重癥壞死性胰腺炎患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p表達與病情嚴重程度及預后的關系*

劉風浩,周真真,李學峰,張旭東,馬忠廣

滄州市中心醫院:1.肝膽胰外二科;2.日間手術室,河北滄州 061000;3.鹽山縣人民醫院普外科,河北滄州 061399

重癥壞死性胰腺炎屬于急性胰腺炎(AP)的一種,類型比較特殊,是ICU常見的危重癥。該病發展迅速、病情兇險、病死率高[1]。重癥壞死性胰腺炎是由于胰腺異常分泌蛋白酶引起胰腺自身消化,導致機體應激性釋放大量炎癥因子,引起全身炎癥反應綜合征,損傷機體各個組織器官,嚴重威脅患者生命安全[2]。因此,及時評估患者病情,預測患者預后死亡風險對降低患者病死率和提高生活質量具有重要意義。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長度為200～100 000個核苷酸的非編碼蛋白質RNA分子,可對細胞生長、發育等生理活動進行調控,在多種疾病的發生發展過程中發揮作用[3]。有研究發現,AP細胞模型中上調miR-29a基因表達可增加胰腺細胞凋亡率,且lncRNA MEG3可通過miR-29a通路對細胞周期進行調控[4]。微小RNA(miRNA)作為重要的多功能調控因子,在細胞分化、增值、凋亡過程中發揮重要作用,miRNA的異常表達與多種疾病的發生密切相關[5]。miR-195-5p作為miRNA家族成員之一,參與多種炎癥疾病的發生發展[6]。但二者在重癥壞死性胰腺炎中的作用目前研究較少,因此,本研究旨在探討血清lncRNA MEG3、miR-195-5p在重癥壞死性胰腺炎患者中的表達情況及其與病情嚴重程度和預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年10月至2023年1月滄州市中心醫院收治的122例AP患者為研究對象,其中男68例、女54例,年齡28～69歲,平均(46.39±8.49)歲。根據相關標準[7],參照急性生理學和慢性健康狀況評價Ⅱ(APACHEⅡ)評分和AP嚴重程度估計指標(Ranson評分)將AP患者分為非重癥組(非重癥壞死性胰腺炎患者69例,Ranson評分<3分,APACHEⅡ評分<8分)和重癥組(重癥壞死性胰腺炎患者53例,Ranson評分≥3分,APACHEⅡ評分≥8分),Ranson評分和APACHEⅡ評分越高,患者病情越嚴重。非重癥組中男39例、女30例,年齡28～62歲,平均(46.21±8.41)歲;重癥組中男29例、女24例,年齡29～69歲,平均(46.63±8.60)歲。納入標準:(1)符合《中國急性胰腺炎診治指南(2021)》[8]中的相關標準;(2)均為首次發病;(3)發病至入院時間≤48 h;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)合并原發性膽、胰疾病者;(2)存在自身免疫性疾病者;(3)合并組織或器官惡性病變者;(4)合并其他感染性疾病者。另選取同期在該院的體檢健康者50例為對照組,其中男27例、女23例,年齡27～65歲,平均(45.14±8.01)歲。本研究通過醫院倫理委員批準,所有受試者或其家屬知情并同意。

1.2方法

1.2.1資料收集 收集所有研究對象一般臨床資料,包括性別、年齡、體重指數(BMI)、基礎疾病(糖尿病、高血脂、高血壓、冠心病)、病因(膽源性、酒精性、高脂血癥、其他)等。

1.2.2血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平檢測 抽取所有受試者晨起空腹靜脈血3 mL,經過冷凝處理后,離心取上清液(3 500 r/min,10 min),血清保存至-70 ℃的冰箱中待測。使用實時熒光定量PCR測定血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平,Trizol法提取總RNA(Trizol購自美國Invitrogen公司),使用逆轉錄試劑盒(美國GeneCopoeia公司)將RNA逆轉錄為cDNA。使用熒光定量PCR儀(美國GeneCopoeia公司)測定血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平,根據目的基因lncRNA MEG3、miR-195-5p設計并合成相應引物,內參基因為GAPDH、U6,引物序列見表1。使用2-ΔΔCt法計算lncRNA MEG3、miR-195-5p相對表達水平,試驗重復3次,盡量避免誤差。

表1 PCR引物序列

1.2.3重癥壞死性胰腺炎患者預后及分組 根據《中國急性胰腺炎診治指南(2021)》[8]中相關標準對患者治療28 d內的病情進行評估,并根據重癥壞死性胰腺炎患者預后結局分為預后良好組(38例,病情穩定、恢復期患者)和預后不良組(15例,嚴重器官衰竭、搶救失敗、無法治愈患者)。

2 結 果

2.1重癥組和非重癥組臨床資料比較 非重癥組和重癥組年齡、性別、BMI、基礎疾病及病因比較,差異無統計學意義(P>0.05),與非重癥組比較,重癥組APACHEⅡ、Ranson評分升高(P<0.05),見表2。

表2 重癥組和非重癥組臨床資料比較[n/n或或n]

2.2各組血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較 與對照組比較,非重癥組、重癥組血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平降低(P<0.05),且重癥組患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平低于非重癥組(P<0.05),見表3。

表3 各組血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較

2.3血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平與APACHEⅡ和Ranson評分的關系 Spearman相關分析結果表明,AP患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平與APACHEⅡ和Ranson評分均呈負相關(P<0.05),見表4。

表4 血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平與APACHEⅡ和Ranson評分的關系

2.4重癥壞死性胰腺炎患者不同預后患者臨床資料及lncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較 預后良好組和預后不良組性別、年齡、BMI、基礎疾病及病因比較,差異無統計學意義(P>0.05);預后良好組APACHEⅡ、Ranson評分低于預后不良組(P<0.05),血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平高于預后不良組(P<0.05),見表5。

表5 重癥壞死性胰腺炎患者不同預后患者臨床資料及lncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較[n/n或或n]

2.5影響重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的危險因素分析 以重癥壞死性胰腺炎患者是否發展為預后不良為因變量(發生=1,未發生=0),以APACHEⅡ、Ranson評分及血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平為自變量,進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示,APACHEⅡ、Ranson評分及血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平是影響重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的獨立危險因素(P<0.05),見表6。

表6 影響重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的多因素Logistic分析

2.6血清lncRNA MEG3、miR-195-5p聯合對重癥壞死性胰腺炎患者預后不良預測價值分析 ROC曲線結果顯示,lncRNA MEG3單獨評估重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的AUC為0.767(95%CI0.622～0.911),其靈敏度、特異度分別為86.7%、49.9%,最佳臨界值為0.49;miR-195-5p單獨評估重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的AUC為0.777(95%CI0.643～0.911),其靈敏度、特異度分別為80.0%、45.8%,最佳臨界值為0.51。二者聯合評估重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的AUC為0.982(95%CI0.861～0.999),其靈敏度、特異度分別為86.7%、78.8%;二者聯合預測的AUC大于lncRNA MEG3單獨預測的AUC(Z=1.991,P=0.046),miR-195-5p單獨預測的AUC(Z=2.001,P=0.045),見圖1。

圖1 血清lncRNA MEG3、miR-195-5p預測重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的ROC曲線

3 討 論

重癥壞死性胰腺炎主要是由于胰腺局部炎癥反應,導致促炎細胞因子大量釋放,破壞了促炎因子平衡和免疫調節功能,最終引起全身炎癥反應綜合征而形成的[9]。全身炎癥反應和多器官功能衰竭是造成重癥壞死性胰腺炎患者預后差、病死率高的重要原因[10]。因此早期識別重癥壞死性胰腺炎患者病情嚴重程度,預測死亡風險,可為臨床決策提供參考,同時對促進疾病轉歸具有重要價值[11]。胰酶和常規血清檢測特異性較低,超聲、CT引導的細針穿刺細胞學檢查屬于有創檢查,風險大,技術難度高,不能廣泛開展。隨著對重癥壞死性胰腺炎病理生理學研究的深入,炎癥指標及細胞因子等血清學診斷指標已成為臨床關注的焦點。

lncRNA MEG3作為lncRNA家族成員之一,與多種疾病的發生發展密切相關[12]。研究發現,在胰腺癌組織中,lncRNA MEG3表達下調,可促進癌細胞增殖,增強細胞集落形成能力[13]。成鑒曉等[14]研究發現,lncRNA MEG3在胰腺癌組織和細胞系中呈低表達,過表達可抑制PANC-1細胞增殖、侵襲和上皮間質轉化。本研究結果顯示,重癥組血清lncRNA MEG3水平低于非重癥組,提示lncRNA MEG3可能參與了重癥壞死性胰腺炎的發展過程。本結果與張云等[15]研究結果一致,然而具體作用機制尚不明確,仍需進一步的深入研究。

miRNA是一類小分子、多功能非編碼的RNA,由20～24個核苷酸構成,具有多種生物學功能,且在細胞的生長、運動及組織代謝過程中發揮重要作用[16]。miR-195-5p作為miRNA家族成員之一,在許多炎癥反應過程中發揮重要作用[17]。林惠等[18]研究發現,miR-195-5p在急性哮喘發作患者血清中水平降低,且與病變嚴重程度、是否首次發病密切相關,miR-195-5p異常表達與病變的發生和進展可能有一定關系。本研究結果顯示,重癥組血清miR-195-5p水平低于非重癥組。提示miR-195-5p可能參與了重癥壞死性胰腺炎的發展過程。原因可能是由于miR-195-5p低表達可促進炎癥因子表達,同時激活配對基因,增強胰腺相關蛋白酶活性,使患者病情加重。

多因素Logistic回歸分析顯示,APACHEⅡ評分、Ranson評分、血清lncRNA MEG3、miR-195-5p是影響重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的獨立危險因素,進一步提示血清lncRNA MEG3、miR-195-5p的異常表達可能與患者預后不良有關;ROC曲線結果提示,血清lncRNA MEG3、miR-195-5p在評估重癥壞死性胰腺炎患者預后存在一定價值,lncRNA MEG3聯合miR-195-5p評估可提高預測效能,且聯合預測效能優于單一指標預測,表明血清lncRNA MEG3、miR-195-5p二者聯合評估具有較高價值,可用于輔助臨床預測。

綜上所述,重癥壞死性胰腺炎患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平均降低,二者的異常表達與病情嚴重程度有關,且二者是影響患者預后不良的獨立危險因素。lncRNA MEG3、miR-195-5p聯合檢測對重癥壞死性胰腺炎患者預后不良具有較高的診斷價值,二者有望成為預測重癥壞死性胰腺炎患者預后不良的血清學標志物。然而,本研究的樣本數量較少,后續可擴大樣本量,深入探究血清lncRNA MEG3、miR-195-5p對重癥壞死性胰腺炎的具體作用機制。