牛磺酸對酒精性肝病大鼠肝臟脂質代謝的影響

馮 潔，徐 鑫

1.蘇州市動物園，江蘇 蘇州 215000；2.蘇州市畜牧獸醫站，江蘇 蘇州 215000

大量試驗證實，乙醇是很多急性或慢性疾病，以及精神行為障礙發病的一大重要危險因素。進入人體的乙醇排泄有80%～90%依靠肝臟代謝，少部分經肺與腎排出。鑒于牛磺酸具有的范圍廣、特異性低及不會對人體產生危害等優點，本文旨在研究牛磺酸對酒精性肝病大鼠肝臟脂質代謝的影響。

1 材料

1.1 試驗動物

健康大鼠66 只，體重（120±10）g，雄性，SPF（無特定病原體）級。

1.2 日糧

全過程大鼠日糧分為高脂飼料和普通飼料兩種，其中高脂飼料由15%玉米油和85%普通飼料混合而成；普通飼料就是全價配合飼料。

1.3 試驗藥品與試劑

牛磺酸（純度高于99%）；60%vol 純糧白酒；吡唑；玉米油；禾豐維他生；氯化鈉，甲醛溶液，無水乙醇，95%乙醇，新潔爾滅，冰乙酸；考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，總膽固醇試劑盒，甘油三酯試劑盒，高密度脂蛋白試劑盒。

1.4 主要儀器

12 號大鼠灌胃針；JJ 系列高精度電子天平；馬頭牌YP-B、YP-C 型系列應變式電子天平；WFJ2 系列7200 型分光光度計；ZDX-35BI 型座式自動電熱壓力蒸汽滅菌器；組織勻漿器；HH-6 數顯恒溫電熱水浴鍋；低速離心機；電熱鼓風干燥箱；常用手術器械；BS 224S 精密電子天平。

2 方法

2.1 飼養管理

將所有大鼠放置在試驗中心統一進行飼養，每籠控制在5～7 只，室內溫度控制在18 ℃左右，溫差不超過2 ℃，濕度控制在55%左右，燈光每隔12 h打開或關閉。

2.2 試驗方法

預防試驗：取36 只體重為120±10 g 的SPF 級大鼠，按照統一標準飼養7 d，按照5 g/100 g 體重的標準飼以普通全價飼料，自由飲用去離子超純水，同時在水中添加維他生。在試驗的第2 周對大鼠進行分組，分別為模型組、對照組、2%牛磺酸空白對照組、2%牛磺酸預防組、5%牛磺酸空白對照組與5%牛磺酸預防組。試驗方法見表1。每天早上8 點使用0.9%氯化鈉溶液對對照組的大鼠進行灌胃，選擇普通全價飼料進行飼喂，自由飲水；牛磺酸空白組的大鼠均選用普通全價飼料進行喂養，同時在其飲水中分別加入2%與5%的牛磺酸；模型組的大鼠則每日清晨用白酒+吡唑混合液對其實施灌胃操作，在第1周按照10 mL/（kg·d）的劑量使用20%的白酒灌胃，第2 周按照15 mL/（kg·d）的劑量使用30%的白酒灌胃，第3 周按照15 mL/（kg·d）的劑量使用40%的白酒灌胃，并在白酒中添加24 mg/（kg·d）的吡唑，正常飲水，飼喂高脂飼料（飼用玉米油+普通飼料）；按照模型組相同的步驟造模牛磺酸預防組，并在飲水中同時分別加入2%、5%牛磺酸。在試驗進行到第8周、10 周、12 周時，分別從模型組、對照組及預防組中隨機選取2 只大鼠，斷頭處死，取出其肝臟做石蠟切片以驗證造模效果。12 周末成功造模后殺鼠，采集其肝臟與血液。

表1 試驗方法

治療試驗：取SPF 級大鼠30 只，統一標準飼養7 d 后將其隨機分成兩組，即正常對照組6 只，造模組24 只。造模組的全部大鼠都按照預防試驗同樣的方法建立大鼠ALD 模型，在完成造模后的第4周、8 周、12 周分別從上述兩組大鼠中抽取2 只作為試驗對象，提取其肝臟制成病理切片，對造模效果進行分析。待造模成功12 周后，再將剩余大鼠分成4個小組，詳見表2，每一組均包括6 只大鼠，其中自然恢復組飼以正常飲水和普通全價飼料；正常對照組飼喂普通全價飼料，正常飲水；而2%、5%牛磺酸組大鼠均飼喂葡萄全價飼料，飲水中分別添加濃度為2%、3%、5%的牛磺酸。分別在第4 周、8 周后從各組中選出3 只大鼠，采用斷頭法處死大鼠，然后采集其肝臟與血液。

表2 試驗方法

2.3 采集，制備樣本

2.3.1 制備血清

對大鼠嚴格禁食12 h，在最后一次給藥24 h后，稱重，斷頭取血，將其置于離心機上處理，設置轉速為3 500 r/min，連續處理15 min，將處理后的上清液分別裝入1.5 mL 離心管內，放置在冰箱中-18℃冷凍保存。

2.3.2 處理臟器

采用斷頭法處死大鼠，快速解剖取出其肝臟，使用PBS 多次沖洗，使用濾紙吸凈肝臟水分后將肝臟放置在天平上稱重。然后將肝臟放置在10%中性甲醛溶液中進行固定處理，經過常規石蠟包塊處理，用HE 染色后使用光學顯微鏡觀察肝臟病理變化。

2.4 觀察與檢測

2.4.1 試驗觀察

在試驗前對大鼠稱重一次，觀察大鼠試驗期間的毛發、行為、飲食、精神、死亡等狀態；結束試驗后，稱重然后處死大鼠。

2.4.2 生化指標的檢測

測定肝組織勻漿內抗氧化能力，需要按照試劑盒上的說明進行操作，運用722 光柵分光度計對肝組織勻漿內抗氧化能力進行測定，然后根據相關的公式計算血清中的TC、TG、HDL 水平。

2.5 數據分析

計量資料用“均數±標準差”表示，使用SPSS 13.0 統計軟件對單因素方差進行分析，使用Duncan’s 法進行多重比較。

3 分析結果

3.1 情況觀察

預防試驗期間，觀察到牛磺酸空白組、對照組大鼠行動敏捷，毛皮柔順有光澤，飲食正常，精神狀態良好；剩余組的大鼠在灌酒后便表現為嗜睡、步履蹣跚、四肢癱軟；模型組的大鼠伴有活動量減少、反應遲鈍、食欲下降、毛色晦暗、發育遲緩等表現；牛磺酸預防組的大鼠的外觀優于模型組，其醉酒的時間更短，飲水與采食均正常，背毛也正常，與模型組相比體重增長更顯著。

治療試驗期間，觀察發現自然恢復組、牛磺酸治療組與模型組相比，飲食、運動、體重都有所增加，皮毛光澤逐漸恢復。治療一個月后，牛磺酸治療組與自然恢復組相比，體重明顯增加，其中3%牛磺酸組與5%牛磺酸組無顯著差異。治療兩個月時，全部大鼠都接近正常。

3.2 牛磺酸對大鼠血清中TC、TG、HDL 含量的影響

如表3 所示，治療一個月后，自然恢復組與對照組大鼠血清中的TC 含量相比，增加了56.13%，差異非常顯著（P<0.01）；2%牛磺酸治療組、3%牛磺酸治療組和5%牛磺酸治療組TC 含量與對照組相比分別增加了23.23%、14.84%、9.03%，差異都不明顯（P>0.05），其中，5%牛磺酸治療組與自然恢復組的差異非常顯著（P<0.01），而與2%牛磺酸治療組和3%牛磺酸治療組無顯著性差異（P>0.05）。治療兩個月后，自然恢復組、2%牛磺酸治療組、3%牛磺酸治療組和5%牛磺酸治療組與對照組相比，TC 含量分別增加了12.99%、2.60%、2.60%、1.29%，無顯著性差異（P>0.05）。

表3 大鼠血清中TC 含量的變化

如表4 所示，治療一個月后，自然恢復組與對照組大鼠血清中的TG 含量水平相比，增加了32.08%，差異顯著（P<0.05）；5%牛磺酸治療組、3%牛磺酸治療組和2%牛磺酸治療組分別增加了1.87%、1.87%、5.66%，差異都不顯著（P>0.05）。治療兩個月后，自然恢復組、2%牛磺酸治療組、3 牛磺酸治療組%和5%牛磺酸治療組與對照組相比，TG 含量水平分別增加了3.77%、1.87%、1.87%、0，無顯著性差異（P>0.05）。

表4 大鼠血清中TG 含量的變化

如表5 所示，治療一個月后，其他各組與對照組大鼠血清中的HDL 含量相比，水平均有降低，自然恢復組減少了41.23%，具有顯著差異（P<0.05）；2%牛磺酸治療組、3%牛磺酸治療組和5%牛磺酸治療組分別減少了32.23%、23.22%、8.06%，差異均不顯著（P>0.05）。治療兩個月后，自然恢復組、2%牛磺酸治療組、3%牛磺酸治療組和5%牛磺酸治療組與對照組相比，HDL 含量分別減少了28.50%、14.00%、9.50%、2.00%，均無顯著性差異（P>0.05）。

表5 大鼠血清中HDL 含量的變化

4 結論

試驗結果表明，在大鼠的飲水中添加牛磺酸有助于明顯降低大鼠血清內TG 的含量，其中添加5%的牛磺酸效果最佳，證實了應用牛磺酸有助于降低TG 的含量，抑制脂肪在肝臟內的合成。預防性和治療性添加牛磺酸，都能顯著改善乙醇對肝臟造成的損傷，有效促進肝臟的脂質代謝。