微衛星不穩定性聯合腫瘤突變負荷評估非小細胞肺癌病人術后復發轉移的臨床價值

姬生威 王萍

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer ,NSCLC)早期臨床表現不明顯,臨床診斷多以中晚期為主,生存率較低[1]。腫瘤根治術是治療腫瘤的最佳手段,但術后生存率仍較低,術后常以放化療輔助,但其治療療效和預后程度差異較大。有研究指出,腫瘤突變負荷(tumor mutation load,TMB)和微衛星不穩定性(microsatellite instability,MSI)對腫瘤預后有著密切關系[2]。術后復發轉移是影響病人生存率的主要因素之一,化療療效與術后復發轉移的發生有著直接影響的關系。本研究分析MSI聯合TMB對NSCLC術后病人復發轉移的評估價值。

對象與方法

一、對象

2020年3月～2021年3月本院收治的NSCLC病人病理組織標本80例,男42例,女38例。根據術后是否發生復發轉移分為復發轉移組(47例)和未復發轉移組(33例)。復發轉移組:男∶女(例)=29∶18,平均年齡(64.54±3.47)歲,鱗癌∶非鱗癌=14∶33。未復發轉移組:男∶女(例)=13∶20,平均年齡(63.79±2.53)歲,鱗癌∶非鱗癌=12∶21。兩組性別年齡等比較,差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 影響NSCLC術后復發轉移的單因素分析

納入標準:(1)符合NSCLC診斷標準;(2)符合肺癌根治術適應癥并同意手術且手術順利;(3)已留存癌組織病理組織標本及靜脈血標本;(4)完成1年以上隨訪;(5)術后復發轉移者均已經影像學或病理診斷進行確診。排除標準:病例資料缺失;合并其他惡性腫瘤;術前有接受免疫治療。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

二、方法

1.參考《非小細胞肺癌術后輔助治療中國胸外科專家共識(2018版)》[3],兩組病人均行肺癌根治術,術后均予以維持性化療。

2.臨床相關資料收集:自制信息調查表,以查閱病歷的方式收集病人臨床相關資料:性別、年齡、病理類型、吸煙史、腫瘤分期、有無淋巴結轉移等。資料收集均由專職人員負責,采用雙人錄入法進行登記核對。

3.MSI及TMB檢測:癌組織病理標本經固定、石蠟包埋后切片染色,靜脈血經抗凝處理沉淀白細胞,提取腫瘤細胞和白細胞中DNA。MSI檢測采用PCR,經變性、退火、延伸后,進行電泳反應(150 V),觀察電泳圖。與正常組織比較,任一電位電泳條帶有增多或減少的表現則為陽性,反之則為陰性。TMB采用基于Illumina測序平臺的5209ene panel NGS測序。TMB(mut/Mb)=總突變數量(包括同義、非同義點突變、置換、插入及缺失突變)/目標區域編碼區大小,與白細胞數據對比。TMB突變個數在8個及以上為高TMB,反之則為低TMB。

三、統計學處理

采用SPSS 21.0軟件進行數據分析,計數資料用例(%)表示,行χ2檢驗,Logistic回歸單、多因素分析影響病人術后復發轉移的危險因素,評估價值以ROC曲線分析,聯合檢查采用并聯,Delong Test函數比較不同檢測方案評估NSCLC術后復發轉移ROC曲線之間AUC。P<0.05為差異有統計學意義。

結果

1.影響NSCLC術后復發轉移的單因素分析:復發轉移可能與吸煙史、腫瘤分期高、低中分化、有淋巴結轉移、MSI陰性、高TMB有關(P<0.05)。見表1。

2.影響NSCLC術后復發轉移的多因素分析:將是否發生復發轉移作為因變量,有復發轉移=1;未復發轉移=0,表1中有差異的自變量進行賦值:吸煙史(是=1;否=0),腫瘤分期(Ⅲ期=1;Ⅱ期=0),腫瘤分化(低中分化=1;高分化=0),淋巴結轉移(是=1;否=0),MSI(陰性=1;陽性=0),TMB(高水平=1;低水平=0)。多因素分析結果顯示,淋巴結轉移、高TMB是影響術后復發轉移的獨立危險因素(P均<0.05);MSI陽性是術后復發轉移的保護因素(P<0.05)。見表2。

3.ROC曲線分析:MSI與TMB檢測均具有評估NSCLC術后復發轉移的價值(P<0.05),MSI AUC與 TMBAUC比較,差異無統計學意義(P>0.05)。聯合檢測AUC與MSIAUC比較,差異有統計學意義(P<0.05),但與TMBAUC比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表2 影響NSCLC術后復發轉移的多因素分析

表3 ROC曲線分析水平分析

討論

NSCLC臨床多采取術后放化療輔助[4],但仍有復發轉移的可能性。本研究結果顯示,NSCLC術后發生復發轉移可能與存在吸煙史、腫瘤分期高、低中分化、有淋巴結轉移、MSI陰性、高TMB有關,與既往研究部分相似[5]。其原因可能是,非吸煙史病人的肺部對化療藥效的敏感性較高,降低復發轉移風險;腫瘤惡性程度越高,術中殘留的癌細胞惡性程度可能越高;存在淋巴結轉移的病人,癌細胞侵襲部分廣泛,術后癌細胞易感性可能高于無淋巴結轉移者,在受到外界一些致癌因素的刺激下易發生復發轉移。

MSI是指腫瘤組織DNA多聚酶滑動導致重復序列中一個或多個堿基的錯配和微衛星重組,導致堿基對缺失或插入,而造成微衛星長度的改變,出現新的微衛星等位基因現象,而錯配修復的基因突變導致DNA功能改變,易引發廣泛MSI[6]。本研究顯示,復發轉移者MIS陽性率低于未復發轉移者,提示MSI陽性與其術后預后具有顯著關系,與張文靜等[7]研究相似。MSI陽性的出現,腫瘤細胞內存在大量的DNA功能缺失,基因轉錄功能減弱,可有效增加治療療效,降低術后復發轉移的風險。TMB是指腫瘤細胞基因組內基因外顯子編碼區每兆堿基中發生置換和體細胞突變的總數。本研究顯示,NSCLC術后復發轉移的TMB水平較高,與既往研究相似[8]。腫瘤組織中突變的基因越多,就越有可能產生更多的異常的蛋白質,而這些異常的蛋白質產生的抗原對機體免疫功能存在攻擊作用,增加病人術后復發轉移的風險。多因素分析結果顯示,淋巴結轉移、MSI陽性、低TMB是影響術后復發轉移的獨立危險因素。ROC曲線顯示,MSI與TMB的檢測均具有評估病人術后復發轉移的價值,兩者AUC比較無差異,聯合檢測的價值雖有所提高,但與TMB比較無顯著差異,提示臨床醫師可直接觀察NSCLC病人病理組織的TMB特征來對病人術后復發轉移風險進行評估。