抗β2-GP1、HCY、ACA、LAC聯合檢測診斷不良妊娠結局的價值分析

片靜 劉城

不良妊娠結局主要包括流產、死胎、早產、低出生體質量兒、巨大兒、先天性異常、死產及新生兒死亡等，會對孕產婦身心健康狀態造成嚴重損害[1]。中國是出生缺陷的多發地區，每年有80 萬～120 萬例新生兒有出生缺陷，主要包括唇腭裂、先天性心臟病、無腦兒、神經管缺陷和染色體異常等[2]。出生缺陷的增多可能會增加不良妊娠結局發生風險，增加胎兒、新生兒死亡率，是導致圍產兒死亡的重要因素。長期以來，影像學檢查是臨床診斷不良妊娠的最常用方法，但不良妊娠孕產婦臨床表現與影像學特征改變時間通常具有滯后性，部分患者癥狀或影像學特征出現時病情已較為嚴重，嚴重影響臨床診治與母嬰預后結局，具有一定局限性[3]。近年來，隨著臨床檢測技術的發展，生物學指標診斷不良妊娠結局的價值受到了臨床研究認可，其中血清同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）、抗心磷脂抗體（anticardiolipin antibody，ACA）、抗β2糖 蛋 白1（anti-β2-glycoprotein 1 antibody， 抗β2-GP1） 抗 體、 狼 瘡 抗 凝 物（lupus anticoagulant，LAC）被認為與不良妊娠結局的發生與發展有關[3-4]。本研究對176 例分娩孕婦進行ACA、LAC、HCY、抗β2-GP1 抗體檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年10 月—2020 年10 月泰安市婦幼保健院176例接受產前疾病篩查的孕產婦作為研究對象。納入標準：（1）均接受ACA、LAC、HCY、抗β2-GP1 抗體檢測。（2）孕產婦均知情同意。（3）年齡＞18 歲。（4）受檢者均可正常溝通。（5）單胎妊娠。排除標準：（1）有流產史產婦。（2）并發其他婦科疾病者。（3）中途自行退出者。（4）意識不清楚、不合作者。（5）合并遺傳性疾病者。根據妊娠結局將176 例孕產婦分為病例組（96 例，不良妊娠結局）和對照組（80 例，正常分娩）。病例組年齡20 ～36 歲，平均（28.71±2.44）歲；身體質量指數19 ～26 kg/m2，平均（21.63±1.84）kg/m2；初產婦59 例（61.46%），經產婦37 例（38.54%）。對照組年齡20 ～35 歲，平均（28.18±2.26）歲；身體質量指數19 ～25 kg/m2，平均（21.41±1.73）kg/m2；初產婦51例（63.75%），經產婦29 例（36.25%）。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經泰安市婦幼保健院醫學倫理委員會批準（審批號2018003）。

1.2 方法

在妊娠14 ～27 周采集受檢者2 mL 肘靜脈血，于3 000/min 離心15 min，分離上清液，冷藏于低溫冰箱中待檢，通過酶聯免疫吸附法檢驗抗心磷脂抗體-免疫球蛋白G（ACA-IgG）、抗心磷脂抗體-免疫球蛋白A（ACA-IgA）、抗心磷脂抗體-免疫球蛋白M（ACA-IgM）等血清ACA 3 項。試劑盒購于德國歐蒙公司，血清ACA 取ACA-IgG、ACA-IgA、ACA-IgM 之和的均值。結果判定：待檢血清和陰性對照吸光度比值≥2.1 則為陽性，＜2.1 則為陰性；ACA 3 項中至少有1 項為陽性，ACA 則為陽性，正常參考范圍：ACA-IgG ＜3.5 GPLU/L、ACA-IgA ＜1.5 APLU/L、ACA-IgM＜1.2 MPLU/L[5]。同時通過酶聯免疫吸附法檢驗抗β2-GP1 抗體-IgM、IgG、IgA 等血清抗β2-GP1 抗體3 項，以正常對照組為標準進行3 項陽性判定，≤該值為陰性，＞該值為陽性；抗β2-GP1 抗體3 項中至少有1項為陽性，反之則為陽性，正常參考范圍：抗β2-GP1抗 體 -I g M ≤ 1 5 U/m L、I g G ≤ 2 0 U/m L、I g A ≤1 5 U/m L， 血清抗β2-GP1 抗體取-IgM、IgG、IgA 之和的均值[6]。通過酶聯免疫吸附法檢驗血清HCY 濃度，其中HCY ＞10 mmol/L 為陽性，HCY ≤10 mmol/L為陰性[7]。使用自動血凝儀（法國DIAGNOSTICA STAGO公司，型號STAGO STA-R Evolution）檢驗LAC 水平，采用原裝配套質控品與試劑，LAC 確診試驗與篩選試驗應用血漿蜂蛇毒時間進行，得出L A C 比值，其中比值＜1.2 m m o l/L 為陰性，≥1.2 mmol/L 為陽性[8]。所有孕產婦均進行聯合檢測，并且根據聯合檢測及最終妊娠結果進行分組，均隨訪至分娩結束，以孕產婦最終分娩結果作為不良妊娠結局的診斷金標準。不良妊娠結局包括流產、死胎、早產、低出生體質量兒、巨大兒、先天性異常、死產及新生兒死亡等，按圍生兒生存、死亡情況，細分為圍生兒死亡組（流產、死胎、死產、新生兒死亡）和圍生兒健康組（早產、低出生體質量兒、巨大兒、先天性異常）。

1.3 統計學方法

采用SPSS 25.0 統計學軟件處理數據。計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線分析ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 在不良妊娠結局診斷中的應用。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體水平比較

病例組孕產婦血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 病例組與對照組血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體水平比較 （±s）

表1 病例組與對照組血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體水平比較 （±s）

組別 例數 ACA（mIU/mL） HCY（mmol/L） LAC（mmol/L） 抗β2-GP1 抗體（U/mL）病例組 96 2.82±0.47 12.72±2.35 1.39±0.16 5.56±0.81對照組 80 1.48±0.69 9.24±2.26 1.03±0.12 3.18±0.56 t 值 - 15.253 9.953 16.603 22.221 P 值 - ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 與不良妊娠結局的關系分析

觀察記錄病例組產婦的妊娠結局，記錄至產后1 個月內的新生兒死亡病例數，其中死亡14 例（14.58%）、健康存活82 例（85.42%）。圍生兒死亡組和圍生兒健康組的產婦年齡、身體質量指數、生產次數比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。圍生兒死亡組ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 檢測值高于圍生兒健康組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 病例組的基線資料及指標水平比較

2.3 ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 在不良妊娠結局預測中的效能分析

以妊娠結局為自變量（圍生兒死亡＝0，圍生兒健康＝1），以ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 在表達水平為因變量，繪制ROC 曲線，見圖1。結果顯示，ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 聯合檢測不良妊娠結局的AUC（0.882，95%CI：0.771 ～0.993）最大，靈敏度、特異度分別為92.86%、93.90%（P＜0.05）。見表3。

表3 ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 在不良妊娠結局預測中的效能分析

圖1 ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 在不良妊娠結局預測中的ROC 圖

3 討論

不良妊娠主要指孕產婦在妊娠后，無法生產功能和外觀正常的子代，為臨床多發婦科病，多表現為流產、生長遲緩、胚胎停育、發育遲緩、死胎死產，可對母嬰造成嚴重威脅。導致流產的因素很多，其中半數以上的原因不能查明?？沽字贵w（antiphospholipid antibody，APA）是一組與抗磷脂有關的抗體，APA 為自身免疫抗體的組合，其中ACA、LAC、抗β2-GP1 抗體主要成員。有研究顯示，妊娠期的許多疾病均與APA 相關，APA 異常多見于妊娠不良患者，易出現死胎、習慣性流產、妊娠期高血壓、早產等不良妊娠結局[9]。因此，分析血清ACA、LAC、HCY、抗β2-GP1 抗體聯合檢驗在不良妊娠結局診斷中的價值，有利于提高不良妊娠檢測的準確性，針對性地制訂圍孕期保健方案，為妊娠結局的改善提供一定的數據支持。

抗β2-GP1 抗體作為單鏈糖蛋白之一，主要包括抗β2-GP1 抗 體-IgM、抗β2-GP1 抗 體-IgG，抗β2-GP1抗體-IgA，在血栓形成過程中水平顯著升高。有報道指出，抗β2-GP1 抗體在子宮內的表達能夠抑制血小板凝血酶原活性與內源性凝聚通路，協同宮內血栓的形成，最終導致不良妊娠結局[10]。ACA 多存在于組織細胞膜和血細胞中，是APA 的主要抗體，一般情況下ACA-IgM、ACAIgG、ACA-IgA 等ACA 亞型不會被免疫系統識別，但在身體異常情況下磷脂抗原可對人體造成一定的刺激，致使血清中ACA 水平升高，ACA 高表達可造成血管內皮受損，致使微血管栓形成，導致不良妊娠結局發生[11]。本研究中，病例組孕產婦的血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體水平高于對照組，圍生兒死亡組ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 檢測值高于圍生兒健康組。這表明血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體水平與不良妊娠結局的發生、發展存在關聯，能夠預測孕產婦的不良妊娠結局風險。陳航華等[12]研究顯示，ACA 診斷妊娠結局的效果滿意，ACA在不良妊娠結局中呈高表達，與本研究結果基本一致。CARMO-PEREIRA 等[13]研究也指出，抗β2-GP1 抗體和抗心磷脂對于妊娠并發癥具有較高的預測價值，妊娠發病患者的早產、胎兒生長受限、胎盤早剝、圍生兒死亡、死胎發生率與正常產婦相比顯著增加，并且ACA、抗β2-GP1 抗體水平高于正常產婦，其結果和本研究相似。本研究結果還顯示，ROC 曲線顯示，ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 聯合檢測不良妊娠結局的AUC（0.882，95%CI：0.771 ～0.993）最大。提示ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 表達水平變化可能與孕產婦的妊娠狀態及胎兒生長發育情況有關。分析原因如下，HCY 是一種蛋氨酸代謝產物，高水平的HCY 可破壞血管內皮細胞的正常功能，造成凝血功能和纖溶系統紊亂，對正常代謝功能造成不良影響[14]。同時可引發胎盤微血栓形成，損害胎盤正常的血液循環功能，致使宮內窒息與流產等不良妊娠結局出現。LAC 是一種異質性免疫球蛋白，作為一種IgM 與IgG 抗磷脂抗體，能增加磷脂依賴性凝血時間[15]。高水平的LAC 有血栓形成傾向，可累及胎盤血管與蛻膜，出現嚴重的血管梗死與纖維變性。并且，LAC 可導致螺旋動脈血管病變、絨毛間血栓形成與滋養層受損，從而損害胎盤功能，造成死產、自然流產、發育遲緩等。單用血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 抗體預測不良妊娠結局的價值不高，4 項聯合檢測，能夠盡可能排除自身免疫外的其他危險因素，早期鑒別病理妊娠，提高不良妊娠結局的預測價值，為產前干預提供指導意見，實現優生，提高人口素質。文章中體現了《產前診斷實驗室質量指標專家共識》[16]的臨床參考或執行標準，以期為降低出生缺陷提供參考。

綜上所述，血清ACA、HCY、LAC、抗β2-GP1 在不良妊娠結局中呈高表達，可以作為預測不良妊娠結局發生的指標，對于有效預警不良妊娠結局，早期予以干預等有重要的意義。因此次研究樣本量較小，且來源有限，需進一步擴大樣本，完善實驗方法，進一步證實。