分重要的作用。在免疫性疾病和血液疾病中兒童時期淋巴細胞亞群會發生劇烈變化,外周血淋巴細胞亞群的免疫表型能否為診治提供重要信息也取決于年齡匹配的健康個體的參考值,已有很多學者在各種種族人口中對外周血淋巴細胞亞群的參考范圍進行了評估[1-5]。然而國內目前尚無統一的0～2歲健康兒童淋巴細胞亞群的參考區間。因此,建立本地區的淋巴細胞亞群的參考區間是十分重要和必要的。本研究建立了深圳地區0～2歲健康兒童淋巴細胞亞群的相對和絕對數量的參考區間,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年7月1日在廣東省深圳市羅湖區人民醫院和廣東省深圳市兒童醫院健康體檢的268例0～2歲健康兒童外周血標本檢測淋巴細胞亞群的相關數據,其中男136例,女132例。依據《中華人民共和國衛生行業標準WST-402-2012》收集相關數據。排除標準:(1)患有黃疸、自身免疫性疾病、惡性黑色素瘤、中樞神經系統病變等;(2)肝、腎功能不全;(3)體檢結果異常;(4)近期出現發熱、咳嗽等不適;(5)近期有用藥史。

1.2儀器與試劑 儀器為邁瑞BriCyte E6 流式細胞儀,依據標準操作程序檢測淋巴細胞亞群各參數值。使用邁瑞CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑和CD3-FITC/ CD16+CD56+-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑。

1.3方法

1.3.1室間質量評價 2017年10月至2021年10月實驗室皆參加全國臨床檢驗室間質量評價淋巴細胞亞群10個檢驗項目全部合格,保證了檢測結果的正確度。

1.3.2建立參考區間[6]

1.3.2.1標本采集與檢測 按試劑盒說明書要求采集兒童血清,用上述儀器及試劑進行檢測。

1.3.2.2數據中疑似離群值的判斷 采取Dixon法判斷離群值。將疑似離群點和其相鄰點的差值D和數據全距R相除,D/R應≤1/3,超出1/3考慮為離群點。若有≥2個疑似離群點可將最小的疑似離群點如上進行處理。若>1/3則剔除所有數據;若<1/3則保留所有數據。

1.3.2.3分組 按性別分組,采用統計學方法比較組間差異,若差異有統計學意義則在保證每組標本數為120例的條件下重新計算參考區間;若差異無統計學意義則無需重新計算參考區間。

1.3.2.4參考區間的驗證 采用小樣本參考個體的驗證,選擇20例健康兒童外周血標本(符合相應的排除標準)對參考區間進行驗證,20例參考個體中<2例的數值在參考區間之外則參考區間適用。

2 結 果

2.2不同性別兒童淋巴細胞亞群各項指標比較 女性兒童CD3+CD4+%、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均高于男性, CD3+CD8+%低于男性,差異均有統計學意義(P<0.05)。不同性別兒童其他指標水平比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1、2。

表1 不同性別兒童外周血淋巴細胞亞群T、B、NK細胞相對數

表2 不同性別兒童外周血淋巴細胞亞群T、B、NK細胞絕對數個/微升)

2.3淋巴細胞亞群的參考區間 深圳地區0～2歲健康兒童淋巴細胞亞群T、B、NK細胞的相對數、絕對數的參考區間見表3、4。

表3 外周血淋巴細胞亞群T、B、NK細胞相對數的參考區間

表4 外周血淋巴細胞亞群T、B、NK細胞絕對數的參考區間(個/微升)

2.4參考區間驗證結果 女性兒童中CD3+CD4+/CD3+CD8+比值不在建立的參考區間范圍內1例,其余檢測值均在參考區間范圍內,故建立的參考區間適用于本地區兒童。見表5。

表5 外周血淋巴細胞亞群參考區間驗證結果(n=20)

3 討 論

淋巴細胞是人體發揮免疫功能的重要組分,尤其是在兒童抗感染免疫中發揮著重要作用,是防衛病原體入侵最有效的武器。根據其生物功能和細胞表面抗原表達情況分為NK(CD3-CD16+CD56+)、T(CD3+)、B(CD3-CD19+)淋巴細胞不同亞群[7]。T淋巴細胞是淋巴細胞的主要組分,具有多種生理學功能,是人體細胞免疫功能狀態的重要指標,T淋巴細胞水平升高多為發生超敏反應,降低則多表示機體免疫功能降低,易發生感染。成熟T淋巴細胞可根據其細胞表面CD4、CD8的表達不同分為CD4+T淋巴細胞 (CD3+CD4+)和 CD8+T淋巴細胞(CD3+CD8+)。其中CD4+T淋巴細胞主要為輔助性T細胞,既可通過產生細胞因子輔助細胞免疫和體液免疫,同時也可起到免疫抑制的作用。CD4+T淋巴細胞增高容易出現超敏反應,發生自身免疫性疾病,降低則易發生感染等。CD8+T淋巴細胞主要為細胞毒性T淋巴細胞,是免疫反應中的直接殺傷性細胞,可通過釋放毒性蛋白導致細胞凋亡從而殺傷靶細胞。其增加可導致嚴重的免疫缺陷,減少可發生過強的免疫反應。另外輔助性T淋巴細胞與細胞毒性T淋巴細胞比值(CD3+CD4+/CD3+CD8+)也有其一定的意義,升高常表明細胞免疫功能處于極度活躍狀態,常見于自身免疫性疾病;比值降低則相反,表明細胞免疫功能處于免疫抑制的狀態,常見于免疫缺陷病、感染性疾病,如惡性腫瘤、呼吸道感染等。B淋巴細胞也是淋巴細胞的主要組分之一,能通過產生分泌各種免疫球蛋白和抗體,從而介導體液免疫應答[8]。其水平升高一般與變態反應性疾病和感染性疾病相關,降低常見于免疫缺陷病和感染性疾病。NK細胞是機體重要的免疫細胞,發揮介導病原體感染細胞的細胞毒作用[9],在抗腫瘤、抗病毒感染、免疫調節中發揮著重要作用。因此,不同的免疫應答途徑會使淋巴細胞亞群水平出現不同變化,即淋巴細胞及其亞群的消長能反映機體在不同條件下免疫功能的變化,可用于與免疫系統明顯相關疾病的輔助診斷、判斷病情、評估預后、指導治療及療效監測,而提供這一重要信息依據于年齡匹配的健康個體的參考值。

綜上所述,對0～2歲兒童這一特殊群體國內外目前尚無統一的淋巴細胞亞群的健康人群參考區間。及早發現兒童非正常細胞免疫狀態可及早明確重癥感染的原因和原發性疾病的診斷,而0～2歲兒童淋巴細胞亞群存在較大差異,并且不同地區實驗室所用的流式細胞儀不同、試劑不同、對試驗數據處理的方法也有差異。因此,建立本地區0～2歲健康兒童淋巴細胞亞群的參考區間無論是對今后的基礎研究還是當前臨床診治均顯得尤為重要和必要。