非甾體類(lèi)抗炎藥前處理及檢測(cè)方法研究進(jìn)展

孫志軒,李 苗,黃婧潔,錢(qián)思萱,顧雅妮,李建成*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物源性食品安全檢測(cè)技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100193;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,北京 100193)

非甾體類(lèi)抗炎藥(Non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)是一類(lèi)沒(méi)有甾體結(jié)構(gòu)的抗炎藥,可以抑制環(huán)氧合酶(Cyclooxygenase, COX)以及其同工酶,從而阻斷前列腺素、白三烯和血栓素A的合成,達(dá)到了抗炎、抗風(fēng)濕、減輕疼痛和退熱的作用[1]。NSAIDs是目前全世界獸醫(yī)和人類(lèi)醫(yī)學(xué)中使用最為廣泛的藥物之一,全世界每天大約有3000萬(wàn)人使用這類(lèi)藥物。盡管NSAIDs是相對(duì)安全的藥物,帶來(lái)了許多益處,但其使用也可引起嚴(yán)重的副作用,其中胃腸道并發(fā)癥是最為常見(jiàn)的,除了嚴(yán)重的胃腸道損傷,藥物還可以引起腎臟毒性、肝臟毒性、心血管風(fēng)險(xiǎn)甚至是過(guò)敏性休克[2]。

隨著NSAIDs使用的持續(xù)增加,其藥物的安全性和副作用已成為目前全世界醫(yī)藥界關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。同時(shí),也正因?yàn)镹SAIDs是人類(lèi)與動(dòng)物臨床治療中最常用的藥物,其在世界各地的廣泛使用已導(dǎo)致其在水環(huán)境中無(wú)處不在,最近在許多研究中NSAIDs被認(rèn)定為新出現(xiàn)的微量環(huán)境污染物[3]。在養(yǎng)殖場(chǎng)中,NSAIDs被廣泛用于治療動(dòng)物的發(fā)熱、疼痛、炎癥、肌肉骨骼疾病以及與抗生素聯(lián)合用藥治療呼吸道疾病和奶牛的乳腺炎等。并有研究表明,NSAIDs能夠提高牛的生育能力,這些益處都使得NSAIDs在食品動(dòng)物中被濫用[4]。NSAIDs在動(dòng)物源性食品中的殘留對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅,因此對(duì)食品中藥物殘留的分析監(jiān)測(cè)具有重要意義。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)動(dòng)物源性食品中的NSAIDs殘留檢測(cè)技術(shù)報(bào)道較少,盡管一些NSAIDs已注冊(cè)為獸藥,但僅少數(shù)NSAIDs具有確定的最大殘留水平(Maximum Residue Limit, MRL)。各國(guó)NSAIDs的MRLs見(jiàn)表1。

表1 各國(guó)NSAIDs殘留限量標(biāo)準(zhǔn)Tab 1 MRLs for NSAIDs in various countries

檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留需要進(jìn)行樣品的前處理、檢測(cè)方法的建立和數(shù)據(jù)的分析驗(yàn)證,以評(píng)估既定方法的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性和靈敏性。獸藥殘留分析技術(shù)的兩個(gè)主要部分是樣品制備的前處理方法和藥物殘留的檢測(cè)分析方法。第一部分樣品制備的前處理方法主要包括提取、凈化和濃縮。其中提取獸藥的方法有液液萃取、快速溶劑提取、固相萃取、固相微萃取、QuEChERS和基質(zhì)分散固相萃取等。第二部分就是用于篩選或測(cè)定殘留物的檢測(cè)分析技術(shù),進(jìn)行定性定量分析的技術(shù)大致分為三種類(lèi)型:微生物法,免疫學(xué)法和物理化學(xué)方法,包括酶聯(lián)免疫吸附法、免疫膠體金技術(shù)、熒光偏振免疫分析、生物傳感器技術(shù)、毛細(xì)管電泳、液相色譜、氣相色譜和液相色譜-質(zhì)譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜等[5]。

1 NSAIDs樣品前處理方法

動(dòng)物源性食品具有復(fù)雜的基質(zhì)和許多內(nèi)源性干擾物質(zhì),無(wú)法直接檢測(cè)獸藥殘留物。在樣品檢測(cè)之前,通常需要進(jìn)行樣品前處理步驟,如提取、純化、蒸發(fā)或濃縮。因此樣品的前處理方法的創(chuàng)新也是當(dāng)下藥物殘留分析研究的熱點(diǎn)[6]。

1.1 液液萃取(Liquid-Liquid Extraction,LLE) LLE是一種傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理方法,包括溶劑萃取和超聲波振動(dòng)介導(dǎo)萃取。LLE方法已被用于從動(dòng)物源性食品中提取獸藥殘留物近十幾年。該方法操作簡(jiǎn)單,在準(zhǔn)備分離的液體混合物中加入一種與其不溶或部分互溶的液體溶劑,經(jīng)過(guò)充分地混合,利用混合液中各種組分在溶劑中溶解度的差異,從而實(shí)現(xiàn)分離。但試劑耗量高、預(yù)濃度系數(shù)低、樣品制備時(shí)間長(zhǎng)和所需樣品量高這些都是LLE方法的一些缺點(diǎn)[7]。2019年Zheng等開(kāi)發(fā)了一種LLE結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS)的檢測(cè)方法,檢測(cè)了鰻魚(yú)、比目魚(yú)和蝦中的的萘普生,回收率為70%～117%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(Relative Standard Deviation,RSD)<9.3%,特異性、線性、準(zhǔn)確性和精密度的驗(yàn)證結(jié)果令人滿意[8]。2020年Di等開(kāi)發(fā)了均相液-液微萃取(Homogeneous Liquid-Liquid Micro-Extraction, HLLME),此方法使得有機(jī)相和水相之間的接觸面積無(wú)限大。在分析之前,對(duì)水樣中的3種NSAIDs(包括酮洛芬、萘普生和托美汀)進(jìn)行了富集和純化,該方法精密度高,回收率為97.2%～105.7%,比Zheng的方法準(zhǔn)確性更高[9]。2022年Mashal等開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證了LLE以同時(shí)定量檢測(cè)19種NSAIDs,回收率范圍為90%～106%,變異系數(shù)低于15%,該方法準(zhǔn)確性好,但精密度沒(méi)有以上方法好,仍需進(jìn)行優(yōu)化[10]。

1.2 固相萃取(Solid-Phase Extraction, SPE) SPE因其卓越的分離效率和凈化能力而成為典型的提取方法。SPE是一種具有快速選擇性的樣品制備和純化技術(shù),主要步驟為柱預(yù)處理、加樣、除去干擾雜質(zhì)、目的分析物的洗脫和收集。SPE選擇性的基本原理與色譜相似,與傳統(tǒng)的LLE方法相比,SPE可以提高分析物的回收率,可以更有效地將分析物與干擾成分分離,并減少樣品的預(yù)處理,使其操作簡(jiǎn)單,節(jié)省時(shí)間和精力[11-12]。SPE可以用于從肉、牛奶、雞蛋和蜂蜜等動(dòng)物可食用組織中提取獸藥。此外,SPE也經(jīng)常與LLE等其他方法結(jié)合使用,以便更好地富集和純化動(dòng)物源性食品中的獸藥,是使用最廣泛的樣品前處理技術(shù)之一[13]。同時(shí),SPE的效率在很大程度上取決于所用吸附劑的性質(zhì),因此,合成具有高吸收能力和選擇性的SPE吸附劑的新材料是研究的重點(diǎn)方向[14]。

2022年Hsen等人開(kāi)發(fā)了一種磁性固相萃取(Magnetic-Solid Phase Extraction, MSPE)結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)的分析方法,用于測(cè)定水樣中的5種NSAIDs。該方法中所有的NSAIDs平均回收率均在90%以上,RSD<17%,精密度良好[15]。2019年Han等制備了一種新型的磁性多孔碳用作MSPE吸附劑,用于測(cè)定環(huán)境水和生物樣本中的3種NSAIDs,并結(jié)合高效液相色譜(HPLC)使得該方法回收率為84.67%～113.73%,RSD<7.76%,準(zhǔn)確性較高[16]。2018年Ma等合成了新型磁性納米顆粒用作MSPE吸附劑,從水樣本中提取8種NSAIDs,回收率為88.0%～108.6%,RSD<5.5%,準(zhǔn)確性與重復(fù)性比Han所制備的方法表現(xiàn)的好[17]。2022年Liu等制備了新的復(fù)合材料以提高SPE的效率,結(jié)合HPLC從水樣本中提取NSAIDs,回收效率達(dá)到97.7%～105.1%,RSD<6.71%,該方法與以上方法相較,有出色的準(zhǔn)確性與重復(fù)性[18]。

1.3 固相微萃取(Solid-Phase Micro-Extraction, SPME) SPME是從SPE衍生出來(lái)的一種無(wú)溶劑的樣品處理技術(shù),最初由Belardi等人于1989年首次提出。利用萃取頭表面涂有特殊吸附材料,將待測(cè)物從水樣中吸附和解吸分離富集的技術(shù),旨在解決SPE和LLE固有的局限性。SPME與LLE和SPE等傳統(tǒng)萃取技術(shù)相比,它具有易于使用,速度相對(duì)較快,易于自動(dòng)化,便攜式,無(wú)溶劑等優(yōu)勢(shì)[19]。但SPME與SPE相比仍然有一些缺點(diǎn),SPME裝置的萃取成本較高,重復(fù)性較差,多次使用可能存在交叉污染等問(wèn)題。

2018年Wang等建立了基于綠色深共晶溶劑制備了聚合物單片柱SPME,用于水樣中NSAIDs的檢測(cè),回收率為84.5%～113.7%,RSD<4.32%,精密度較好[20]。2019年Ghorbani等建立了新穎的超聲波輔助SPME,結(jié)合HPLC來(lái)測(cè)定2種NSAIDs,這種方法成功地用于測(cè)定水、人類(lèi)尿液和牛奶樣本分析物的檢測(cè),實(shí)際樣本的平均回收率為103.7%,RSD<6.6%[21]。2019年Mirzajani等首次制備了涂有磁性納米復(fù)合材料的毛細(xì)管,并將其用作新型SPME纖維,用于測(cè)定生物液體中NSAIDs,平均回收率為94.0%～102.0%,RSD<4.7%,準(zhǔn)確性與精密度與以上兩種方法比較表現(xiàn)優(yōu)良[22]。

1.4 基質(zhì)分散固相萃取(Matrix Solid-Phase Dispersion, MSPD) MSPD是Barker等于1989年首先提出的。作為一種快速樣品處理技術(shù),其原理是將浸漬有C18等各種聚合物的單體SPE材料和樣品一起進(jìn)行研磨,得到半干狀態(tài)的混合物,隨后將其作為填料裝進(jìn)柱中,接著用不同強(qiáng)度的溶劑洗脫柱子,將各種目標(biāo)待測(cè)物洗脫下來(lái),MSPD適用于從單個(gè)樣品中提取多種藥物殘留物[23]。MSPD可以在簡(jiǎn)單的環(huán)境條件下進(jìn)行萃取過(guò)程,不需要任何特殊的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,它比傳統(tǒng)技術(shù)具有優(yōu)勢(shì),只需要幾個(gè)簡(jiǎn)單的步驟即可提取少量樣品和溶劑。因此,它被認(rèn)為是一種簡(jiǎn)單,快速,經(jīng)濟(jì),環(huán)保的方法。適用于食品,動(dòng)物組織,植物材料和環(huán)境樣品。基于這些優(yōu)點(diǎn),MSPD方法被廣泛用于從動(dòng)物源性食品中提取多種獸藥殘留物,但將其用于NSAIDs的殘留檢測(cè)的研究較少。

2017年Maria等開(kāi)發(fā)了一種渦流輔助MSPD程序來(lái)提取母乳中NSAIDs,回收率為78%～86%,RSD<8.3%,精密度良好,仍需優(yōu)化來(lái)進(jìn)行呈現(xiàn)更好的精密度[24]。2016年Sara等優(yōu)化了一種MSPD的提取方法測(cè)定了污泥中的五種NSAIDs,回收率84%～105%,RSD<4%,精密度較Maria建立的方法好[25]。

1.5 快速溶劑提取(Accelerated Solvent Extraction, ASE) ASE是一種在高溫和高壓條件下,使用有機(jī)溶劑提取的自動(dòng)化方法。ASE作為一種新的提取程序,使用有機(jī)溶劑在更高的壓力和更高的溫度下提取固體或半固體。ASE方法的優(yōu)點(diǎn)是有機(jī)溶劑含量小,速度快,基質(zhì)效應(yīng)低,回收率高,再現(xiàn)性好。與LLE和SPE方法相比,ASE具有操作簡(jiǎn)單,速度快,樣品批量處理等優(yōu)點(diǎn),大大提高了效率,節(jié)省了時(shí)間[26]。隨著樣品制備技術(shù)的發(fā)展,自動(dòng)化ASE方法正在推廣用于從動(dòng)物源性食品中提取獸藥殘留。2019年Wolecki等在研究中,提出了一種ASE-SPE-GC/MS方法,用于同時(shí)測(cè)定貽貝中的5種NSAIDs。RSD在0.24%～7.85%,平均回收率在80%～118%[27]。

1.6 QuEChERS(Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) 此提取方法廣泛用于動(dòng)物源性食品中不同類(lèi)型的獸醫(yī)藥物的殘留分析。其原理與HPLC和SPE相似,通過(guò)利用吸附填料和組織基體中的雜質(zhì)之間的相互作用來(lái)吸附雜質(zhì),從而實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)去除和凈化。Anastassiades等人首先提出了QuEChERS方法,該方法可以提取極性和非極性化合物[28]。最初,QuEChERS方法是為從水果和蔬菜中回收農(nóng)藥殘留物而開(kāi)發(fā)的,但QuEChERS方法的有效性取決于實(shí)驗(yàn)室中可用的目標(biāo)分析物特性、基質(zhì)組成、設(shè)備和分析技術(shù)。因此采用QuEChERS來(lái)檢測(cè)肌肉等肉類(lèi)組織中的NSAIDs仍不是首選,所以研究較少。

2020年,孫建等建立了 QuEChERS定性篩查中藥材熊膽粉中169種獸藥殘留,其中包含13種NSAIDs[29]。2021年Ajibola等針對(duì)從污水中提取NSAIDs,優(yōu)化了一種QuEChERS方法,結(jié)合HPLC進(jìn)行了檢測(cè)分析。回收率為70%～118%,RSD<18%[30]。2021年Zapata等開(kāi)發(fā)了一種QuEChERS分析方法,用于提取和量化條紋鯰魚(yú)肌肉中的NSAIDs,結(jié)合UPLC-MS/MS進(jìn)行量化。其中雙氯芬酸的回收率為75%～102%,RSD<8.5%,精密度良好,但其余NSAIDs的回收率并不理想[31]。2016年Daniele等使用QuEChERS提取和LC-MS/MS對(duì)雙殼類(lèi)中的NSAIDs進(jìn)行多殘留分析,回收率為78%～117%,RSD<25%,精密度與準(zhǔn)確性差強(qiáng)人意[32]。

2 NSAIDs殘留檢測(cè)方法

在樣品組織前處理結(jié)束后,通過(guò)殘留檢測(cè)分析技術(shù)來(lái)對(duì)動(dòng)物源性食品中的目標(biāo)分析物進(jìn)行定性定量分析,目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多技術(shù)來(lái)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的NSAIDs殘留。近年來(lái)常用的檢測(cè)NSAIDs殘留的方法有很多,包括液相色譜法、氣相色譜法、超高相液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳法、酶聯(lián)免疫吸附法、傳感器技術(shù)、免疫膠體金技術(shù)。

2.1 液相色譜(Liquid chromatography, LC) LC是一種傳統(tǒng)、常見(jiàn)、高效和快速的色譜方法來(lái)檢測(cè)動(dòng)物源性食物中的獸藥殘留。LC分離藥物的關(guān)鍵是選擇合適的色譜柱,并且優(yōu)化流動(dòng)相的組成和洗脫梯度。LC具有廣泛的適用性,可用于大多數(shù)獸藥殘留分析,并且可以與不同類(lèi)型的檢測(cè)器進(jìn)行結(jié)合,如:LC可以與熒光探測(cè)器(Fluorescence Detector, FLD)、二極管陣列探測(cè)器(Diode Array Detector, DAD)、紫外線探測(cè)器(Ultraviolet Detector, UVD)等特定檢測(cè)器進(jìn)行結(jié)合。

不同類(lèi)型的檢測(cè)器與LC相結(jié)合用于檢測(cè)相同類(lèi)型或不同類(lèi)型的獸醫(yī)藥物,并有其自身的優(yōu)缺點(diǎn)。FLD是高度敏感和選擇性的探測(cè)器,只能檢測(cè)產(chǎn)生熒光的化合物。DAD和UVD主要用于檢測(cè)含有紫外線吸收基團(tuán)的獸醫(yī)藥物,具有高靈敏度、低噪音和廣線性范圍的優(yōu)點(diǎn)。

2021年Qiao等使用HPLC-UV方法測(cè)定4種NSAIDs。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,該方法顯示出良好的線性,在5～2000 μg/L線性范圍內(nèi),R2為0.994～0.999,LOD為0.5～1 μg/L,LOQ為1～5 μg/L,RSD<12.86%,回收率為79.42%～107.52%[33]。2019年Hassan等用HPLC-DAD來(lái)確定人類(lèi)尿液、唾液和牛奶中的4種NSAIDs殘留,線性范圍為0.13～100 μg/mL,LOD為0.04～0.18 μg/mL,LOQ為0.13～0.61 μg/mL,RSD<7.7%, 回收率為95.7%～109.2%,準(zhǔn)確性與精密度良好[34]。

2.2 氣相色譜(Gas chromatography, GC) GC也是一種傳統(tǒng)、常用的色譜技術(shù),主要使用化合物沸點(diǎn)、極性和吸附性能的不同點(diǎn)來(lái)分離混合物。為了分析動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留物,GC通常與經(jīng)典探測(cè)器相連,主要包括的是氮磷探測(cè)器(Nitrogen phosphorus detector, NPD)、電子捕獲探測(cè)器(Electron Capture Detector, ECD)和質(zhì)譜探測(cè)器(Mass Spectrometry Detector)。與NPD和ECD相比,MS或MS/MS具有良好的恢復(fù)性、準(zhǔn)確性和可復(fù)制性,并可以確認(rèn)假陽(yáng)性。一般來(lái)說(shuō),GC檢測(cè)獸藥需要衍生反應(yīng),GC通常要求選擇特定的毛細(xì)管柱來(lái)分離樣本中的獸醫(yī)藥物,而不需要像LC方法那樣優(yōu)化移動(dòng)相位[35],但由于在對(duì)NSAIDs進(jìn)行氣相色譜分析之前,必須先進(jìn)行衍生步驟,以增加這些分析物因其酸性基團(tuán)而產(chǎn)生的揮發(fā)性并降低極性。因此由于基質(zhì)的復(fù)雜性以及NSAIDs提取和衍生反應(yīng)占用的時(shí)間,通常GC不首選用于分析NSAIDs。關(guān)于GC用于檢測(cè)NSAIDs的研究報(bào)道較少,不過(guò)GC被廣泛用于農(nóng)藥分析,也正在逐步開(kāi)發(fā)用于NSAIDs殘留檢測(cè)的研究。

2020年Avino等研究了一種測(cè)定動(dòng)物尿樣中NSAIDs的低溶劑消耗方法,并用GC-MS進(jìn)行檢測(cè)分析,回收率為94.1%～101.2%,RSD為≤4.1%。線性范圍為1～100 ng/mL(R2≥0.995),LOD在0.1～0.2 ng/mL之間,LOQ在4.1～4.7 ng/mL之間,所提出的分析方法可重復(fù),靈敏且簡(jiǎn)單[36]。

2.3 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(Ultra-High-Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry,UPLC-MS/MS) UPLC-MS/MS、HPLC和UPLC都是基于LC開(kāi)發(fā),將UPLC與FLD、DAD、UVD結(jié)合相比,MS可以同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源性食物中的100多種獸醫(yī)藥物, 同時(shí)MS具有高回收率、高選擇性、良好的可重復(fù)性和低干擾性等優(yōu)點(diǎn)。此外,串聯(lián)質(zhì)譜的使用更是提高了敏感性,并在確認(rèn)假陽(yáng)性方面發(fā)揮重要作用[37]。

2.4 毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis, CE) CE是一種較新型的液相分離技術(shù),以毛細(xì)管作為分離通道,高壓直流電場(chǎng)作為驅(qū)動(dòng)力而進(jìn)行檢測(cè)分析。CE具有許多優(yōu)點(diǎn),如效率高、樣品和緩沖劑消耗低以及速度快,是LC方法的潛在替代技術(shù)[42]。但是CE在樣品制備能力、靈敏度和分離再現(xiàn)性等方面有一定的限制,限制的原因是注射量小,毛細(xì)管直徑小,以及樣品成分引起的電滲透變化,并且由于注射量小進(jìn)而導(dǎo)致靈敏度也低。所以許多研究將CE與一些高靈敏度檢測(cè)器相結(jié)合,包括UVD、DAD、MS探測(cè)器和化學(xué)發(fā)光探測(cè)器(Chemiluminescence, CL)[43]。

2017年Espina等開(kāi)發(fā)了一種敏感的CE-UV方法用于分析水樣品中的NSAIDs,并進(jìn)行識(shí)別和定量,這三種藥物的LOD在0.96～1.27 μg/L之間,LOQ在2.91～3.86 μg/L之間,回收率為95%～104%,RSD<13.3%,精密度良好[44]。

2.5 傳感器技術(shù)(Sensor Technology ) 隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展,先進(jìn)的傳感器主導(dǎo)的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)出現(xiàn),傳統(tǒng)的色譜技術(shù)與不同的探測(cè)器結(jié)合使用,增強(qiáng)了分析方法的靈敏度、特異性和可靠性。傳感器技術(shù)為檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留物提供了一種快速、高效和具有成本效益的方法。但缺點(diǎn)是它們消耗了大量有機(jī)試劑,耗時(shí)且昂貴,不適合大量篩選樣本。該技術(shù)被用作檢測(cè)動(dòng)物源性食品中獸藥殘留物的替代檢測(cè)方法,包括電化學(xué)生物傳感器、壓電生物傳感器、光學(xué)生物傳感器等的方法[45]。許多研究開(kāi)發(fā)的傳感器分析方法不僅操作簡(jiǎn)單、速度快、成本低,而且在動(dòng)物源性食品中檢測(cè)獸藥的特異性、靈敏度和精密度方面也取得了令人滿意的效果。

2019年Tarahomi等用石墨烯氧化物修飾構(gòu)建了一種新型一次性電化學(xué)傳感器,該光盤(pán)上裝飾有Ag納米顆粒和β-環(huán)糊精,用于定量測(cè)量溶液中的萘普生,其在 0.4～80 μmol/L的濃度范圍內(nèi)是線性的。LOD為0.023 μmol/L,LOQ為0.08 μmol/L,回收率在98.5%～101.05%[46]。2020年Qian等報(bào)道了一種用于檢測(cè)萘普生的選擇性和靈敏的石墨烯氧化物電化學(xué)傳感器,電化學(xué)傳感器表現(xiàn)出廣泛的線性范圍(10 μmol/L～1 mmol/L),高靈敏度,在相同濃度下進(jìn)行了多次測(cè)量平均回收率為96.9%,RSD為2.5%,LOD為1.94 μmol/L,LOQ為6.47 μmol/L,這些結(jié)果驗(yàn)證了傳感器的準(zhǔn)確電化學(xué)量化[47]。

2.6 酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immuno￣sorbent Assay, ELISA) ELISA是一種超微實(shí)驗(yàn)檢測(cè)技術(shù),基本原則是將特定的抗原抗體免疫反應(yīng)與酶催化反應(yīng)進(jìn)行結(jié)合,并通過(guò)酶反應(yīng)的放大顯示初級(jí)免疫反應(yīng)。這種方法可以檢測(cè)抗原和抗體。ELISA具有操作簡(jiǎn)單、方便、效率高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)成本低的優(yōu)點(diǎn),廣泛用于檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留。

目前,關(guān)于NSAIDs的免疫分析方法較少,主要是因?yàn)镹SAIDs種類(lèi)多,抗體制備復(fù)雜。2018年Lin等制備敏感的氟尼辛單克隆抗體用于開(kāi)發(fā)IC-ELISA方法檢測(cè)牛奶中的氟尼辛殘留,單克隆抗體IC50為0.29 ng/mL,LOD為0.432 ng/mL,線性范圍為0.08664～0.97226 ng/mL[48]。2020年宋炎博制備了吲哚美辛的單克隆抗體,并進(jìn)一步建立了鮮奶樣品中吲哚美辛的ELISA檢測(cè)方法。抗體IC50為275.05 ng/mL,LOD為2.19 ng/mL,LOQ為40.88 ng/mL[49]。

2.7 免疫膠體金技術(shù)(Immune Colloidal Gold Technique, GICT) GICT是一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù),是以膠體金作為示蹤目標(biāo)物應(yīng)用于抗原及抗體的檢測(cè)。GICT是一種廣泛使用的免疫分析方法,具有分析時(shí)間短,肉眼可在10 min內(nèi)獲得結(jié)果,以及易于執(zhí)行和評(píng)估的優(yōu)點(diǎn)。膠體金的物理性狀,如顆粒大小、高電子密度、形狀和顏色反應(yīng),加上結(jié)合物的免疫學(xué)及生物學(xué)的特性,因而使得GICT廣泛地應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、病理學(xué)、組織學(xué)等領(lǐng)域。

2020年Na等制備了針對(duì)卡洛芬的高親和力單克隆抗體,然后開(kāi)發(fā)了用于快速篩選牛肌肉中NSAID的免疫試紙條,以幫助畜牧業(yè)強(qiáng)制遵守法規(guī),制作的試紙條的陰陽(yáng)性界限值為12.5 ng/g,分析牛樣品中的NSAIDs殘留物具有巨大潛力,IC50值為1.743 ng/g,LOD為0.283 ng/g,測(cè)量NSAID的線性范圍為0.446～6.804 ng/g,回收率為79.53%～90.55%,RSD<8.81%[50]。2021年Lin等開(kāi)發(fā)了基于單克隆抗體的GICT,用于檢測(cè)牛奶中6種NSAIDs。6種NSAIDs的IC50為0.31～5.36 ng/mL,結(jié)果可在10 min內(nèi)用肉眼獲得[51]。

3 小 結(jié)

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)動(dòng)物源性食品中NSAIDs的殘留檢測(cè)相關(guān)報(bào)道很少,并且食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中檢測(cè)的組織樣品和NSAIDs的種類(lèi)都相對(duì)單一。但NSAIDs種類(lèi)繁多、使用廣泛,在環(huán)境和動(dòng)物源性食品中的殘留情況愈加嚴(yán)重,難以滿足當(dāng)前NSAIDs的監(jiān)控需求。

本文重點(diǎn)介紹了NSAIDs在動(dòng)物源性食品中的前處理方法和檢測(cè)方法,并比較了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。NSAIDs檢測(cè)方法的發(fā)展趨勢(shì)在儀器檢測(cè)方向應(yīng)該進(jìn)一步優(yōu)化創(chuàng)新簡(jiǎn)便、高效的前處理過(guò)程,減少樣品基質(zhì)的影響。另外,在免疫分析方向,針對(duì)不同類(lèi)別的NSAIDs,設(shè)計(jì)合成半抗原,制備廣譜識(shí)別性單克隆抗體,初步構(gòu)建NSAIDs免疫分析抗體庫(kù),建立并進(jìn)一步完善NSAIDs及其代謝物的殘留檢測(cè)體系,以保證合理用藥,保障人類(lèi)食品安全,促進(jìn)畜牧業(yè)健康發(fā)展。