γ-聚谷氨酸的制備及其酪氨酸酶抑制活性研究

李 想,吳金芳,韓冠英*

1錦州醫科大學藥學院,錦州 121000;2山東豐金生物醫藥有限公司,煙臺 264000

均聚氨基酸一類的高分子聚合物具有生物學功能廣泛、生物相容性和分子量分布分散等特性。目前通過微生物得到的均聚氨基酸主要包括三種:聚谷氨酸(聚-γ-谷氨酸,poly-γ-glutamic acid,γ-PGA)、ε-聚賴氨酸(ε-poly lysine,ε-PL)和藻青素(cyanophycin)[1]。γ-PGA作為其中的一種,同樣具有其優良的生物學特性。從1913年起,研究人員相繼從納豆食品的黏液中和枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)、巨大芽孢桿菌(B.megaterium)以及炭疽芽孢桿菌(B.anthracis)等的發酵培養基中分離得到了γ-PGA[2,3]。γ-PGA的構象結構隨溶液的pH值、濃度和離子強度變化而顯著變化。由枯草芽孢桿菌生產γ-PGA在酸性溶液中具有平行的β-折疊結構,在接近中性時具有無規則卷曲結構,在堿性環境中具有伸展的隨機結構[4]。

γ-PGA成品為白色無味粉末狀物質,其分子量在100～10 000 kDa之間,相當于50～50 000個左右的谷氨酸單體[5]。γ-PGA及其衍生物在諸多領域具廣泛的研究及應用前景。如作為食品保鮮劑[6]、化妝品補水保濕成分[7]、藥物緩釋載體[8]、重金屬吸附劑及用于水處理的絮凝劑[9]等。2013年,有研究學者發現,γ-PGA通過降低B16細胞內活性氧和一氧化氮水平,提高過氧化氫酶活性,抑制Forsklin誘導的酪氨酸酶活性和黑素生成。這是首次報道γ-PGA的抗黑素化作用。

分子量是聚合物的重要特征參數,分子量的大小決定其應用領域和應用效果[10]。因此,為了擴展γ-PGA的應用范圍制備不同分子量γ-PGA,并研究不同分子量之間的活性差異具有重要意義。目前,微生物發酵法是常用的γ-PGA發酵方法。采用該法制備所得的γ-PGA分子量及產量受產生菌的影響。根據發酵過程中是否添加谷氨酸,將γ-PGA的生產菌株分為谷氨酸依賴性菌株和非谷氨酸依賴性菌株兩類。有研究表明采用谷氨酸依賴型菌株作為產生菌,γ-PGA產量更高[11]。因此,本文以枯草芽孢桿菌為發酵菌株,通過微生物發酵法生產γ-PGA。結合化學降解手段制備了五組不同分子量的γ-PGA,并對其胞內胞外抑制酪氨酸酶活性進行了研究。為不同分子量的γ-PGA作為美白劑在化妝品領域的應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis),山東豐金生物醫藥有限公司提供;酵母提取物(yeast extract,YE,100%,批號4345161-02,OXIOD);谷氨酸鈉(純度99%,批號C13501406,上海Macklin公司);MgSO4·7H2O(AR,批號20200827,天津市永大化學試劑制造有限公司);K2HPO4(AR,批號B2109241,西隴科學股份有限公司);瓊脂粉(BR,批號20190706,青島海博生物技術有限公司);氯霉素(純度99%,批號No.821G046,北京Solarbio公司);酪氨酸酶(500 units/mg,批號C14384601,上海Macklin公司);Na2SO4(純度99%,批號L2117166,上海Aladdin公司);左旋多巴(純度99%,批號C14100281,上海Macklin公司);L-酪氨酸(純度99%,批號C13364528,上海Macklin公司);B16-F10小鼠黑色素瘤細胞,中國科學院細胞庫;胎牛血清(批號P2104403,上海泰坦科技股份有限公司);DMEM培養基(批號2428676,美國Gibco公司);青霉素-鏈霉素雙抗(批號2441834,美國Gibco公司);PBS磷酸鹽緩沖液(AR,批號No.20220728,北京Solarbio公司);0.25%胰蛋白酶(批號No.20221009,北京Solarbio公司);MTT(純度99%,批號NO.530R058,美國Gibco公司);Triton X-100(純度98%,批號No.404R022JH,北京Solarbio公司);曲酸(純度99%,批號RH328769,北京Solarbio公司); 葡萄糖(AR,批號20150630,國藥集團);NaOH(AR,批號20211102,國藥集團);DMSO(AR,批號20220614,國藥集團);無水乙醇(AR,批號20210518,國藥集團)。

Vi-CELL XR型細胞計數儀(美國Beckman Coulter公司);超聲波細胞粉碎機(寧波新芝生物科技有限公司);酶標儀(美國Molecular-Devices公司);HPLC(美國Waters公司);凝膠滲透色譜儀(英國Malvern公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1γ-PGA發酵工藝

以枯草芽孢桿菌為產生菌,以一定比例配制固體、種子及發酵培養基,通過菌種的平板活化、液體種子搖瓶、液體發酵搖瓶,得到γ-PGA發酵液。通過無水乙醇沉淀后,經進一步純化除雜,最終得到固體γ-PGA。

1.2.2 培養基組分及培養方法

固體培養基:葡萄糖 25 g/L,谷氨酸鈉 10 g/L,YE 15 g/L,MgSO4·7H2O 0.25 g/L,K2HPO42 g/L,瓊脂 20 g/L;種子培養基:葡萄糖 25 g/L,谷氨酸鈉 10 g/L,YE 15 g/L,MgSO4·7H2O 0.25 g/L,K2HPO42 g/L;發酵培養基:葡萄糖 25 g/L,谷氨酸鈉 10 g/L,YE 15 g/L,MgSO4·7H2O 0.25 g/L,K2HPO42 g/L;pH 6.8～7.0;裝液量40%;滅菌條件:121 ℃高溫高壓濕熱滅菌20 min,其中葡萄糖需單獨滅菌,待滅菌完成后取出與其他成分混合均勻,在固體、種子及發酵培養基中分別加入氯霉素抗性至終濃度為10 μg/mL。

培養方法:按照“Z”字劃線法將菌種劃在固體培養基上,在37 ℃的生化培養箱中恒溫倒置培養14 h。挑單菌落至裝有種子培養基的搖瓶中,在37 ℃,200 r/min的培養條件下,恒溫振蕩培養18 h,達到對數生長期得到種子培養液。以5%的接種量將種子培養液接種至裝有發酵培養基的搖瓶中,相同培養條件下,接續恒溫振蕩培養24 h,得到γ-PGA發酵液。

1.2.3 產物純化與表征

1.2.3.1 產物純化

將γ-PGA粗品按照一定比例復溶于水溶液中,調節pH為5.0,以30 g/L加入活性炭攪拌混勻,50 ℃水浴保溫2 h,在1 000 r/min、20 min的條件下離心去除活性炭,經500目硅藻土、200目珍珠巖吸附除雜,再經0.45 μm濾膜過濾后,加入無水乙醇沉淀,4 ℃靜置過夜,去上清,加無水乙醇反復脫水2次后,過濾收集沉淀,60 ℃烘干至恒重,得到γ-PGA純品。

1.2.3.2 產物表征

參考Kambourova等[12]的方法,采用薄層色譜法,通過分析產物完全水解后的單體進行產物鑒別。精確稱取0.5 g干燥的γ-PGA純品,放入具塞試管中,然后加入10 mL 6 mol/L的HCl,振蕩使其充分混勻,密封,110 ℃水解24 h,待其冷卻后調pH至6.8,定容至100 mL,配制成5 mg/mL的樣品水解液。另外分別取0.5 g干燥的谷氨酸標準品和γ-PGA純品,用純化水充分溶解,定容至100 mL,配制成5 mg/mL的谷氨酸標準品溶液和樣品溶液。

本實驗中,采用酸性溶劑系統。展層劑的配置比例為正丁醇∶80%甲酸∶水=15∶3∶2(V/V/V)。在薄層層析硅膠板板上依次等距離點樣樣品溶液、谷氨酸標準溶液及樣品水解液,冷風吹干,反復點樣三次。展層50～60 min,以0.1%茚三酮-丙酮溶液做顯色劑均勻噴灑層析板,熱風吹干對比氨基酸斑點。

1.2.4γ-PGA產量測定

采用干重法測定產量,向等量的γ-PGA發酵液中,加入4倍體積無水乙醇沉淀,4 ℃靜置過夜后抽濾取沉淀,60 ℃烘干至恒重稱量,計算產量。

1.2.5γ-PGA純度測定

以Na2SO4作為流動相,以含量高于99% 的γ-PGA作為標準品,對不同含量γ-PGA標準溶液紫外吸收值進行檢測。在檢測柱溫為30 ℃,檢測波長為210 nm,流速為0.5 mL/min,進樣量20 μL的色譜條件下,采用高效液相色譜法測定,記錄峰面積,并根據標準曲線計算得到樣品溶液中γ-PGA的濃度(c),以質量分數表示的γ-PGA含量按照公式(1)計算。

(1)

式中,c:根據標準曲線計算得到的樣品溶液中γ-PGA的濃度,g/L;100:γ-PGA樣品溶解的體積,mL;m:精確稱取的γ-PGA樣品的質量,g。

1.2.6γ-PGA降解

γ-PGA的結構易受溫度和pH值的影響。因此,采用高溫酸降的方式降解γ-PGA。配制4%的γ-PGA水溶液調節pH值為3.0,將其置于90 ℃的水浴鍋中進行酸性條件下的高溫降解,分別降解15、30、45、60、75、90、105和120 min,降解結束后迅速冰浴使樣品冷卻至室溫,調pH至中性(6.8～7.2),加4倍無水乙醇,以500 r/min的轉速邊攪拌邊加醇,沉淀靜置2～4 h,棄上清后再加2倍無水乙醇進行脫水,過濾收集沉淀,于60 ℃烘干至恒重以除去乙醇殘留,收集沉淀樣品。

1.2.7γ-PGA分子量測定

以0.3 mol/L Na2SO4作為流動相,通過窄分布標準品獲取儀器常數,寬分布標準品驗證儀器常數。在檢測柱溫為30 ℃,流速為0.5 mL/min,進樣量100 μL的條件下通過檢測γ-PGA樣品在示差折光檢測器下的出峰時間,利用GPC測定γ-PGA樣品的分子量。

1.2.8 不同分子量γ-PGA胞外酪氨酸酶活性抑制率的測定

人體內各類色素分布情況是影響人體皮膚正常狀態的主要因素之一,其中黑色素的合成、分泌、轉移以及脫落對于皮膚狀態發揮著尤為重要的影響[13]。而酪氨酸酶是黑色素的合成途徑中的關鍵酶。酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)是一種活性中心包含3個組氨酸(His)殘基和2個Cu離子的多功能酶,廣泛存在于真菌、植物和動物中。它不僅可以氧化酪氨酸形成多巴,也可以繼續氧化多巴形成多巴醌。多巴醌是一種高活性的物質,它可以和氨基酸或蛋白質發生反應形成高分子復合物或褐色素,最終形成黑色素。在TYR參與催化反應過程中,兩步催化反應分別體現了酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活性。

1.2.8.1 胞外酪氨酸酶活性抑制率的測定

參考Wang[14]的方法。將5組不同分子量的γ-PGA用0.05 mol/L PBS緩沖液配成10 mg/mL的樣品溶液,酪氨酸酶提前溫浴5 min后,按照表1依次添加各組分,其中A1為空白背景組、A2為空白組、A3為樣品背景組、A4樣品組。28 ℃水浴恒溫10 min后,利用酶標儀測定其在475 nm處的吸光度值,酪氨酸酶的抑制率按照公式(2)進行計算。

表1 酪氨酸酶活性抑制率測定

(2)

1.2.8.2 胞外酪氨酸單酚酶抑制率測定

參考Chen等[15]的方法并稍做改動測定酪氨酸酶單酚酶抑制率。用0.05 mol/L PBS緩沖液將5組不同分子量的γ-PGA配成10 mg/mL的樣品溶液,采用200 μL的反應體系,酪氨酸酶溶液提前溫浴5 min后,按照表2依次加入除酪氨酸酶溶液以外的各組分,酶標儀恒溫28 ℃,加入酪氨酸酶溶液后立刻在475 nm處連續測定吸光度值直至穩定不變。其中(A4-A3)為添加樣品的吸光度曲線,(A2-A1)為未添加樣品的吸光度曲線。反應速率恒定階段的直線與橫軸截距為遲滯時間。酪氨酸單酚酶抑制率按照公式(3)計算。

表2 降解產物含量測定

(3)

式中,tA:添加樣品的遲滯時間,min;tB:未添加樣品的遲滯時間,min。

1.2.8.3 胞外酪氨酸二酚酶抑制率測定

參考Ochiai等[16]的方法并稍做改動。用0.05 mol/L PBS緩沖液將5組不同分子量的γ-PGA配成10 mg/mL的樣品溶液,將表2中單酚酶的反應底物L-酪氨酸置換為二酚酶的反應底物左旋多巴,其余組分和條件保持不變,測定酪氨酸酶二酚酶抑制率。酶標儀恒溫28 ℃,加入酪氨酸酶溶液后立刻在475 nm處連續測定吸光度值直至穩定不變。以每分鐘475 nm處吸光度值變化表示反應速率。酪氨酸二酚酶抑制率按照公式(4)計算。

(4)

式中,VA:添加樣品的反應速率;VB:未添加樣品的反應速率。

1.2.9 不同分子量γ-PGA胞內酪氨酸酶活性抑制率的測定

B16-F10細胞是小鼠黑色素瘤細胞,呈上皮細胞樣,貼壁生長。因其與人體黑色素細胞的結構和生理活動相似,相比人體黑色素細胞更易培養,因此被用于美白活性物質的細胞評價模型。

1.2.9.1 B16-F10細胞毒性試驗

參考Wu[17]的方法并稍作改動。采用MTT法對不同分子量γ-PGA的細胞毒性進行測定,以得到后續細胞實驗的安全濃度范圍。取對數生長期的B16細胞,以1×104個/孔的密度接種于96孔板,每孔100 μL,置于37 ℃、5% CO2的培養箱中靜置培養24 h,使細胞完全貼壁。移去舊培養基,加PBS清洗兩遍,加入由含有0.1%DMSO培養基稀釋的不同濃度的樣品溶液,空白組及陽性對照組由培養基和曲酸替代,置于37 ℃培養箱中繼續培養24 h。移去舊培養基后,向各孔內加入以培養基稀釋的5 mg/mL的MTT溶液10 μL和90 μL的新培養基,繼續在37 ℃培養箱中孵育2 h,棄去舊培養基后,向各孔中加入150 μL的DMSO溶劑,震蕩10 min,使紫色甲臜晶體完全溶解。采用酶標儀在490 nm波長處測定96孔板中每孔細胞的吸光度值,設定空白組細胞存活率為100%,細胞存活率按公式(5)計算。

(5)

1.2.9.2 抑制B16細胞內酪氨酸酶活性實驗

為了測定樣品對B16細胞內TYR活性的抑制能力,采用酪氨酸形成多巴醌的速率對細胞內的TYR活性進行評價[18]。取對數生長期的B16細胞,以1×104個/孔的密度接種于96孔板,每孔100 μL,置于37 ℃、5% CO2的培養箱中靜置培養24 h,使細胞完全貼壁。移去舊培養基,加PBS清洗,加入由培養基稀釋的不同濃度的樣品溶液,以曲酸為陽性對照,空白組用培養基替代,37 ℃培養箱中孵育24 h。向各孔內加入10 μL的1 mg/mL的L-酪氨酸溶液和90 μL含1%體積分數的TritonX-100溶液。超聲破碎7 min(功率20%,超聲3 s,間隔10 s,重復30次)。37 ℃水浴1 h后,采用酶標儀測定各孔在475 nm處的吸光度值,細胞內的TYR活性抑制率按照公式(6)計算。

(6)

1.3 數據處理

使用SPSS 27.0軟件對數據進行單因素顯著性分析(ANOVA),P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 產物表征

γ-PGA屬于均聚氨基酸的一種,其由單一氨基酸,即谷氨酸聚合而成。因此采用薄層色譜法對產物進行表征,通過上行展開法,從左至右依次點樣γ-PGA樣品溶液、谷氨酸標準溶液和γ-PGA樣品水解液,顯色結果如圖1所示,水解前γ-PGA樣品溶液顯色后無層析斑點,水解后的樣品水解液與谷氨酸標準溶液在同一水平上有且只有一個層析斑點,說明γ-PGA水解后只含有谷氨酸一種氨基酸,充分說明了γ-PGA是由谷氨酸聚合而成。

圖1 薄層層析結果

2.2 γ-PGA產量測定

采用干重法進行產量測定,取發酵液加入一定體積倍數的無水乙醇,置于4 ℃靜置過夜,經重復脫水2次后,過濾取沉淀,60 ℃烘干至恒重稱量,計算產量。

2.3 γ-PGA純度測定

采用高效液相色譜法測定γ-PGA樣品的含量。首先以標準溶液中γ-PGA的濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標繪制標準曲線如圖2所示,測定γ-PGA樣品峰如圖3所示。將峰面積代入公式計算得γ-PGA樣品的含量為97.69%。

圖3 γ-PGA樣品紫外檢測色譜圖

2.4 γ-PGA降解產物純度測定

采用HPLC法對5組降解產物進行了含量測定。具體方法同上。測定5組降解產物含量如表2所示。點

2.5 γ-PGA降解產物分子量測定

采用GPC法,使用凝膠色譜柱,利用空間排阻原理,分子量大的先流出,對5組降解產物進行了重均分子量測定。測定5組降解產物分子量如表3所示。

表3 降解產物的分子量分布

2.6 不同分子量γ-PGA胞外酪氨酸酶活性抑制率的測定

2.6.1 胞外酪氨酸酶活性抑制率的測定

由圖4可知,γ-PGA對蘑菇酪氨酸酶的抑制效果隨分子量的增加而增大,抑制率隨作用時間的增加,呈現先升高后逐漸降低至平緩狀態,在10 min時抑制效果明顯,分子量由低到高,γ-PGA對蘑菇酪氨酸酶的抑制率分別達到15.61%、41.08%、63.05%、79.57%和90.97%。

圖4 不同分子量γ-PGA對蘑菇酪氨酸酶的抑制效果

2.6.2 胞外酪氨酸單酚酶抑制率的測定

以L-酪氨酸為底物,測定5組分子量的γ-PGA樣品抑制酪氨酸單酚酶的活性。遲滯效應是單酚酶的特征反應,以直線反應部分外推與橫軸的截距表示遲滯時間,遲滯時間越長,表示樣品抑制單酚酶的活性越強。由圖5A可知,隨著γ-PGA分子量的增加單酚酶活力逐漸減弱且均弱于空白曲線,表示5組分子量的γ-PGA均具有一定的抑制效果且遲滯效應越來越明顯。如圖5B所示,5組樣品的遲滯時間隨分子量的增大而增加,表示γ-PGA抑制酪氨酸單酚酶的活性隨分子量的增加而增大。

圖5 不同分子量γ-PGA對酪氨酸單酚酶的抑制效果

2.6.3 胞外酪氨酸二酚酶抑制率的測定

以左旋多巴為底物,測定5組分子量的γ-PGA樣品抑制酪氨酸二酚酶的活性。二酚酶的抑制效果通過催化反應速率進行表征,以直線反應部分的斜率表示反應速率,反應速率越慢,表示樣品抑制二酚酶的活性越強。由圖6A可知,隨著γ-PGA分子量的增加二酚酶活力逐漸減弱且均弱于空白曲線,表示5組分子量的γ-PGA均具有一定的抑制效果且反應速率逐漸降低。如圖6B所示,5組樣品的反應速率隨著分子量的增大而降低,表示γ-PGA抑制酪氨酸二酚酶的活性隨分子量的增加而增大。

圖6 不同分子量γ-PGA對酪氨酸二酚酶的抑制效果

2.7 不同分子量γ-PGA胞內酪氨酸酶活性抑制率的測定

2.7.1 B16-F10細胞毒性實驗

為了更加準確地測定不同分子量γ-PGA的皮膚美白效果,使其可以作為美白活性物質解決色素沉積等問題,確保其使用安全性是研究的首要前提。因此,本研究采用MTT法對不同分子量γ-PGA作用于B16細胞的安全濃度進行了實驗,為后續實驗的進行奠定基礎。以曲酸作為陽性對照,本實驗共設立了5種樣品濃度(0.05、0.1、0.5、1和5 mg/mL)進行測定。

如圖7所示,5組分子量的γ-PGA對B16細胞存活率的影響無明顯差別,但在分子量增大至501 kDa時,在5 mg/mL的濃度下細胞存活率出現明顯降低。而當樣品濃度低于或等于1 mg/mL時,5組分子量γ-PGA的作用下,細胞存活率均超過90%,對B16細胞無明顯毒性,因此,以低于或等于1 mg/mL作為后續實驗的安全濃度范圍。

圖7 不同分子量γ-PGA的B16細胞毒性

2.7.2 抑制B16細胞內酪氨酸酶活性實驗

如圖8所示,經5組分子量γ-PGA處理后,細胞內TYR活性均顯著降低,且不引起細胞毒性。其中21 kDa的γ-PGA在0.05 mg/mL的濃度下,對細胞內TYR的抑制率最高,達到41.77%。

圖8 不同分子量γ-PGA對B16細胞內酪氨酸酶活性的影響

3 討論與結論

γ-PGA是一種胞外分泌型產物。長期以來人們對其性質、產生菌改良和基因特性、發酵過程以及提取純化進行了大量研究[19-22]。γ-PGA的分子量直接影響著其在諸多領域中的應用[23]。隨著研究人員發現γ-PGA具有抗黑素化的作用,γ-PGA逐漸成為了一種潛在的美白劑成分。

減少黑色素的生成量是發揮美白效果的關鍵一步。積累的研究表明,酪氨酸酶是參與黑色素生成過程中的重要限速酶,其表達水平和活性決定著黑色素合成的速度和產量[24]。因此,其抑制劑通常被篩選為美白劑。2004年Sasaki等[25]發現金屬硫蛋白可通過直接抑制黑素體中的酪氨酸酶活性,有效抑制NO和其他黑素原刺激的黑素生成。2013年Jeong等[26]發現人參皂苷Rh4苷元(A-Rh4)通過蛋白激酶A途徑抑制了B16黑色素瘤細胞的黑色素合成。在黑素合成中觀察到酪氨酸酶活性增加,它的下調可以抑制黑素生成。因此,尋找具有抗酪氨酸酶活性的天然生物材料已被認為是開發新的皮膚色素沉著調節產品的重要策略。

本文選用谷氨酸依賴型桿菌-枯草芽孢桿菌作為菌種發酵制備γ-PGA,γ-PGA的產量為8 g/L,含量為97.69%。利用其在結構上對物理化學條件敏感的特性,結合化學降解手段,制備了重均分子量依次為21、117、282、432和501 kDa五組不同分子量的γ-PGA。為保證細胞生物安全性,對細胞可使用的安全濃度范圍首先進行了評估。后以酪氨酸酶活性抑制率為指標,測定了五組不同分子量的γ-PGA在胞內及胞外的酪氨酸酶活性抑制率。綜合細胞毒性和酪氨酸酶的抑制活性結果顯示,5組分子量的γ-PGA均具有酪氨酸酶活性抑制作用,且胞外對酪氨酸酶的抑制活性隨分子量的增加而增大,為未來γ-PGA作為潛在美白成分的應用提供理論基礎。

通過微生物發酵法制備的γ-PGA分子量是有限的。Jiang等[27]通過構建了一種含γ-PGA降解酶基因簇pgsBAE的重組枯草芽孢桿菌,能夠合成低分子量(約10 kDa)的γ-PGA。喬長盛等采用發酵罐發酵,通過調控發酵過程,優化發酵條件,制備了1 000 kDa的γ-PGA。因此,下一步,可結合基因工程等手段通過導入降解酶或合成酶的關鍵基因片段構建工程菌株以制備更高或更低分子量的γ-PGA,以進一步研究其美白活性。

目前,已有天然成分作為美白劑添加在化妝品配方中使用,常見的包括曲酸、熊果苷、煙酰胺、蝦青素以及水楊酸、果酸等,不同的美白成分因其發揮美白作用機制的不同,其美白活性也不同,相同的美白成分,因其添加的濃度不同,其在化妝品中發揮的作用也有所差異。因此,通過對不同分子量聚谷氨酸美白活性的研究,不僅為化妝品領域提供了一個潛在的美白成分,并且根據不同分子量之間發揮美白活性的差異,或可添加到化妝品配方中發揮不同的效果,適配不同的人群,滿足不同人群所需的美白效果。未來,通過改進天然提取物的提取技術,可以對提取物的活性成分進行定性和定量分析,確定活性成分的作用,并找到在自然生物中具有最佳美白效果的活性物質[28,29]。