化學發光法在輸血前梅毒特異性抗體逆向篩查中的應用價值研究

陳彩霞

（十堰市鄖陽區人民醫院，湖北 十堰 442500）

梅毒屬于慢性性傳播疾病，現已成為嚴重危害我國公共衛生安全的疾病之一。為減少梅毒對我國公民健康的影響，需盡早進行篩查、診斷，以便及時采取相應的干預措施，為我國的公共衛生安全提供有效保障[1]。以往臨床常采用正向梅毒篩查流程進行輸血前梅毒特異性抗體篩查，即先行非梅毒螺旋體抗原血清試驗，然后再行梅毒螺旋體抗原血清試驗。正向梅毒篩查流程在面對日益增加的檢測樣本量時，常常會因為樣本需要稀釋、手工操作繁瑣和反應時間長等因素而存在漏檢或誤診的情況，加之該方法的檢測結果需要醫者用肉眼進行判斷，因此會導致檢測結果存在一定的主觀性，影響檢測結果的準確性[2]。針對這種情況，需要對篩查模式進行改進，尋找一種簡單、可靠的篩查方法，以提高梅毒篩查的準確率?；瘜W發光法（CLIA）具有自動化、操作簡便、高通量等優點，現已成為篩查大批量梅毒樣本的主要方法[3]?；诖?，本文采用CLIA 對梅毒特異性抗體進行逆向篩查，同時采用非梅毒螺旋體抗原血清甲苯胺紅不加熱試驗（TRUST）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）進行復測，再對TRUST 檢測后呈陽性的標本進行滴度檢測，對檢測結果進行分析，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對我院產科2019 年1 月至2021 年3 月期間接收的需要進行輸血前梅毒篩查產婦的臨床資料進行收集，共9012 例，年齡為19 ～44 歲，平均年齡為（28.69±5.89）歲；其中初產婦3664 例，經產婦5348 例；文化程度：小學962 例、中學1225 例、大專3841 例、本科及以上2984 例。共采集研究對象的血清樣本9012 份。

1.2 方法

儀器與試劑：本次研究所用的儀器有：Axceed360 型化學發光免疫分析儀﹝博奧賽斯（天津）生物科技有限公司﹞、WLR-H5000 型數顯混勻器（中國蘇州東吳醫用電子儀器廠）。本次研究所用的試劑有：CLIA 試劑盒﹝博奧賽斯（天津）生物科技有限公司﹞、TRUST 試劑（中國上海榮盛生物藥業有限公司）、TPPA 試劑（日本富士瑞必歐株式會社）、質控血清（中國上海市臨床檢驗中心）。先采用CLIA 對9012 份血清樣本進行初篩，對初篩結果呈陽性的樣本給予TRUST、TPPA 復測，對TRUST 復測呈陽性的標本行滴度檢測。檢測操作需嚴格按照試劑說明書進行，并對質控血清進行測定。

1.3 觀察指標

對血清樣本經CLIA、TRUST、TPPA 及滴度檢測的結果進行統計，根據結果設定陽性、陰性對照分析。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，% 用以表示計數資料，行χ2 檢驗，±s用以表示計量資料，行t檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 樣本的梅毒血清學檢測結果

9012 份樣本經CLIA 檢測發現有129 份（1.43%）呈陽性，對129 份初篩呈陽性的樣本進行TRUST、TPPA 復測，結果發現：129 份樣本有43 份（33.33%）經TRUST、TPPA 復測后均呈陽性；有1 份（0.78%）為TRUST 檢測呈陽性而TPPA 檢測呈陰性；有78份（60.47%）TRUST 檢測呈陰性而TPPA 檢測呈陽性；有7 份（5.43%）TRUST、TPPA 復測均為陰性。由此可知，在129 份初篩呈陽性的樣本中，TRUST、TPPA 復測呈陽性的概率分別為34.11%（44/129）、93.80%（121/129），兩種檢測方法的陽性率經統計學分析發現差異有統計學意義（P＜0.05）。129 份初篩呈陽性樣本的TRUST、TPPA 復測結果見表1。

表1 129 份初篩呈陽性樣本的TRUST、TPPA 復測結果（份）

2.2 初篩呈陽性的129 例患者的診斷分析

對129 例經CLIA 初篩后呈陽性的患者進行跟蹤隨訪，結合實際情況對其病史進行了解，再根據病史進行分組，發現129 例患者中有23 例為一期梅毒患者，13 例為二期梅毒患者，4 例為三期梅毒患者，24例為隱性梅毒患者，57 例為治療后梅毒患者，8 例為非梅毒患者。詳見表2。

表2 初篩呈陽性的129 例患者的診斷分析

2.3 經TRUST 復測為陽性的43 份樣本的滴度檢測結果分析

對經TRUST 復測為陽性的43 份樣本進行滴度檢測，發現滴度值為1:1 ～1:64，統計發現其中一期梅毒、三期梅毒、隱性梅毒、治療后梅毒的TRUST 滴度均≤1:8，滴度偏低；二期梅毒的TRUST 滴度最高為1:64，滴度偏高。另有1 例非梅毒患者的TRUST 滴度為1:1。詳見表3。

表3 經TRUST 復測為陽性的43 份樣本的滴度檢測結果分析（例）

3 討論

梅毒由梅毒螺旋體感染所致，會對人體的多個器官、組織進行侵犯，從而嚴重影響機體功能，降低人們的身心健康程度。性接觸傳播、母嬰傳播和血液制品傳播是梅毒的主要傳播途徑。本病不僅危害人類的健康及生命安全，還帶來了嚴重的社會公共衛生問題[4]。據世界衛生組織統計，近年來梅毒在世界的流行范圍越來越廣，每年約有1200 萬新發病例，患病率逐年遞增，加之抗生素的不合理使用，導致部分患者出現了隱性梅毒，在臨床診斷中誤診、漏診的發生率較高，不利于患者的早期治療與疾病轉歸[4]。臨床針對人體感染梅毒螺旋體后外周血清出現的兩種抗體（非特異性抗體與特異性抗體），將梅毒的血清學檢測方法分為兩類：非梅毒螺旋體抗原血清試驗與梅毒特異性抗體檢測。其中，非梅毒螺旋體抗原血清試驗包括TRUST、性病實驗室試驗（VDRL），是以牛心肌磷脂為抗原，對待檢樣本中是否出現抗心磷脂抗體進行檢測。梅毒特異性抗體檢測包括TRUST、TPPA，以梅毒螺旋體的成分為抗原，對待檢樣本中的抗梅毒螺旋體抗體進行檢測。TPPA 被美國疾病預防控制中心確定為梅毒的確診方法，其使用的是雙抗體夾心法，具有較高的敏感性與特異性，是目前國內外公認的梅毒血清確認試驗。當人體感染梅毒螺旋體后，體內會終身有抗體存在，采用TPPA 對患者進行檢測不會受到治療方法、病情發展及干預措施等因素的影響，檢測結果有良好的穩定性，檢測出的假陽性結果較少，對各期梅毒的檢測均具有良好的效果。然而，該方法自動化檢測的難度較大，操作步驟繁瑣，所用時間較長，無法儲存原始數據，需檢驗人員用肉眼進行觀察，當樣本數量較多時，難以實現批量篩查，不能達到快速檢測的目的，這也是該方法在梅毒鑒別診斷中未能得到推廣應用的原因。以往臨床對輸血者進行梅毒篩查時常用的篩查模式為正向篩查流程，即先對血液樣本用非梅毒螺旋體抗原血清試驗進行初篩，對初篩呈陽性的樣本再使用梅毒螺旋體抗原血清試驗進行復測[5]。這種方式適合樣本量較少時的篩查工作。近年來，臨床進行梅毒篩查的數量大幅度增加，正向篩查流程已無法滿足當前的醫療需求，臨床亟需尋找一種自動化、高通量的篩查模式[6]?；诖?，國內外醫學研究者嘗試進行梅毒篩查時使用梅毒血清學逆向程序，即先使用CLIA 對梅毒螺旋體特異性抗體進行初篩，然后再使用梅毒螺旋體非特異性抗體試驗對陽性樣本進行復測，以評估梅毒的活動性[7]。

本次研究中，9012 份樣本經CLIA 檢測發現有129 份（1.43%）呈陽性。CLIA 具有操作簡便、自動化程度高、檢測時間短、重復性好、高通量等優點。該方法雖然可用于梅毒的診斷，但其檢測結果呈陽性只能說明患者正處于梅毒感染期或有梅毒感染史，并不能對梅毒的活動情況進行判斷，其檢測灰區的假陰性結果與S/CO 的假陽性結果并不能作為臨床治療依據。因此，為提高梅毒篩查效率，還需對經CLIA 檢測呈陽性的樣本進行復測[8]。本研究中對129 例經CLIA 初篩后呈陽性的患者進行跟蹤隨訪，發現其中有23 例為一期梅毒患者，13 例為二期梅毒患者，4例為三期梅毒患者，24 例為隱性梅毒患者，57 例為治療后梅毒患者，8 例為非梅毒患者。TRUST 是檢測梅毒非特異性抗體的常用方法?；颊吒腥久范韭菪w后釋放出的物質而產生的自身抗體即為梅毒非特異性抗體，又稱反應素，其出現時間比梅毒特異性抗體晚2 周左右。因此，在疾病初期，患者的檢測結果通常會呈陰性。梅毒在非活動期或治療期間，非特異性抗體會轉陰或下降，因此TRUST 對一期梅毒、三期梅毒的檢出率較低，易出現假陰性結果[9]。TPPA 為梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗，是以蒼白密螺旋體為抗原，對血清中的抗螺旋體免疫球蛋白M（IgM）和/或免疫球蛋白G（IgG）抗體進行檢測，其特異性和敏感性均較高，但在操作過程中易受到手工操作、血清稀釋和U 型板清潔度較低等因素的影響而對檢測結果造成干擾，因此無法對大批量的血清樣本進行檢測，加上無法保留原始數據，令其臨床使用價值受到了一定的影響[10]。本次研究中，在129 份初篩呈陽性的樣本中，TRUST、TPPA 復測呈陽性的概率分別為34.11%（44/129）、93.80%（121/129）， 兩 種 檢測方法的陽性率經統計學分析發現差異有統計學意義（P＜0.05）。說明TPPA 的敏感性、特異性均較TRUST 高。由于方法性能、診斷性能存在局限性，因此任何一種梅毒血清學檢測方法都無法達到梅毒診斷的需求。歐盟疾控中心推薦先使用梅毒螺旋體抗原血清試驗進行初篩，并以另一種梅毒螺旋體抗原血清試驗作為確證，這種方式不包括非梅毒螺旋體抗原血清試驗和滴度檢測。TPPA 因具有較高的敏感性和特異性，目前已成為臨床公認的梅毒抗體檢測的確證方法。TRUST 檢測呈陽性的樣本需要進行滴度檢測，以便對梅毒的活動性及患者的治療效果、預后進行判斷。本研究結果顯示，一期梅毒、三期梅毒、隱性梅毒、治療后梅毒的TRUST 滴度均≤1:8，滴度偏低；二期梅毒的TRUST 滴度最高為1:64，滴度偏高；另有1 例非梅毒患者的TRUST 滴度較低，為1:1，可能與血清固定或因懷孕而產生生物學假陽性有關。

綜上所述，與正向梅毒篩查流程相比，逆向梅毒篩查流程更適合樣本量大的梅毒篩查工作，不僅能夠提高篩查的準確性、敏感性和特異性，還可降低假陰性的發生率。對于CLIA、TRUST 檢測呈陽性但抗體水平較低的樣本，為防止生物學假陽性的出現，建議對其行確證試驗。