分化型甲狀腺癌組織中Ki-67、Gal-3的表達及其與術后淋巴結轉移的關系

李曉娜,劉松鴿,王軍凱

(許昌市中心醫院 病理科,河南 許昌 461000)

甲狀腺癌為腫瘤外科常見病變,發病率占全身惡性腫瘤的1.5%左右,其中分化型甲狀腺癌(differentiated thyroid cancer,DTC)占比超出90%[1-2]。臨床多采用手術治療,多數患者的預后良好,部分患者可能產生淋巴結轉移,引起腫瘤復發,甚至死亡[3]。因此,臨床需尋找有效預測術后淋巴結轉移的指標,為臨床早期預防提供依據。半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)為半乳糖凝集素家族成員之一,可加快甲狀腺細胞增殖,于細胞增殖不同階段發揮不同作用,其含量升高可增強腫瘤細胞與基底膜黏附功能,引起腫瘤細胞轉移至其他位置[4]。Ki-67已被研究證實,其在增殖細胞內表達水平反映細胞增殖核抗原,為目前已知具有增殖能力代表性、應用廣泛的一種增殖細胞標志物[5]。鑒于此,本研究選取DTC患者作為研究對象,探討癌組織中Ki-67、Gal-3表達與術后淋巴結轉移的關聯性,現報告如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象

選取許昌市中心醫院2020年4月至2022年8月收治的擬行手術治療的256例DTC患者作為研究對象,其中男女比例為64∶ 192,年齡34～56(44.68±5.31)歲,體重指數18.8～23.3(21.09±1.03)kg·m-2,受教育程度為大專及以下120例、大專以上136例。(1)納入條件:①符合DTC診斷標準[6];②經病理學檢查確診;③符合手術適應證,并擬行手術治療;④對本研究知情,并簽署同意書。(2)排除條件:①局部或全身感染;②其他惡性腫瘤;③腎、肝、肺等器官功能障礙;④精神疾病、認知障礙、智力降低;⑤血液系統病變;⑥免疫系統病變。本研究經醫院醫學倫理委員會審核同意

1.2 研究方法

1.2.1免疫組化檢測方法

癌組織、癌旁組織用液氮速凍,保存于-80 ℃冰箱內待用;甲醛(體積分數為10%)固定標本,石蠟包埋,制作為4 μm厚度的石蠟切片,常規行HE染色;通過免疫組織化學(streptavidin-perosidase,S-P)方法檢測,二氨基聯苯胺進行顯色,通過S-P試劑盒測量石蠟切片內Gal-3、Ki-67表達,將已知陽性切片作陽性對照,取PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.2.2免疫組化結果判斷

2名高年資醫生進行獨立閱片;按照陽性細胞百分比與其著色強度進行綜合判斷,每張切片選高倍視野(5個)進行陽性細胞百分比與著色強度觀察;利用視野內陽性細胞占總細胞數比例進行陽性細胞百分比計分,具體如下。(1)著色情況:無著色計0分,著色≤25%計1分,25%<著色≤50%計2分,50%<著色≤75%計3分,著色>75%計4分。(2)著色強度:無著色計0分,淡黃色計1分,棕黃色計2分,棕褐色計3分。將以上計分結果相加,0分屬于陰性,2～3分屬于弱陽性,4～5分屬于中等強度陽性,6～7分屬于強陽性。將中等、強陽性歸為陽性,陰性、弱陽性歸為陰性。

1.3 觀察指標

(1)統計DTC患者癌組織與癌旁組織中Gal-3、Ki-67表達。(2)統計DTC患者不同病理特征癌組織中Gal-3、Ki-67表達。(3)隨訪6個月,統計術后發生與未發生淋巴結轉移DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67表達,其中發生淋巴結轉移者51例,未發生淋巴結轉移者205例。(4)分析癌組織中Gal-3、Ki-67表達對DTC患者術后發生淋巴結轉移的預測價值。(5)分析DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67不同表達水平發生術后淋巴結轉移的危險度。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件處理數據。計數資料以例數和百分數(%)表示,行χ2檢驗;采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線,獲取曲線下面積(area under curve,AUC)、置信區間、敏感度、特異度及cut-off值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 DTC患者癌組織與癌旁組織中Gal-3、Ki-67表達

DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

表1 DTC患者癌組織與癌旁組織中Gal-3、Ki-67 表達對比[n(%)]

2.2 DTC患者不同病理特征癌組織中Gal-3、Ki-67表達

DTC患者中不同病灶特點、組織學類型癌組織中Gal-3、Ki-67表達對比,差異無統計學意義(P>0.05);Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、T3+T4浸潤深度的DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67陽性表達率高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、T1+T2浸潤深度患者(P<0.05)。見表2。

2.3 術后發生與未發生淋巴結轉移DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67表達

術后發生淋巴結轉移DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67陽性表達率高于未發生淋巴結轉移患者(P<0.05),見表3。

表2 DTC患者不同病理特征癌組織中Gal-3、Ki-67 表達對比[n(%)]

表3 術后發生與未發生淋巴結轉移DTC患者癌組織中 Gal-3、Ki-67表達[n(%)]

2.4 癌組織中Gal-3、Ki-67表達對DTC患者術后發生淋巴結轉移的預測價值

以發生術后淋巴結轉移患者作為陽性標本,以未發生術后淋巴結轉移患者作為陰性標本,制作ROC曲線,結果表明,癌組織中Ki-67、Gal-3表達聯合預測DTC患者發生術后淋巴結轉移的AUC是0.803,最佳敏感度、特異度為80.39%、85.37%(P<0.05)。見表4。

表4 癌組織中Gal-3、Ki-67表達對DTC患者術后發生 淋巴結轉移的預測價值

2.5 DTC患者癌組織中Gal-3、Ki-67不同表達水平發生術后淋巴結轉移的危險度

經過危險度分析,結果表明,癌組織Gal-3、Ki-67陽性表達的DTC患者發生術后淋巴結轉移的危險度為陰性表達者的4.442倍、3.131倍(P<0.05),見表5。

表5 DTC患者癌組織Gal-3、Ki-67不同表達水平 發生術后淋巴結轉移的危險度

3 討論

甲狀腺癌為內分泌系統常見惡性腫瘤,為危害健康十大癌種之一[7]。資料調查結果指出,我國甲狀腺癌發病率近幾年呈升高趨勢,尤其沿海城市,發病率呈年均4%增幅升高,為增長速度較快的一種惡性腫瘤[8]。甲狀腺癌術后具有較高的復發轉移率[9],因此需尋找有效的腫瘤標志物,以期為臨床預測術后復發轉移風險提供依據。Ki-67為DNA結合蛋白之一,能判斷細胞增殖狀況、生長細胞比率以及腫瘤惡性程度等,且具有檢測簡單、重復性好等多個優勢,為臨床細胞增殖標志物之一[10]。Ki-67于細胞周期G1期開始表達,于S期到G2期表達升高,到M期達到高峰,于分裂晚期快速消失,自S期進至G2期;Ki-67蛋白和染色質、有絲分裂具有緊密聯系;Ki-67單克隆抗體能快速辨別正在增殖分裂細胞,于腫瘤中一般呈過度表達,多用于多個惡性腫瘤的增殖活性檢測[11-12]。報道結果指出,Ki-67表達和腫瘤分化程度、預后、浸潤程度等具有緊密關聯性,為惡性腫瘤的診斷參數之一[13]。本研究指出,DTC患者癌組織中Ki-67陽性表達率較高,Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、T3+T4浸潤深度患者的Ki-67陽性表達率較高,且Ki-67陽性表達者發生術后淋巴結轉移的危險度為陰性表達者的3.131倍,由此可知,Ki-67在DTC發生、進展中發揮一定作用,可作為臨床評估病情的指標。其原因可能為Ki-67陽性表達能增加腫瘤細胞的增殖活性以及侵襲力等機制,加快病情進展。

Gal-3為糖類結合蛋白之一,屬于凝集蛋白素家族,具備羧基末端與氨基末端糖類結合蛋白,和β-半乳糖苷殘基的結合物具有高度親和力[14]。由于Gal-3富含甘氨酸與脯氨酸結構域,可作用至細胞中糖蛋白、細胞表面分子以及細胞外基質等,當Gal-3異常表達時可參與至細胞黏附、腫瘤轉移、凋亡與炎癥反應等生理、病理過程[15]。以往研究表明,Gal-3過度表達和腸道、胃、甲狀腺等多個惡性腫瘤的發展存在緊密關聯,在甲狀腺癌發生與進展中發揮較大作用[16-17]。

本研究利用ROC曲線分析Gal-3、Ki-67對DTC患者術后發生淋巴結轉移預測價值,結果指出,聯合預測AUC為0.803,說明Gal-3、Ki-67聯合應用時可有效預測術后淋巴結轉移風險,可為臨床早期防治措施提供可參考數據支持。

4 結論

Gal-3、Ki-67在DTC癌組織中呈陽性表達,臨床動態監測其水平變化,可為臨床完善治療方案提供依據,且兩個因子聯用可有效預測術后淋巴結轉移的風險,便于臨床早期防治。