UPLC法分析比較梔子和水梔子中主要成分的含量

蔡曉洋，劉聰，李敏

梔子為茜草科植物梔子（Gardenia jasminoidesEllis）的干燥成熟果實，具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒的功效[1]。研究表明，梔子中含量較高的主要是環(huán)烯醚萜類和西紅花苷類成分，其代表成分是梔子苷和西紅花苷-1、西紅花苷-2。其中梔子苷具有保肝利膽、降血糖、抗氧化、抗腫瘤等作用，西紅花苷-1、西紅花苷-2成分具有抗動脈粥樣硬化、抗血栓、抗炎等作用，這二者均為梔子中最主要的有效成分[2-5]。

水梔子為茜草科植物水梔子（G·jasminoides ElIis var·grandiflora Nakai）的成熟果實，是梔子的變種，自古以來多不作藥用，主要用于工業(yè)上的染料和色素[6,7]。但研究發(fā)現(xiàn)，水梔子在化學成分上與梔子極為相似[8]，且有藥理研究表明，水梔子與梔子一樣具有利膽抗炎作用，且利膽作用較梔子更強[9]。而在栽培上，水梔子結果率更高、果實長而大，產量遠高于梔子。因此，水梔子應有較好的藥用開發(fā)前景。

近年來，國內針對梔子與水梔子的對比研究主要集中在藥理、鑒別、梔子苷的含量方面[9-12]，而關于梔子苷和西紅花苷-1、西紅花苷-2等多個成分和主要成分的含量對比研究鮮見報道。本研究首次采用UPLC法對梔子和水梔子中的主要成分進行含量測定和分析對比，為充分開發(fā)利用水梔子的藥用價值提供科學依據。

1 材料

美國Waters ACQUITY UPLC H-Class System（包括四元高壓泵系統(tǒng)、自動進樣器、柱溫箱、TUV檢測器、Empower色譜工作站）；BP-12l s精密電子天平（浙江精密儀器有限公司）；KQ-500DB數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

乙腈為色譜純，水為超純水， 其余試劑均為分析純；梔子苷對照品（批號130428，純度≥98%）購自四川省維克奇生物科技有限公司；西紅花苷-1對照品（111588-201202）、西紅花苷-2對照品（111589-201304）均購自中國食品藥品檢定研究院。

梔子、水梔子果實共收集15批（見表4），分別經成都中醫(yī)藥大學李敏教授鑒定為茜草科植物梔子（Gardenia jasminoidesEllis）和水梔子（G·jasminoides ElIis var·grandigflora Nakai）的成熟果實，所有樣品經統(tǒng)一的方法加工并干燥。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1X50 mm，1.7 μm)，流動相乙腈（A）—水（B）；梯度洗脫：0～5 min（5%～20%A），5～10 min（20%～30%A），10～15 min（30%～5%A）；檢測波長240 nm(0～5min)，440 nm(5～15 min)；流速0.3 mL·min-1；柱溫30 ℃；進樣量2 μL。

2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱定梔子苷、西紅花苷-1、西紅花苷-2適量，加甲醇溶解，制成梔子苷（161.6 μg·mL-1）、西紅花苷-1（32.64 μg·mL-1）、西紅花苷-2（10.5 μg·mL-1）的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取各樣品粉末（過4號篩）約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質量，超聲40 min，放冷，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，0.22 μm濾膜濾過，取濾液即得。

2.4 線性關系考察

將混合對照品溶液分別稀釋2,4,8,16倍，制成不同質量濃度的系列溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，分別以對照品濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，得相應的回歸方程，結果見表1。

表1 線性關系考察結果

2.5 精密度試驗

取同一供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，計算得到梔子苷、西紅花苷-1和西紅花苷-2的色譜峰面積的RSD分別為0.20%，0.36%，0.65%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取梔子和水梔子樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h按“2.1”項下色譜條件測定各指標成分含量，以峰面積值為指標考察方法中的樣品穩(wěn)定性，梔子樣品中梔子苷、西紅花苷-1、西紅花苷-2的RSD分別為0.22%、0.64%、1.07%，水梔子樣品的梔子苷、西紅花苷-1、西紅花苷-2的RSD分別為0.35%、0.59%、0.76%，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

分別取同一批次的梔子和水梔子樣品各6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件測定，計算得到梔子樣品中梔子苷、西紅花苷-1和西紅花苷-2的色譜峰面積的RSD分別為0.45%，0.57%，0.96%，水梔子分別為0.52%，0.49%，0.78%，表明該方法重復性良好。

2.8 加樣回收試驗

分別取已測定的梔子和水梔子樣品粉末各6份（每份0.05 g），精密稱定，每份加入相同量的梔子苷、西紅花苷-1和西紅花苷-2對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，結果見表2，表3，表明該方法準確可靠。

圖1 UPLC色譜圖A.混合對照品；B.水梔子；C.梔子；1.梔子苷；2.西紅花苷-1；3.西紅花苷-2

表2 梔子樣品的3種成分回收率實驗（n=6）

表3 水梔子樣品的3種成分回收率實驗（n=6）

2.9 樣品測定

取所收集的15批樣品，分別稱取粉末約0.1 g，精密稱定，按“2.3”項下方法操作，制備樣品供試品溶液，每個批號3份，按“2.1”項下色譜條件進行測定，并計算樣品中3種成分的含量，以均值作為最終結果，結果見表4。

表4 樣品的成分測定結果(n=3)

測定結果顯示，梔子與水梔子中梔子苷的含量分別在2.36%～5.98%，6.14%～7.81%，均高于藥典規(guī)定的1.8%，西紅花苷-1和西紅花苷-2的總含量分別在0.84%～1.47%，1.28%～1.49%。水梔子的梔子苷含量與西紅花苷-1、西紅花苷-2總含量普遍比梔子高，其中梔子苷含量最高可達3倍。

3 討論

通過對乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-水等多個洗脫系統(tǒng)進行比較，結果表明乙腈-水可很好的將3個成分分離。在樣品處理中考察了不同濃度的甲醇和乙醇等多種提取溶媒，同時考察了不同時間的超聲提取，最終確定了色譜條件和樣品制備方法。

本研究采用UPLC方法同時進行梔子苷、西紅花苷-1和西紅花苷-2含量測定，與傳統(tǒng)HPLC方法相比，明顯縮短了出峰時間，僅為HPLC時間的1/3～1/4，且還具有檢測效率高、靈敏度高、精密度好、重現(xiàn)性強、進樣體積小、溶劑消耗少等優(yōu)勢。本方法快速、簡便、準確，可用于梔子藥材和水梔子的多指標、多成分檢測和質量控制。

梔子與水梔子的含量測定結果表明：水梔子在梔子苷含量和西紅花苷-1、西紅花苷-2總含量上均高于梔子，這與HPLC法和薄層層析-紫外分光光度法分析比較梔子與水梔子中含量差異的研究結果是一致的[7,8,11]。因此，水梔子在主要化學成分含量上確實高于梔子，從此觀點來看，若要進行藥用資源開發(fā)，尚需進一步結合藥理和臨床療效方面的對比研究。