廣西≥50歲男性新報告人類免疫缺陷病毒感染者的基因亞型及治療前耐藥分析

摘要：目的 分析廣西≥50歲男性新報告人類免疫缺陷病毒（HIV）感染者的基因亞型及治療前耐藥情況。方法 采用分層隨機抽樣法，選取廣西14個城市2020年1至6月新報告≥50歲男性HIV感染者，采用巢式逆轉錄聚合酶鏈反應擴增HIV-1 pol基因片段進行測序，分析耐藥突變位點及耐藥程度。結果 共615例HIV感染者納入分析，CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC 3種主要亞型的構成比分別為57.4%（353/615）、17.1%（105/615）和22.4%（138/615）。核苷逆轉錄酶抑制劑（NRTI）、非NRTI（NNRTI）和蛋白酶抑制劑發生耐藥位點突變例數分別為8例（1.3%）、18例（2.9%）和0例。NRTI和NNRTI位點突變率最高的分別為M184V（0.7%）和K103N（1.8%）。22例（3.6%）至少對任意一類逆轉錄酶抑制劑產生耐藥，其中，對NRTI耐藥4例（0.7%）、NNRTI耐藥14例（2.3%），同時產生耐藥4例（0.7%）；對蛋白酶抑制劑未產生耐藥。NNRTI治療前耐藥率高于NRTI（2.9%比1.3%；χ2=3.929，P=0.047）。拉米夫定、齊多夫定、替諾福韋、阿巴卡韋、利匹韋林、依非韋倫、奈韋拉平和洛匹那韋/利托那韋的治療前耐藥所占比例分別為0.8%、0.3%、0.7%、1.0%、1.3%、2.8%、2.9%和0。結論 CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC為2020年廣西新報告≥50歲男性HIV感染者主要流行毒株，其治療前耐藥仍處于低度流行水平。

關鍵詞：人類免疫缺陷病毒；基因亞型；治療前耐藥

中圖分類號： R18" 文獻標志碼： A" 文章編號：1000-503X（2023）03-0399-06

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.15444

Genetic Subtypes and Pretreatment Drug Resistance in the Newly Reported Human Immunodeficiency Virus-Infected Men Aged≥50 Years Old in Guangxi

FANG Ningye1，WEI Wencui2，LI Jianjun1，CEN Ping3，FENG Xianxiang4，YANG Dong5，TANG Kailing1，LIANG Shujia1，SHAO Yulan2，LU Huaxiang1，JIANG He1，MENG Qin1，LIU Shuaifeng1，ZHU Qiuying1，CHEN Huanhuan1，LAN Guanghua1，YANG Shixiong3，ZHOU Lifang4，MO Jinglin5，GE Xianmin1

1Institute of HIV/AIDS Prevention and Control，Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Prevention and Control，Nanning 530028，China

2Department of Clinical Examination，Guigang Center for Disease Control and Prevention，Guigang，Guangxi 537100，China

3Department of HIV/AIDS/STD Prevention and Control，Nanning Center for Disease Control and Prevention，Nanning 530023，China

4Institute of HIV/AIDS Prevention and Control，Liuzhou Center for Disease Control and Prevention，Liuzhou，Guangxi 545007，China

5Department of HIV/AIDS/STD Prevention and Control，Guilin Center for Disease Control and Prevention，Guilin，Guangxi 541001，China

Corresponding authors：GE Xianmin Tel：0771-2518968，E-mail：gxgexm@sina.com；CEN Ping Tel：0771-5679745，E-mail：cenping877@163.com

ABSTRACT：Objective To analyze the genetic subtypes of human immunodeficiency virus （HIV） and the prevalence of pretreatment drug resistance in the newly reported HIV-infected men in Guangxi.Methods The stratified random sampling method was employed to select the newly reported HIV-infected men aged≥50 years old in 14 cities of Guangxi from January to June in 2020.The pol gene of HIV-1 was amplified by nested reverse transcription polymerase chain reaction and then sequenced.The mutation sites associated with drug resistance and the degree of drug resistance were then analyzed.Results A total of 615 HIV-infected men were included in the study.The genetic subtypes of CRF01_AE，CRF07_BC，and CRF08_BC accounted for 57.4% （353/615），17.1% （105/615），and 22.4% （138/615），respectively.The mutations associated with the resistance to nucleoside reverse transcriptase inhibitors （NRTI），non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors （NNRTI），and protease inhibitors occurred in 8 （1.3%），18 （2.9%），and 0 patients，respectively.M184V （0.7%） and K103N （1.8%） were the mutations with the highest occurrence rates for the resistance to NRTIs and NNRTIs，respectively.Twenty-two （3.6%） patients were resistant to at least one type of inhibitors.Specifically，4 （0.7%），14 （2.3%），4 （0.7%），and 0 patients were resistant to NRTIs，NNRTIs，both NRTIs and NNRTIs，and protease inhibitors，respectively.The pretreatment resistance to NNRTIs had much higher frequency than that to NRTIs （2.9% vs.1.3%；χ2=3.929，P=0.047）.The prevalence of pretreatment resistance to lamivudine，zidovudine，tenofovir，abacavir，rilpivirine，efavirenz，nevirapine，and lopinavir/ritonavir was 0.8%，0.3%，0.7%，1.0%，1.3%，2.8%，2.9%，and 0，respectively.Conclusions CRF01_AE，CRF07_BC，and CRF08_BC are the three major strains of HIV-infected men≥50 years old newly reported in Guangxi，2020，and the pretreatment drug resistance demonstrates low prevalence.

Key words：human immunodeficiency virus；genetic subtype；pretreatment drug resistance

Acta Acad Med Sin，2023，45（3）：399-404

近10年廣西每年新報告人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染者數量位居中國前列，男性感染者比例達70%，其中，50歲及以上男性感染者比例自2015年起呈顯著增長趨勢［1-3］。同時廣西于2004年啟動HIV免費抗逆轉錄病毒治療（antiretroviral therapy，ART），隨著治療時間和藥物使用的增加，HIV耐藥性已成為一個緊迫的問題。治療前耐藥（pretreatment drug resistance，PDR）是指在抗病毒治療前通過耐藥檢測而確定的耐藥，包括傳播耐藥或原發性耐藥［4］。有研究發現，治療前有PDR的患者在治療12個月后出現病毒學失敗的風險是無PDR患者的2～3倍，這將降低一線治療的長期有效性［5］。本研究分析2020年廣西新報告≥50歲男性HIV感染者的HIV-1基因亞型構成特點、耐藥突變位點，了解其PDR情況，為艾滋病防治策略制訂提供數據支撐。

對象和方法

對象 2020年1至6月廣西新報告≥50歲男性HIV感染者。本研究通過廣西倫理審查委員會審批（倫理審批編號：2018-0013-1）。

抽樣方法 設定檢驗效度為0.90，檢驗水準α為0.05，估算本研究所需樣本量為532例，以10%的無應答率，計算研究預期樣本量不應低于586例。以市為單位，在廣西14個城市進行分層隨機抽樣，每市抽取42例符合納入標準的研究對象。

資料收集 從艾滋病綜合防治信息系統抗病毒治療數據庫下載納入分析病例的性別、年齡、文化程度、婚姻狀況、職業、民族、傳播途徑等信息。

HIV-1 pol基因區序列測定 選取免疫印跡法確證HIV陽性的樣本，采用美國羅氏MagNA Pure 96核酸純化儀提取血漿RNA，提取試劑為羅氏診斷公司MagNA Pure 96 DNA Viral NA Small Volume Kit。參照文獻［6］選用引物和條件巢式PCR擴增HIV-1 pol基因片段，其中HIV-1 B亞型標準株HBX2位于基因組第2253～3553位核苷酸，擴增陽性產物送至北京諾賽基因組研究中心測序。

HIV基因亞型判定 原始序列使用美國Gene Codes公司Sequencher 4.10.1軟件進行拼接，BioEdit軟件進行序列比對和整理，獲得的pol基因序列與HIV-1國際參考株比對后，選用FastTree軟件中的廣義時間可逆取代模型近似最大似然法構建系統進化樹，自展值bootstrap校驗1000次。首先構建全部序列與標準株的系統進化樹，形成進化簇且自展值大于75%時判定為相應的亞型和亞簇。CRF01_AE亞簇的劃分和判定參考文獻［7］的方法。采用FigTree v1.4.2軟件可視化顯示亞型及亞簇的判定結果。

耐藥突變位點及分析 將拼接好的序列提交至美國斯坦福大學HIV耐藥數據庫（http：//hivdb.Stanford.edu），通過在線分析工具對耐藥突變位點進行鑒定和解釋。根據耐藥評分將藥物敏感性分為5個水平：敏感（0～9分）、潛在耐藥（10～14分）、低度耐藥（15～29分）、中度耐藥（30～59分）和高度耐藥（≥60分）。本研究定義所有抗病毒治療藥物中有1種及以上藥物耐藥評分≥15分即判斷為耐藥。

統計學處理 采用SPSS 23.0統計軟件，定性資料使用頻率描述，組間比較采用卡方檢驗，Plt;0.05為差異有統計學意義。

結" 果

基本情況 新報告男性HIV感染者2071例，659例抽樣樣本用于HIV-1 pol基因區序列測定，最終獲得有效序列615例納入分析。其中，50～59歲228例（37.1%）、60～69歲242例（39.3%）、≥70歲145例（23.6%）；農民528例（85.9%）、非農民87例（14.1%）；已婚363例（59.0%）、未婚252例（41.0%）；漢族356例（57.9%）、其他民族259例（42.1%）；教育水平小學及以下384例（62.4%）、初中及以上231例（37.6%）；異性傳播611例（99.3%）、其他途徑傳播4例（0.7%）。

基因亞型分布特征 2020年廣西新報告≥50歲男性HIV感染者基因亞型包括CRF01_AE（57.4%，353/615）、CRF07_BC（17.1%，105/615）、CRF08_BC（22.4%，138/615）、CRF55_01B（1.0%，6/615）、B亞型（0.3%，2/615）及其他亞型［C亞型（0.2%，1/615）、CRF85_BC（0.2%，1/615）、獨特重組型（1.5%，9/615）］。其中CRF01_AE分為1～5亞簇，分別占32.0%（197/615）、22.0%（135/615）、1.1%（7/615）、0.5%（3/615）和1.5%（9/615）（圖1）。不同年齡、職業、婚姻、民族、教育水平、傳播途徑的基因亞型分布差異無統計學意義（P均gt;0.05）（表1）。

耐藥突變位點 615例男性HIV感染者中，核苷逆轉錄酶抑制劑（nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NRTI）和非NRTI（non-NRTI，NNRTI）發生耐藥位點突變例數分別為8例（1.3%）和18例（2.9%），蛋白酶抑制劑（protease inhibitors，PI）未發生耐藥位點突變。8例NRTI突變中有4例出現2個及以上位點突變，M184V位點突變率（0.7%，4/615）最高；18例NNRTI突變中有7例出現2個及以上位點突變，K103N位點突變率（1.8%，11/615）最高（圖2）。

PDR傳播情況 615例男性HIV感染者中有22例（3.6%）至少對任意一類抑制劑產生耐藥，其中，50～59歲11例（50.0%）、農民20例（90.9%）、已婚12例（54.5%）、漢族13例（59.1%）、小學及以下12例（54.5%）、異性傳播21例（95.5%）。對NRTI耐藥4例（0.7%）、NNRTI耐藥14例（2.3%），同時產生耐藥4例（0.7%）；對PI未發現產生耐藥。NNRTI治療前耐藥率高于NRTI（2.9%比1.3%；χ2=3.929，P=0.047）。拉米夫定（lamivudine，3TC）、齊多夫定（zidovudine，AZT）、替諾福韋（tenofovir，TDF）、阿巴卡韋（abacavir，ABC）、利匹韋林（rilpivirine，RPV）、依非韋倫（efavirenz，EFV）、奈韋拉平（nevirapine，NVP）和洛匹那韋/利托那韋（lopinavir/ritonavir，LPV/r）PDR所占比例分別為0.8%、0.3%、0.7%、1.0%、1.3%、2.8%、2.9%和0。

討" 論

本研究通過分層隨機抽樣法橫斷面調查分析了615例2020年廣西新報告≥50歲男性HIV感染者基因亞型和PDR，結果顯示HIV-1流行毒株以CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC為主，占96.9%，其中，CRF01_AE占比最高（57.4%），且以1、2亞簇多見。中國CRF01_AE起源于20世紀90年代由東南亞傳入并分化為7個流行亞簇，不同亞簇在傳播途徑、流行地域上存在明顯差異［7］。廣西傳播的優勢毒株是CRF01_AE［8］，柳州等桂北地區以CRF01_AE亞簇1為主［9］，而欽州等桂南邊境地區以CRF01_AE亞簇2為主［10］。提示CRF01_AE目前仍是廣西≥50歲男性傳播最廣、受累最多的毒株，其亞簇流行仍以1和2亞簇為主。

2020年廣西新報告≥50歲男性HIV感染者PDR比率為3.6%，與廣西欽州地區報道的同年齡段比率（4.2%）接近，但低于30～49歲（7.8%）和18～29歲（9.2%）的比率［11］。根據世界衛生組織定義的HIV-1低、中、高度耐藥水平（lt;5%、5%～15%、﹥15%）［12］，廣西新報告≥50歲男性HIV感染者PDR處于低度流行水平。本研究中NRTI最常見的突變位點為M184V突變，與北京未治療HIV感染人群調查結果一致［13］；NNRTI最常見的突變位點為K103N突變，與我國未治療人群HIV感染者試點調查研究結果一致［14］。PDR主要由NNRTI耐藥性驅動，其中EFV、NVP和/或RPV的耐藥性更高，與Liu等［15］研究結果一致。中國艾滋病診療指南（2021年版）［16］已修訂實施并推薦成人初始ART方案為2種NRTI類骨干藥物（TDF+3TC/恩曲他濱或丙酚替諾福韋/恩曲他濱）聯合第3類藥物治療（EFV、RPV等NNRTI類藥物、LPV/r等PI類藥物或多替拉韋、拉替拉韋等整合酶鏈轉移抑制劑類藥物）。本研究結果顯示針對3TC、AZT、TDF、EFV、NVP和LPV/r的PDR所占比例分別為0.8%、0.3%、0.7%、2.8%、2.9%和0，表明廣西目前流行的HIV毒株PDR水平較低，這可能與TDF等藥物在我國使用時間較短有關，因此，我國最新推薦成人初始ART方案是切實可行的。

本研究調查分析的樣本量偏小，結果可能存在偏倚，后續研究中可進一步擴大樣本量予以證實。

綜上，本研究結果表明，2020年廣西新報告≥50歲男性HIV感染者流行毒株以CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC為主，目前PDR流行率處于較低水平。今后應加強對新報告病例的流行毒株基因型和PDR的監測，以便及時預警和采取精準防治對策。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2022-12-15）