非小細(xì)胞肺癌EGFR、ROS1基因突變表達(dá)及其對(duì)術(shù)后順鉑化療耐藥的影響

譚晶,高波,李琦

(駐馬店市中心醫(yī)院 a.病理科;b.腫瘤內(nèi)二科,河南 駐馬店 463000)

肺癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌占80%～85%,具有較高的發(fā)病率與病死率[1]。手術(shù)、放化療、靶向等是治療非小細(xì)胞肺癌的常用方案,其中手術(shù)聯(lián)合術(shù)后順鉑化療較為常見(jiàn),可獲得較好的效果。但臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),部分患者順鉑化療會(huì)產(chǎn)生耐藥性,對(duì)療效造成影響。馮征等[2]指出,EGFR、ROS1基因是非小細(xì)胞肺癌發(fā)生過(guò)程中重要的驅(qū)動(dòng)基因。因此,EGFR、ROS1基因檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌的診斷、治療及預(yù)后判斷中十分關(guān)鍵。由此推測(cè),EGFR、ROS1基因與非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后順鉑化療耐藥情況有關(guān)系,基于此,本研究旨在探究EGFR、ROS1基因突變?cè)诜切〖?xì)胞肺癌患者中的表達(dá),并分析其對(duì)患者術(shù)后順鉑化療耐藥的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

采用前瞻性研究,納入2019年1月至2022年12月駐馬店市中心醫(yī)院收治的70例非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對(duì)象。其中男45例,女25例;年齡55～80歲,平均(69.01±4.54)歲;病理類型為腺癌40例,鱗癌30例;臨床分期為ⅡA期25例,ⅡB期45例;合并基礎(chǔ)性疾病為高血壓39例,糖尿病36例。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2018版)》[3]中肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn),且組織學(xué)類型為非小細(xì)胞肺癌;②經(jīng)過(guò)臨床影像學(xué)、肺癌標(biāo)志物、病理學(xué)檢查等確診;③初發(fā)非小細(xì)胞肺癌;④參照第2版《實(shí)用腫瘤內(nèi)科治療》[4]中臨床分期標(biāo)準(zhǔn),選擇分期為Ⅱ期;⑤符合肺癌根治性手術(shù)的手術(shù)指征,且術(shù)后需要接受輔助化療;⑥預(yù)計(jì)生存期≥6個(gè)月;⑦有可測(cè)量的病灶;⑧患者配合研究且簽署同意書(shū)。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①存在化療禁忌;②合并感染性疾病;③合其他惡性腫瘤;④術(shù)前接受過(guò)放化療、免疫或靶向等治療;⑤合并其他嚴(yán)重內(nèi)科疾病;⑥心肺功能儲(chǔ)備差;⑦自身存在免疫系統(tǒng)性疾病;⑧伴隨精神障礙或意識(shí)不清晰。

1.3 研究方法

1.3.1手術(shù)及化療方案

所有非小細(xì)胞肺癌患者入院后完善相關(guān)檢查,排除手術(shù)禁忌后行肺癌根治性手術(shù),切除標(biāo)本送病理學(xué)檢查。于術(shù)后4周接受輔助化療,采用順鉑和長(zhǎng)春瑞濱方案,具體如下:順鉑(德州德藥制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H37020524)75 mg·m-2,靜脈滴注,第1天(正規(guī)水化、利尿),或者分3 d;長(zhǎng)春瑞濱(國(guó)藥一心制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20050544),25 mg·m-2,第1天和第8天靜脈滴注。3周為1個(gè)周期,共需4個(gè)周期。

1.3.2化療耐藥性的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

所有患者在接受化療2個(gè)周期后評(píng)估順鉑化療耐藥情況,參照《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2018版)》中有關(guān)內(nèi)容。(1)腫瘤標(biāo)志物:腫瘤標(biāo)志物持續(xù)性升高,沒(méi)有下降的趨勢(shì);(2)病灶增長(zhǎng):腫瘤縮小或腫瘤沒(méi)有縮小趨勢(shì),但是增長(zhǎng)速度得到抑制甚至持續(xù)沒(méi)有變化;(3)局部或全身出現(xiàn)轉(zhuǎn)移:治療過(guò)程中,癌細(xì)胞向其他組織或者器官轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn),或者導(dǎo)致全身多處出現(xiàn)病灶,病情較治療前有進(jìn)一步惡化。若患者符合以上任意一項(xiàng)則納入耐藥組,反之則納入不耐藥組。

1.3.3一般資料收集

設(shè)計(jì)一般資料收集表,填寫并記錄患者的臨床資料,內(nèi)容包括性別(男、女)、年齡、病理類型(腺癌、鱗癌)、臨床分期(ⅡA期、ⅡB期)、既往吸煙史(有、無(wú))、既往飲酒史(有、無(wú))、患病原因(個(gè)體因素、環(huán)境因素)、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)(正常、不良)、高血壓(有、無(wú),診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)高血壓防治指南(2018年修訂版)》[5])、糖尿病(有、無(wú),診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)2型糖尿病防治指南(2017年版)》[6])。

1.3.4患者EGFR、ROS1基因突變檢測(cè)

收集所有患者手術(shù)切除病灶組織標(biāo)本,經(jīng)過(guò)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋后立即檢測(cè);切片厚度5～10 μm,選用核酸提取試劑(艾德生物醫(yī)藥科技股份有限公司,閔廈械備20150082,型號(hào)FFPE DNA/RNA),按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)與核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)提取,使用微量紫外分光光度計(jì)(青島聚創(chuàng)世紀(jì)環(huán)保有限公司,型號(hào)JC-DR850)測(cè)定DNA與RNA濃度。完畢后將提取的核酸稀釋到適當(dāng)濃度加入到反應(yīng)體系混勻,選用5種突變基因檢測(cè)試劑盒(艾德生物醫(yī)藥科技股份有限公司,國(guó)械注準(zhǔn)20183401043),采用熒光PCR法,選用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(宏石,型號(hào)SLAN96S),具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行擴(kuò)增,檢測(cè)患者的EGFR、ROS1基因突變情況;并參照說(shuō)明書(shū)分別對(duì)EGFR、ROS1基因突變結(jié)果進(jìn)行判讀。

1.3.5營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

采用主觀整體營(yíng)養(yǎng)狀況量表(patient-generated subjective global assessment,PG-SGA)[7]評(píng)估患者的營(yíng)養(yǎng)狀況,該量表評(píng)估內(nèi)容包括體重、代謝應(yīng)激、體格等方面,評(píng)分內(nèi)容按照0～3分計(jì)分,各項(xiàng)評(píng)分基于患者核查的最高分。綜合計(jì)算患者的評(píng)分,評(píng)分≤3分視作營(yíng)養(yǎng)狀況正常,評(píng)分>3分視作營(yíng)養(yǎng)不良。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后順鉑化療耐藥性情況

化療2個(gè)周期后,70例非小細(xì)胞肺癌患者中順鉑化療耐藥38例,占比54.29%;化療不耐藥32例,不耐藥組占比45.71%。

2.2 非小細(xì)胞肺癌患者EGFR、ROS1基因突變表達(dá)情況

70例非小細(xì)胞肺癌患者中,EGFR基因突變有29例,占比41.43%;ROS1基因突變有2例,占比2.86%。

2.3 耐藥組與不耐藥組的一般比較

耐藥組與不耐藥組年齡、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組其他資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 耐藥組與不耐藥組的一般資料比較

2.4 耐藥組與不耐藥組EGFR、ROS1基因突變表達(dá)情況比較

耐藥組EGFR基因突變占比高于不耐藥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);耐藥組ROS1基因突變占比與不耐藥組比較,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 耐藥組與不耐藥組EGFR、ROS1基因突變表達(dá) 情況比較[n(%)]

2.5 EGFR、ROS1基因突變表達(dá)情況與順鉑化療耐藥情況的相關(guān)性

經(jīng)χ2檢驗(yàn)Phi系數(shù)分析顯示,EGFR基因突變與非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后化療耐藥情況呈正相關(guān)(r>0,P<0.05);ROS1基因突變與非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后化療耐藥情況無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 EGFR、ROS1基因突變表達(dá)情況與術(shù)后順鉑化療 耐藥情況的相關(guān)性分析

3 討論

順鉑藥物為化療的常用鉑類藥物,但因?yàn)槟[瘤細(xì)胞對(duì)鉑類藥物治療初期是敏感的,但隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng),由于自身、腫瘤等因素會(huì)導(dǎo)致患者對(duì)鉑類藥物產(chǎn)生耐藥性,從而降低治療效果,影響預(yù)后。因此,如何有效克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性以提高臨床治療效果是腫瘤化療過(guò)程中亟待解決的難題。

本研究經(jīng)過(guò)一般資料比較發(fā)現(xiàn),耐藥組患者的年齡更大,營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)不良占比更高。簡(jiǎn)單分析原因,隨著年齡的增長(zhǎng),一方面患者體內(nèi)的部分酶活性降低導(dǎo)致經(jīng)過(guò)肝臟代謝藥物的代謝減少而增加毒性;另一方面患者細(xì)胞分解藥物和緩沖藥物毒性的能力也有所下降致使老年患者較年輕患者耐藥性增加。營(yíng)養(yǎng)不良會(huì)造成患者免疫功能降低,機(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)減少,導(dǎo)致藥物吸收出現(xiàn)問(wèn)題,使得藥物不能發(fā)揮作用從而增加耐藥。但是非小細(xì)胞肺癌確診時(shí)患者多數(shù)已進(jìn)展至中晚期,營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)又易受到主觀因素的影響,故通過(guò)年齡與營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)來(lái)判斷患者術(shù)后化療耐藥情況缺乏準(zhǔn)確性,臨床還需要尋找其他敏感指標(biāo)進(jìn)一步明確順鉑化療耐藥的發(fā)生,以此來(lái)判定患者的預(yù)后。

隨著腫瘤驅(qū)動(dòng)基因的深入研究,腫瘤靶向治療與免疫治療逐漸應(yīng)用于臨床。伍錦鳳等[8]研究指出,EGFR、ROS1基因?yàn)榉伟┑尿?qū)動(dòng)基因,已經(jīng)成為靶向治療的重要靶點(diǎn)。這說(shuō)明通過(guò)檢測(cè)患者的EGFR、ROS1基因突變情況,可以作為治療的重點(diǎn)以提高患者預(yù)后。但EGFR、ROS1基因突變是否與順鉑化療耐受有關(guān)尚未明確。本研究結(jié)果中,耐藥組中EGFR基因突變占比更高,且與非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后化療耐藥情況呈正相關(guān),表明EGFR基因突變的患者術(shù)后順鉑化療耐藥的可能性更高。分析其原因,順鉑作為金屬鉑類絡(luò)合物,在細(xì)胞內(nèi)低氯化環(huán)境中能夠迅速解離,以水合陽(yáng)離子的形式與腫瘤細(xì)胞內(nèi)的DNA結(jié)合形成鏈間、鏈內(nèi)或者蛋白質(zhì)DNA交聯(lián)以破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能,從而造成腫瘤細(xì)胞的死亡。而EGFR是一種跨膜受體酪氨酸激酶,與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān),并且還參與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲等多種信號(hào)通路的調(diào)節(jié)[9-10]。EGFR基因突變患者的腫瘤具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移力和侵襲力,能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA的修復(fù),抑制腫瘤細(xì)胞凋亡;在同等順鉑劑量下,與未基因突變的患者比較,基因突變患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞增殖、分化速度更快,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑藥物的攝入量會(huì)降低,增加耐藥性。

ROS1基因可表達(dá)為酪氨酸激酶受體,發(fā)生突變時(shí)能夠持續(xù)激活酪氨酸激酶,同時(shí)也會(huì)激活患者體內(nèi)多條信號(hào)通路,從而誘導(dǎo)和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分化與增殖[11-12]。腫瘤細(xì)胞過(guò)度的分化和增殖使得藥物在有限范圍內(nèi)濃度降低,藥物作用發(fā)揮減低,造成耐藥性增加。同時(shí),ROS1基因突變會(huì)使得藥物與ROS1蛋白不能結(jié)合,影響藥效,也會(huì)增加耐藥性降低療效。但在本研究中發(fā)現(xiàn),ROS1基因突變與非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后化療耐藥無(wú)相關(guān)性,考慮可能與研究樣本量和突變例數(shù)有關(guān),后續(xù)還要擴(kuò)大樣本量,以便進(jìn)一步研究ROS1基因突變與非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后順鉑化療耐藥的關(guān)系。

4 結(jié)論

非小細(xì)胞肺癌患者中EGFR基因突變占比較高,且EGFR基因突變的患者術(shù)后順鉑化療耐藥的可能性更高。