肝細胞癌組織微RNA-597表達與臨床病理特征、肝動脈化療栓塞術療效的關系

李慶偉，李威，楊繼東，喻劉楊，龍健

作者單位：荊門市人民醫院，a血管介入科，b腫瘤科，湖北 荊門 448000

肝細胞癌是指發生在正常肝臟組織細胞的惡性腫瘤，具有侵襲性強、發病率和死亡率高的特點［1］。肝動脈化療栓塞術（TACE）通過導管技術將化療藥物和栓塞劑注入至肝癌供血動脈，達到局部化療和血管栓塞的效果，但其療效并不十分理想［2］。因此探索影響肝細胞癌病人TACE 療效的影響因素以指導臨床治療具有重要意義。miR-597 是位于8p23.1 染色體上的miRNA，與癌癥的發生、發展具有一定的關系。既往研究［3］報道，miR-597-5p 可通過靶向轉錄增強子相關域轉錄因子1從而抑制肝細胞癌的增殖、遷移和侵襲。梅孝臣等［4］研究顯示，miR-597 在肝細胞癌組織中表達降低，且通過靶向Rab23 抑制肝細胞癌細胞的周期和凋亡，進而影響細胞增殖能力。但目前尚無關于肝細胞癌組織miR-597 表達與TACE 預后關系的相關研究。基于此，本研究特探討肝細胞癌組織miR-597 表達與臨床病理特征、TACE療效的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入標準：（1）臨床病理學確診為肝細胞癌病人；（2）入院前均未進行手術切除、靶向治療、化療等；（3）入院后均進行TACE 治療，預期生存期＞3 個月；（4）病人或其近親屬簽署知情同意書。排除標準：（1）合并心、腎功能不全者；（2）伴有其他惡性腫瘤、糖尿病、腦血管疾病；（3）伴有內分泌系統疾病；（4）存在TACE 治療禁忌證；（5）合并全身性感染性疾病。

根據以上標準，選取2019 年1 月至2021 年1 月荊門市人民醫院收治的肝細胞癌病人136 例，男75例，女61 例；年齡范圍為30～75 歲，年齡（56.34±8.96）歲；Child-Pugh分級：A級55例，B級81例；TNM分期：Ⅰb+Ⅱ期74 例，Ⅲa 期62 例。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法

1.2.1肝細胞癌組織miR-597 表達水平檢測 經肝穿刺取病人肝細胞癌組織約10 mg，用研棒碾碎后采用Trizol 試劑提取細胞總RNA，紫外吸收法檢測RNA 的純度和濃度，并將RNA 反轉錄為cDNA。根據實時熒光定量聚合酶鏈式反應法檢測miR-597表達水平，U6 作為內參。反應條件為：95 ℃作用5 min，95 ℃反應20 s，60 ℃反應40 s，共循環40 次；miR-597 正向引物為5'-ACACTCCAGCTGGGTGTGTCACTCGATGAC-3'，反向引物為5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'；U6 正向引物為5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物為5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。采用2-ΔΔCt法計算miR-597 的相對表達量。

1.2.2病人TACE 方法 病人入院后，應用Seldinger 法經皮股動脈穿刺插管，在影像學指導下將導管超選擇插入腫瘤供血動脈，行動脈造影，明確后經導管進行5-氟尿嘧啶（500～1 000 mg）、奧沙利鉑（150～200 mg）灌注，再用40%碘化油進行栓塞，必要時輔助使用明膠海綿。治療次數根據動脈供血情況間隔3周治療1次，共治療2～3次。

1.2.3隨訪及分組 隨訪3個月，TACE 療效參照改良的實體瘤療效評定標準（mRECIST）［5］進行評價。完全緩解：所有目標病灶經影像學檢查顯示其動脈期無增強顯影且病人AFP 水平恢復至正常水平，并至少維持4周；部分緩解：所有目標病灶經影像學檢查顯示其直徑總和降低30%；疾病穩定：所有目標病灶經影像學檢查顯示其直徑總和升高或降低程度低于20%；疾病進展：所有目標病灶經影像學檢查顯示其直徑總和升高≥20%或有新的病灶出現。將完全緩解、部分緩解病人分為有效組，將疾病進展、疾病穩定病人分為無效組。

1.2.4病人資料收集 收集并整理病人資料，如性別、年齡、腫瘤長徑、腫瘤數目、腫瘤部位、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分級、門靜脈癌栓、淋巴結轉移、微血管侵犯（采用MR 功能成像進行判斷）、血清甲胎蛋白（AFP）、miR-597表達水平等。

1.3 觀察指標肝細胞癌組織miR-597 表達與病人臨床病理特征的關系；病人TACE 治療情況及有效組和無效組肝細胞癌組織中miR-597表達水平比較；影響肝細胞癌病人TACE 療效的相關因素：比值比（OR）、95%置信區間（95%CI）。

1.4 統計學方法將SPSS 26.0 軟件用以統計學分析，計量資料以±s形式進行描述，比較采用獨立樣本t檢驗；以例（%）描述計數資料，以χ2檢驗；采用logistic 多元回歸分析探討影響肝細胞癌病人TACE療效的因素。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝細胞癌組織miR-597 表達水平與臨床病理特征關系136 例肝細胞癌病人癌組織中miR-597表達水平為0.456±0.041；miR-597 表達水平與伴門靜脈癌栓、伴淋巴結轉移、腫瘤長徑、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分級等臨床病理特征有關（P＜0.05）。見表1。

表1 肝細胞癌組織miR-597表達水平與臨床病理特征關系/± s

表1 肝細胞癌組織miR-597表達水平與臨床病理特征關系/± s

臨床病理特征性別miR-597的表達量t值1.66 P值0.100女男年齡0.450±0.032 0.461±0.043 1.38 0.170≤60歲＞60歲肝硬化史0.452±0.052 0.463±0.033 0.56 0.576無有門靜脈癌栓0.459±0.038 0.455±0.034 9.64＜0.001無有淋巴結轉移0.481±0.043 0.414±0.032 6.30＜0.001無有腫瘤部位0.478±0.046 0.436±0.031 1.40 0.164左肝右肝腫瘤長徑0.461±0.041 0.452±0.034 9.79＜0.001≤5 cm＞5 cm腫瘤數目0.486±0.052 0.408±0.031 1.26 0.210單發多發TNM分期0.460±0.043 0.451±0.039 7.18＜0.001Ⅰb+Ⅱ期Ⅲa期病理分化0.479±0.053 0.429±0.023 6.25＜0.001低分化中、高分化Child-Pugh分級0.438±0.035 0.483±0.049 8.61＜0.001 A級B級微血管侵犯0.490±0.043 0.433±0.034 1.99 0.049無有甲胎蛋白0.463±0.046 0.448±0.041 1.72 0.088≤400 μg/L＞400 μg/L 0.462±0.045 0.449±0.038

2.2 病人TACE 治療結果及有效組和無效組癌組織miR-597 表達水平比較經TACE 治療后，有效者30 例（完全緩解4 例，部分緩解26 例），占總人數的22.06%（30/136）。有效組癌組織中miR-597 表達水平高于無效組（0.827±0.054 比0.351±0.046，t=48.12，P＜0.01）。

2.3 影響肝細胞癌病人TACE 療效的相關因素分析兩組病人腫瘤長徑、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分級、淋巴結轉移、門靜脈癌栓、微血管侵犯、AFP、miR-597 表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 肝細胞癌136例有效組和無效組的一般資料比較

將上述P＜0.1 的因素記為自變量進行賦值：腫瘤長徑（≤5 cm=0，＞5 cm=1）、腫瘤數目（單發=0，多發=1）、TNM分期（Ⅰb+Ⅱ期=0，Ⅲa期=1）、病理分化（中、高分化=0，低分化=1）、Child-Pugh 分級（A 級=0，B 級=1）、淋巴結轉移（無=0，有=1）、門靜脈癌栓（無=0，有=1）、微血管侵犯（無=0，有=1）、AFP（≤400 μg/L=0，＞400 μg/L=1）、癌組織miR-597 表達水平（實測值），另將TACE 療效記為因變量（有效=0，無效=1）進行logistic 回歸分析，結果顯示腫瘤長徑、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分級、淋巴結轉移、門靜脈癌栓、微血管侵犯、AFP、癌組織miR-597 表達水平均是肝細胞癌病人TACE 療效的影響因素（P＜0.05）。見表3。

表3 肝細胞癌136例多因素logistic回歸分析

3 討論

對于錯失手術根治的最佳時機的肝細胞癌病人臨床上首選方式為TACE。TACE 治療通過栓塞肝動脈，可阻斷肝細胞癌血供，同時在腫瘤局部聚集高濃度的化療藥物以最大限度發揮藥物對腫瘤細胞的殺傷作用，促進腫瘤細胞壞死［6］，但其治療效果并不十分理想。本研究結果顯示，TACE 治療后的有效率為22.06%，表明肝細胞癌病人TACE 治療可能受多種因素的影響而存在臨床療效較低的情況。因此探討影響肝細胞癌病人TACE 治療的相關因素對提高臨床療效具有重要指導意義。

本研究檢測不同臨床病理學特征肝細胞癌病人癌組織miR-597 表達水平，結果顯示miR-597 表達水平與伴門靜脈癌栓、伴淋巴結轉移、腫瘤長徑、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分級等方面密切相關。梅孝臣等［4］研究結果顯示，低分化、存在門靜脈癌栓和淋巴結轉移病人的miR-597表達水平高于中高分化、無門靜脈癌栓和淋巴結轉移病人，此與本研究結果相一致，共同表明miR-597 表達水平可能與病人臨床病理特征相關。有研究［7］發現miR-597可阻礙細胞增殖和調控細胞周期，當miR-597 表達降低時，其對癌細胞增殖的抑制作用減弱，則腫瘤細胞可持續生長，且可逐漸發生侵襲和轉移等。臨床中可通過檢測病人miR-597 表達水平，對病人癌癥病情進行評估，進而制定針對性治療措施。miRNA 主要通過與靶基因mRNA 的3'-UTR 序列結合，形成沉默復合體，阻斷或降解其翻譯過程，進而參與調控人類基因的表達。miR-597 在多種類型惡性腫瘤組織的表達皆與病人預后相關。周蓓等［8］研究報道，miR-597 在乳腺癌中的表達降低，且可通過靶向調控FOSL2 蛋白表達，起到阻礙乳腺癌細胞增殖、侵襲和轉移的作用，有效改善病人預后；Wen等［9］研究表明，miR-597-3p 在甲狀腺癌中通過靶向RAB23 降低SW579 細胞的增殖、侵襲和轉移能力，增強臨床療效。本研究結果顯示，有效組癌組織中miR-597 表達水平高于無效組，且多因素分析顯示癌組織中miR-597是影響TACE療效的因素，提示肝細胞癌組織miR-597 異常表達與病人的TACE 療效密切相關。近年來研究［10］發現，miRNA 參與了腫瘤細胞增殖與凋亡等生物學過程，與肝細胞癌的發生發展密切相關，異常表達的miRNA 可作為肝細胞癌靶向治療的靶點，并可對病人預后進行判斷；某些miRNA 如miR-599 與肝細胞癌病人TACE 治療預后相關，其低表達是病人預后不良的危險因素，進一步說明miRNA與肝細胞癌病人TACE療效可能存在一定的相關性。miR-597 可通過對肝細胞癌細胞生長、增殖以及侵襲與轉移的抑制作用而增強病人對TACE治療的敏感性，從而有助于提升療效。

本研究還發現，Child-Pugh 分級、腫瘤長徑、病理分化程度、TNM 分期、淋巴結轉移、門靜脈癌栓、微血管侵犯和AFP 也是影響TACE 療效的相關因素。Child-Pugh 分級增加表明肝損害程度越高，自身代償能力降低，導致TACE 綜合療效較差；腫瘤長徑較大時，一期治療并不能完全清除，術后部分殘留在體內的腫瘤組織可能會發生浸潤或轉移，加重病情，影響治療效果；病理分化程度越低，TNM 分期越高，表明病人癌癥惡性程度越高，病情越嚴重，影響TACE 療效；淋巴結轉移表明癌細胞已經進行擴散，且癌細胞可通過淋巴途徑向遠處轉移，增加病人病灶數量，提高治療難度，影響TACE 療效；門靜脈是臟器血液回流的重要途徑，門靜脈癌栓形成后極易發生肝內擴散和肝外轉移，引起肝細胞功能衰竭，影響血液回流，導致預后不良［11］。微血管侵犯會導致微小轉移灶的形成，治療時可能難以對微轉移灶進行準確性干預，從而影響TACE 療效。AFP是診斷肝細胞癌的血清標志物，有研究報道［12］，肝細胞癌病人血清AFP 水平升高則病人TNM 分期增加，表明血清AFP 水平與肝細胞癌臨床分期密切相關，從而影響TACE 治療效果。因此，在臨床治療中要針對上述指標進行詳細分析，制定個性化的化療方案，提高病人肝功能以及生存質量。

綜上所述，肝細胞癌組織miR-597 表達水平與病人TNM 分期、腫瘤長徑、病理分級有關，且癌組織miR-597表達與肝細胞癌病人TACE 療效關系密切，有望成為肝細胞癌的一個潛在治療靶點和預后檢測指標。