化學發光法以及酶聯免疫法在乙型肝炎患者乙肝五項的應用檢驗價值及效果對比

王蘭蘭

（鶴壁市第三人民醫院，河南 鶴壁 458030）

乙型肝炎是一種傳染性疾病，乙型肝炎病毒感染是誘發疾病的主要原因［1］。該病屬于世界性疾病，主要通過血液、性接觸、血液制品、母嬰渠道傳播，發展中國家的乙型肝炎發病率更高［2］。有調查數據［3］表明，全球六十億人中有一半生活在乙型肝炎病毒高流行區域，有近三分之一人被確診乙型肝炎病毒感染，其中3-4 億人被確診乙型肝炎病毒慢性感染，每年有100萬人因乙型肝炎病毒感染誘發的肝功能衰竭、原發性肝癌、肝硬化死亡。我國屬于乙型肝炎高發地區，有1.2 億人屬于乙型肝炎病毒攜帶者，有1000 萬人確診乙型肝炎，每年患率是7%。早期診斷乙型肝炎，積極實施有效治療措施，控制乙型肝炎病情，遏制乙型肝炎病毒繼續復制繁殖，是改善疾病癥狀，預防并發癥的主要原因。若患者疑似乙型肝炎，因第一時間前往醫院檢查，最大程度上消除疾病對患者生命健康及生命質量造成的影響。此次研究以疑似乙型肝炎患者154 例為對象，探討疾病診斷中應用化學發光法、酶聯免疫法檢驗的價值，報告內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2020 年1 月～2022 年3 月，選取154 例疑似乙型肝炎患者為研究對象。男93 例，女61 例，平均年齡（48.75±11.34）歲。納入標準：患者具有乙肝癥狀表現，或和乙肝患者有密切接觸；患者了解此次檢驗內容與檢驗意義，全面配合醫院進行檢驗準備，提供高質量檢驗血樣；患者知情此次研究，自愿參加本次研究，在同意書簽字。排除標準：已經確診乙型肝炎，并在接受對癥治療患者；合并原發性血液疾病，比如惡性貧血等；檢驗前有用藥、劇烈運動等一系列會對檢驗結果造成影響的行為。

1.2 方法

提前向受檢者闡述檢查注意事項，要求受檢者常規禁食，持續時間大于8h。次日清晨，用紅色無抗凝劑普通管抽取兩管靜脈血液，每管5mL，在37℃水浴箱進行1h 水浴，直至血液自然凝固后離心，速度3500r/min，離心10 分鐘。留取兩份上層血清，血清置入干燥清潔試管，并標記好編號。若血清在48h 內檢測，則置入2℃-8℃冰箱中保存。若血清在48h 后檢測，則置入-20℃冰箱中冷凍保存。

化學發光法檢驗：檢驗原理是雙抗體夾心法原理。用抗-HBs 抗體包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記的抗-11Bs 抗體制備酶結合物。通過免疫反應形成抗體- 抗原- 抗體- 酶復合物，該復合物催化發光底物發出光子，發光強度與HBSAg 含量成正比檢測：將樣本容器放置在儀器配套樣本架中。裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。選擇“運行”開始測試，系統自動進行試驗操作安圖A2000plus 全自動儀器完成HBSAg 濃度檢測。

酶聯免疫法檢驗：采用抗-HBs 包被反應板，添加待測樣本。進行溫育處理，加人抗-HBS-HRP。若樣本中有HBSAg 存在，該HBSAg 會和包被抗-HBs 進行有效結合并和抗-HBS-HRP 結臺并形成抗-HBS-HBSAg- 抗-HBSHRP 復合物，添加TMB 底物會有顯色反應。試劑從冰箱拿出，并置入室溫平衡30min 靜置。配制工作濃度洗滌液（以純化水做25 倍稀釋，量取480mL純化水，加人20mL洗滌液充分混勾后，成500mL工作濃度洗滌液，待用。結合檢驗標本數量，選取一定量反應板條。加75uL 待測樣本，另加陰性對照3 孔，陽性對照1孔。反應板覆蓋封板紙，將反應板置入37°C 水浴箱中，持續孵育1 小時。取出反應板，將封片撕掉，加酶結合物50uL，在微孔振蕩器中進行持續10s 的震蕩操作，之后再次育30 分鐘，然后用洗板板洗滌，持續5 次，加AB 顯色劑各50ul，再次震蕩10s，孵育30 分鐘，在所有孔加50uL 終止液，之后應用酶標儀450/630 雙波長讀取結果。

1.3 觀察指標

檢驗結果：包含三項檢驗方法（酶聯免疫法、化學發光法、熒光定量PCR 法）的陽性率、陰性率；乙肝五項指標陽性率：包含HBsAg、HBsAb、乙型肝炎e 抗原（HBeAg）、乙型肝炎e 抗體（HBeAb）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb），統計五項指標的陽性率。

1.4 統計學方法

所獲取研究數據錄入Excel 表格，并實施數據分析。

2 結果

2.1 檢驗結果比較（見表1）

表1 酶聯免疫法、化學發光法、熒光定量PCR 法的檢驗結果比較 例

2.2 乙肝五項指標陽性率比較（見表2）

表2 酶聯免疫法、化學發光法乙肝五項指標陽性率比較（n=154 例，n/%）

3 討論

臨床多通過放射免疫分析法、酶聯免疫法分析、化學發光法分析、熒光定量PCR 法分析等檢測乙型肝炎，其中熒光定量PCR 法屬于金標準，檢驗準確性高，但檢驗操作復雜，但檢測成本過高，不能作為首選篩查方法。酶聯免疫法是近年來比較推崇的一種檢驗方法，操作簡單快速，可迅速獲取結果，早期確診患者疾病，所以在臨床廣泛應用。伴隨著酶聯免疫法在臨床的推廣普及，酶聯免疫法的檢驗缺陷逐步暴露出來，主要體現在標本待檢物質濃度超標后會因鉤狀效應顯現象誘發假陰性結果，繼而導致漏檢。酶聯免疫法是通過酶完成檢驗，結合顏色深淺達到判斷檢驗結果的目的，若抗原/抗體和酶結合物濃度較低時，吸光度太小，也會導致假陰性現象［4］。

本文研究結果表明，與酶聯免疫法比較，化學發光法的陽性率更大，化學發光法HBsAg、HBcAb 陽性率更大，可見化學發光法的檢驗價值大于酶聯免疫法。原因分析如下：化學發光法通過將高考靈敏度化學發光測定技術和高特異性免疫反應進行有效結合在酶促下通過魯米諾發出光子信號，促使抗原抗體反應放大，可用于各種抗原、抗體、脂肪酸以及酶等檢驗分析［5］。化學發光法屬于最新免疫分析技術，更是現今最先進的標記免疫檢驗技術，具有較高的精確度、敏感度，可完全代替放射免疫分析法，淘汰酶聯免疫法。化學發光法的發光免疫試劑有效時間長達一年，明顯長于放射免疫試劑的1 月有效期；試劑不會造成污染，可保護環境，安全性高；發光強度及測定物質濃度的線性關系達到0-105 范圍；敏感度范圍達到10-19mol/L 以上。

綜上可知，酶聯免疫法、化學發光法均可在乙型肝炎乙肝五項檢驗中應用，但后者的乙型肝炎檢驗準確性、敏感度及特異度更大，乙肝五項陽性率更大。