VICH GL43指導原則適用性研究

李 丹,徐 倩,王學偉,郭 翱,婁瑞涵,梁先明,汪 霞,蘇富琴

(中國獸醫藥品監察所,北京 100081)

技術指導原則是獸藥注冊技術評審體系的基石,是對某一知識領域基于當前的認知所達成的共識,是企業進行新獸藥研發的技術指導文件,也是獸藥技術評審工作的參考文件。目前,我國獸藥注冊技術評審體系正在不斷建設和完善,隨著科學技術進步、獸藥研發和評審需求,需要不斷制修訂技術指導原則。將國際指導原則進行轉化研究并評估其適用性,是補充技術指導原則的一種途徑。獸用藥品注冊技術要求國際協調會(Veterinary International Conference on Harmonization,VICH)指導原則是歐洲共同體(歐盟前身)、美國、日本三方對獸藥注冊技術要求取得的共識內容,包括質量控制、安全性和有效性技術指導原則。對VICH技術指導原則進行轉化適用性研究,尤其是我國獸藥目前尚未制訂的技術指導原則,對于借鑒關鍵技術要點、增強研發指導、統一評審尺度、促進獸藥國際貿易均具有重要的意義。

獸用化學藥品靶動物安全性試驗指導原則(VICH GL43)[1-3]于2009年7月開始實施,我國與靶動物安全性相關的指導原則包括寵物用藥物靶動物安全性試驗指導原則[4]、蠶藥靶動物安全性試驗指導原則[5]、畜禽用藥物靶動物安全性試驗指導原則[6],與VICH指導原則有不同點。本文對VICH GL43在我國獸藥注冊中的使用適用性進行研究,并與我國發布的相關指導原則技術要點進行比較,分析和討論一般靶動物安全和特殊情形靶動物安全性試驗在動物選擇、研究設計、給藥方案、實驗參數等方面的考慮和要求,并評估各個項目的適用性,適用性采用描述性分析,適用的情形可以直接參考,部分適用的情形可以結合實際評估后使用,不適用的情形需要按照我國的相關規定實施。

1 合規性的適用性

VICH GL43要求:安全性研究需要符合GLP要求,受試制劑需要符合cGMP要求;我國指導原則要求:安全性研究需要符合獸藥GCP要求,受試制劑需要在符合GMP要求的車間生產,并提供獸藥檢驗機構出具的產品檢驗合格報告,而我國獸藥GLP/GCP與VICH獸藥GLP/GCP劃分的維度有差異,我國是按靶動物維度劃分獸藥GCP,VICH是按照采用患病動物在田間條件實施臨床試驗的維度劃分獸藥GCP。另外,GMP的管理也有細微差別。

2 指導原則適用動物種屬的適用性

VICH GL43適用動物種屬為牛、綿羊、山羊、豬、馬、禽、犬、貓,少數動物和未包含的靶動物應符合擬注冊國家/地區管理規定。我國靶動物相關的指導原則規定,畜禽用新原料藥制成的制劑可直接參考VICH GL43實施,犬貓用制劑、已有上市原料的禽畜用制劑、蠶用制劑我國有發布的具體指導原則,可以直接適用。另外,在評價有效性的田間試驗也可以提供必要的靶動物安全性數據,我國相關的指導原則有防治奶牛乳腺炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導原則、防治奶牛子宮內膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導原則,這些也可以直接使用。因此,指導原則適用的動物種屬要求判定為部分適用。

3 一般靶動物安全性試驗要點的適用性

一般靶動物安全性試驗通常采用多倍的擬推薦劑量和/或多倍擬推薦療程來研究受試獸藥的靶動物安全性,識別毒性靶器官和量效關系,確定安全范圍,提示田間試驗的潛在不良反應,并為說明書中的安全警示和使用注意事項提供支撐數據。一般靶動物安全性試驗要點的適用性見表1。

表1 一般靶動物安全性試驗要點的適用性Tab 1 Applicability of general target animal safety experimental points

表2 試驗參數的建議內容表Tab 2 Table of the suggested experimental parameters

4 注射部位安全性的適用性

基本研究設計應考慮推薦劑量(1X)、給藥時間、給藥途徑、溶劑和注射的最大體積,通常每組使用8只動物。應包括與擬上市獸藥給藥體積相同的生理鹽水對照。如果擬上市獸藥非液體制劑,應使用合適的陰性對照。應特別注意每次注射的位置和時間,以便確定局部癥狀的緩解時間。注射部位研究安全性評價可以包括以下內容:臨床體征,包括行為或運動的變化;注射部位的外觀、炎癥、水腫或其他變化;檢測肌酸激酶和天冬氨酸轉氨酶水平;適當時間病變的大體病理學和組織病理學。如果注射部位存在炎癥,在目視或觸診發現炎癥在計劃研究結束時尚未緩解,則應確定注射部位炎癥到臨床恢復所需的時間。如果注射部位臨床體征明顯,可能需要對病變的組織進行病理學檢查。

注射部位的安全性評價內容判定為適用,根據產品特點,可結合臨床試驗實施。

5 皮膚外用制劑給藥部位安全性的適用性

對于外用制劑應按照標簽擬定劑量評價局部不良反應,一般每組8只動物,除非產品的藥理學和毒理學證明多倍劑量和/或持續時間是合理的。具有全身吸收的局部外用制劑,應進行一般靶動物安全研究。一般局部不良反應應該檢查用藥部位的腫脹、疼痛、發熱、紅斑等臨床體征。應注意動物的運動或行為變化。如果注射部位存在炎癥,目視或觸診發現炎癥在計劃研究結束時尚未緩解,則應確定用藥部位炎癥到臨床恢復所需的時間。如果用藥部位臨床體征明顯,可能需要對病變的組織進行病理學檢查。

皮膚外用制劑給藥部位安全性內容判定為適用,根據產品特點,可結合臨床試驗實施。

6 生殖安全性的適用性

擬用于種畜/種禽具有全身吸收的擬上市獸藥,應進行生殖安全性研究,旨在確定擬上市獸藥對雄性或雌性繁殖或后代生存力的不良影響。試驗參數通常集中于生殖變量,除非藥理毒理學結果顯示該獸藥可能影響性成熟,否則不考慮產后期以后后代的生存力。

應選擇健康、性器官完整、生殖狀態良好的雄性和雌性動物,代表使用藥物的靶動物種屬、年齡和類別。一般每個給藥組納入每種性別8只動物,雄性和雌性可以在相同或不同的研究中進行評價。通常,在至少一個生精周期給予雄性陰性對照和3X劑量的擬上市獸藥。在育種前(卵泡期直至妊娠)、整個妊娠期(包括胚胎期、胎兒期和出生期)以及在分娩適當時間(包括產后期,足以評估后代的初期發育和運動功能),給予雌性動物陰性對照和3X劑量的擬上市獸藥。分娩時或分娩前后不需要給藥,除非在特別指明該獸藥在此時間使用。

生殖安全性研究應酌情評價以下內容:雄性動物:精子發生、精液質量和交配行為;雌性動物:發情周期、交配行為、妊娠率、妊娠時間、分娩和哺乳期;給藥雄性和/或雌性動物的后代:發育毒理學(包括致畸性、胎兒毒性)、胎兒發育、后代數、生存力和生長、健康和發育至斷奶;家禽:蛋重、殼厚、由雌禽產蛋數、蛋繁殖力、孵化率和雛禽生存力。

生殖安全性內容判定為適用。

7 乳腺安全性研究的適用性

奶牛乳房注入劑應進行乳腺安全性研究,所用奶牛應無亞臨床或臨床乳腺炎,應以每個乳頭給予一個劑量的方式進行試驗,采用標簽擬定的使用條件、推薦劑量(1X)和給藥頻率。擬用于泌乳期的,應評價藥物對早期至中期泌乳期奶牛的急性炎癥反應,擬用于非泌乳期的,應評價泌乳期急性炎癥反應和非泌乳期慢性炎性反應。首選單組自身對照設計評價每頭奶牛給藥前和給藥后參數變化,也可以比較給藥組與陰性對照,一般選擇8只泌乳期奶牛,包括4只初乳期奶牛。

應對所有研究動物進行體檢,包括觸診,以確定腫脹、紅斑、疼痛或發熱。對于泌乳期動物的任何一種研究設計,應該在給藥前、給藥期和給藥后采集與組織刺激和產乳量相關的所有相關變量數據。給藥后監測期應該根據參數值恢復到給藥前參數值的預期時間提前規定。應在擠奶前采集每個奶頭樣品用于定量體細胞計數(SCC)和細菌培養。應記錄每日產乳量、組成(例如脂肪、蛋白質、乳糖和非脂肪固體)和外觀。安全性評估的關鍵變量通常包括乳腺刺激、SCC升高和產乳量變化。不可接受給藥后SCC非常高或SCC延長,并需解釋。

乳腺安全性內容判定為適用。

8 田間試驗的靶動物安全性數據的適用性

進行田間試驗時,應同時觀察藥物的不良反應。適用。我國發布相關指導原則有防治奶牛乳腺炎的抗微生物藥的靶動物安全性和有效性試驗指導原則[7],防治奶牛子宮內膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導原則[8]。

9 討 論

從各部分適用性的分析結果來看,靶動物安全性試驗指導原則(VICH GL43)的一般靶動物安全部分和特殊靶動物安全內容均判定為適用,除了與管理相關的內容存在差異。我國在制定相關指導原則時充分參考了VICH GL43的所有評價技術要點,并制定了集結國內專家智慧的特殊指導原則,如蠶用制劑靶動物安全性試驗指導原則[5]、防治奶牛子宮內膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導原則[8],這對我國還需要補充的指導原則提供了思路和借鑒。但是,VICH指導原則因為是共識內容,結構是框架式的,內容還不夠詳細,比如,生殖安全性研究,沒有不同種畜/種禽雄性一個生精周期時間和雌性生殖時間的參考數據,例如,種禽給藥28天的試驗設計,可以涵蓋公雞的一個生精周期(13天)、母雞一個發情周期(1天)、雞蛋形成期(12天),這些可在轉化時進行適當補充。當臨床評估獲益/風險而實驗室數據和田間數據無法滿足評估需要時,可以補充或擴大靶動物安全試驗內容,比如探索毒性的可逆性。

基于動物試驗的“4R”原則,即減少(reduction)、優化(refinement)、替代(replacement)、責任(Responsibility)[9],我國一般靶動物安全性試驗指導原則建議的動物數是每組至少6只動物,與VICH GL43的每組至少8只動物(見表1)略有差異。我國制定指導原則考慮的依據為靶動物安全性試驗統計不需要采用“拒絕H0假設”的統計學方法,即不用必須求出P值,其統計學方法為描述性分析[10],比如動物數量、中位數、平均值、標準差、最大值、最小值、超出正常范圍的數量和百分比等。再者,在生殖安全性研究中,應采用靶動物進行試驗。但有一種特例,即擬上市獸藥在靶動物與其他動物的藥動學特性沒有差異,則試驗動物的生殖安全數據可以作為支持數據,但說明書要標明“未對靶動物進行生殖安全性研究,在育種、妊娠或泌乳期動物或其后代中的安全性尚未確定”。指導原則不是強制性的法規文件,而是一種建議,VICH指導原則僅是共識內容,因此,一個技術指導原則無法窮盡所有情形,試驗設計需要結合藥物特點、擬用的靶動物特點、適應證等等進行具體問題具體分析,用于具體的少見動物和少見適應證藥物可能需要單獨制定相關指導原則[11]。

鑒于前述分析,VICH GL43在我國獸藥化學藥品研發和注冊時參考使用是適用的。