281例蛋白尿患者血清的ANCA抗體譜檢測(cè)陽(yáng)性率觀察*

張秀琴,白雪晶,馮磊,楊美蘭,楊宇溪

(玉溪市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科,云南 玉溪 653100)

蛋白尿是指尿蛋白試驗(yàn)呈陽(yáng)性,或定量試驗(yàn)>100mg/L或>150 mg/24h尿。抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(antineutrophil cytoplasimc antibody,ANCA)是一組針對(duì)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞許多胞漿抗原所產(chǎn)生的自身抗體,髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和蛋白酶3(proteinase 3,PR3)是ANCA最主要的靶抗原。ANCA相關(guān)性血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)是指通過(guò)ANCA為媒介進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)并以壞死性小血管炎為特征的一組疾病[1,2],發(fā)病機(jī)制和病因仍不清楚,可累及全身多器官。臨床表明[3],腎臟和肺是最常見(jiàn)的受損器官,其中以腎臟受累較多且進(jìn)展迅速,但因臨床出現(xiàn)腎損害表現(xiàn)時(shí)常常已是比較晚期,甚至為不可逆的終末期腎病(end-stage renal disease,ESRD)。而尿蛋白是各種原發(fā)性疾病或繼發(fā)性腎臟疾病的主要臨床表現(xiàn)和診斷指標(biāo),出現(xiàn)蛋白尿也是系統(tǒng)性小血管炎較早期主要的臨床表現(xiàn)之一,通過(guò)檢測(cè)ANCA即可以對(duì)該疾病進(jìn)行早診斷早治療[4]。鑒于目前國(guó)內(nèi)對(duì)ANCA陽(yáng)性引起的蛋白尿研究甚少,本文將對(duì)蛋白尿患者的ANCA、抗MPO和抗PR3陽(yáng)性率及臨床應(yīng)用作進(jìn)一步的探討,以提高對(duì)疾病的早期診斷并時(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)病情活動(dòng),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 一般資料

2014年5月-2020年7月本院收集蛋白尿患者281例(男150例,女131例)、年齡為10～79歲,平均43.97歲;其中男性150例,年齡為10～79歲,平均45.92歲;女性131例,年齡為12～78歲,平均41.75歲。905例自身免疫病(Autoimmune diseases,AID)分別為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)661例,干燥綜合征(Sjogren’s syndrome SS)164例,系統(tǒng)性硬化癥(Systemic sclerosis,SSC)65例,自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)15例,其中男163例,女742例,年齡13～79歲,平均44.55歲。健康對(duì)照組60例,均為健康體檢者,年齡19～68歲,平均45.69歲。

1.2 方法

1.2.1 抗MPO抗體和抗PR3抗體的定量檢測(cè)

(1)樣本、樣本稀釋液按1∶100配置,同時(shí)分MPO、PR3標(biāo)準(zhǔn)品,標(biāo)準(zhǔn)品為200RU/mL、20RU/mL、2RU/mL三個(gè)濃度差;(2)分別加三個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品、樣本各100uL,室溫(18～25℃)溫育30min;(3)加酶標(biāo)抗體100uL,室溫30min,洗板并加底物100uL,室溫避光15min,之后滴加100uL終止液;(4)450nm比色,參考波長(zhǎng)620～650nm,分別以3份標(biāo)準(zhǔn)品血清的濃度和其吸光度以點(diǎn)對(duì)點(diǎn)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線使用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)方式計(jì)算患者樣本中的抗體濃度。

1.2.2 ANCA總抗體、特異性抗體c-ANCN、p-ANCN的檢測(cè)

應(yīng)用間接免疫熒光法進(jìn)行檢測(cè)。生物薄片上分別覆蓋有乙醇、甲醛固定的中性粒細(xì)胞,HeP-2細(xì)胞等三種基質(zhì)片組成,可排除ANA干擾,以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,操作嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 281例蛋白尿患者ANCN總抗體檢測(cè)結(jié)果

蛋白尿患者檢出ANCA陽(yáng)性有16例,陽(yáng)性率為5.69%,905例自身免疫病組檢出ANCA陽(yáng)性39例,陽(yáng)性率為4.31%,2組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05,見(jiàn)表1。

表1 281例蛋白尿及905例自身免疫病患者檢測(cè)ANCA結(jié)果[n(%)]

2.2 281例蛋白尿患者、905例自身免疫病PR3抗體、MPO抗體、c-ANCA、p-ANCA檢測(cè)結(jié)果,見(jiàn)表2。

表2 281例蛋白尿患者、905例自身免疫病、健康對(duì)照組檢測(cè)ANCNS結(jié)果[n(%)]

3 討論

正常人由于腎小球?yàn)V過(guò)膜作用和腎小管重吸收作用,尿中蛋白質(zhì)含量很少,若含量增加,尿常規(guī)既可測(cè)出,稱蛋白尿。尿蛋白大于3.5g/24h時(shí)稱大量蛋白尿[5]。AAV發(fā)生腎損傷時(shí)可出現(xiàn)蛋白尿、腎性高血壓、壞死性腎小球腎炎等,其中蛋白尿就是AAV常見(jiàn)的臨床癥狀。ANCA主要分為胞漿型(c-ANCA)和核周型(p-ANCA),前者的主要抗原成分為PR3,后者主要是MPO。ANCA抗體可在多種疾病中檢出,如AAV、炎癥性腸病(inflammatory bowel disease, IBD)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)等自身免疫性疾病,特別是AAV發(fā)生腎損傷時(shí)檢出。目前認(rèn)為AAV的發(fā)生與自身免疫異常及遺傳有關(guān)。AAV是一組多臟器損害的自身免疫性疾病,其基本病理改變?yōu)閴乃佬孕⊙苎譡6],研究統(tǒng)計(jì),AAV患者的腎臟受累占比90.71%,肺受累占比60.60%[7]。

本研究示281例蛋白尿患者總ANCA陽(yáng)性16例,陽(yáng)性率為5.69%,905例AID患者ANCA陽(yáng)性39例,陽(yáng)性率4.31%,2組陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說(shuō)明ANCA并非AAV特有,在多種自身免疫性疾病與尿蛋白患者中均可以檢出。從表2看出,蛋白尿的ANCA 陽(yáng)性率(5.69%)遠(yuǎn)高于SS(2.44%)、SSC(3.08%)、AIH(0.00%)及健康對(duì)照組(0.00%),略高于SLE(4.99%)。蛋白尿是腎臟疾病的最常見(jiàn)表現(xiàn),大部分原發(fā)或繼發(fā)腎臟疾病早期就出現(xiàn)蛋白尿,ANCA檢測(cè)對(duì)蛋白尿疾病的篩查、病因及疾病的診斷十分必要。

281例蛋白尿患者ANCN陽(yáng)性主要表現(xiàn)為P-ANCN和PR3,陽(yáng)性率分別為4.62%、1.07%;其次是C-ANCA和MPO陽(yáng)性,陽(yáng)性率為1.07%、0.71%;AID患者ANCA陽(yáng)性39例,其中SLE、SS、SSC、AIH陽(yáng)性率分別為3.03%、1.83%、1.54%、0.00%,均以p-ANCN為主,雖然陽(yáng)性率不高,但有較好特異性和靈敏度,因此ANCA可作為腎臟損傷時(shí)的必要檢測(cè)項(xiàng)目。無(wú)論是尿蛋白還是AID患者,P-ANCN陽(yáng)性率和抗MPO陽(yáng)性率均高于c-ANCA和PR3,這與伍婷等[7]報(bào)道的AAV臨床表現(xiàn)類似。表2中,ANCA在其他AID中陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于健康對(duì)照組,因ANCA既是診斷AAV特異的血清學(xué)AID標(biāo)志物,其本身又有致病作用,本文檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]。ANCA 最開(kāi)始是在AAV患者中發(fā)現(xiàn),但隨著深入研究,發(fā)現(xiàn)與之相關(guān)疾病越來(lái)越多。ANCA陽(yáng)性并不一定意味著血管炎,也可出現(xiàn)在非血管炎性疾病包括肺部炎癥性疾病、IBD和自身免疫性肝膽疾病、RA及部分感染性疾病中檢出,然而ANCA相關(guān)疾病的特異性靶抗原并非僅為PR3和MPO,而是其他特異性抗原成份。現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)不同的抗原抗體系統(tǒng)與不同臨床疾病相關(guān),除抗PR3和抗MPO以外,其他特異性自身抗體多與臨床疾病的病變活動(dòng)無(wú)關(guān),其發(fā)生的原因和作用均不十分清楚[9]。抗PR3和抗MPO參與了小血管的發(fā)病機(jī)制,兩者在血管炎中的分別陽(yáng)性率和共同陽(yáng)性率可能會(huì)有不同的臨床意義,抗PR3和抗MPO抗體可以激活中性粒細(xì)胞并導(dǎo)致脫顆粒反應(yīng),使中性粒細(xì)胞釋放大量有害的蛋白水解酶和氧自由基,從而導(dǎo)致小血管壁的損害,造成血管炎的發(fā)生發(fā)展,血管炎的產(chǎn)生導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)率增加和腎小管的重吸收降低,使小分子量的蛋白質(zhì)從腎臟濾出,從而產(chǎn)生了蛋白尿[10]。因此ANCA檢測(cè)是自身免疫性疾病重要的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目,也可作為血管炎腎臟受損所致蛋白尿患者的一個(gè)常規(guī)篩查項(xiàng)目;故ANCA、抗PR3、抗MPO抗體的檢測(cè)不僅對(duì)系統(tǒng)性血管炎的診斷、分型具有十分重要的意義,對(duì)不明原因所致的蛋白尿也具有重要意義[11]。

綜上所述,ANCA檢測(cè)已成為臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目,臨床上出現(xiàn)不明原因的蛋白尿的患者應(yīng)盡早檢測(cè)ANCA,除此之外,急性腎小球腎炎、特別是快速進(jìn)展的腎小球腎炎、肺-腎出血綜合證都應(yīng)及時(shí)檢測(cè)ANCA,以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療,有利于提高患者的生存率及生活質(zhì)量。