綦江地區(qū)健康成人外周血T淋巴細胞亞群參考范圍分析

張 靜 周臣敏

（重慶市綦江區(qū)人民醫(yī)院輸血科，重慶，401420）

外周血中T淋巴細胞亞群的含量變化與各種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，因此其含量的檢測可以用于臨床中各種疾病的輔助診斷[1]。近幾年，臨床中主要使用流式細胞術(shù)對外周血中的T淋巴細胞亞群進行檢測[2]。健康成人T淋巴細胞亞群含量的高低與其所在地區(qū)、種族、年齡、性別等息息相關(guān)，所以各個地區(qū)的實驗室或臨床科室需要根據(jù)自身的實際情況，制訂適合本實驗室或科室的T淋巴細胞亞群參考范圍[3-4]。因此本研究通過采用流式細胞術(shù)檢測311例健康成年人群的外周血T淋巴細胞亞群，對綦江區(qū)健康人群的T淋巴細胞亞群水平的變化趨勢進行探討，然后統(tǒng)計其特點，并展開分析，為綦江地區(qū)T淋巴細胞亞群的實驗室參考范圍進行規(guī)范化提供參考，為該地區(qū)的免疫缺陷性疾病、病毒性感染等相關(guān)診斷、相關(guān)性科學研究以及臨床效果的評估，提供有力依據(jù)，從而保證患者的生命安全。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2022年4月1日—2023年4月10日于綦江地區(qū)進行健康體檢的311例體檢者為研究對象，年齡19～84歲，平均年齡（32.35±5.83）歲。其中男性體檢者207例，平均年齡（33.01±5.35）歲，平均身體質(zhì)量指數(shù)（20.65±1.19）kg/m2；女性體檢者104例，平均年齡（31.20±5.44）歲，平均身體質(zhì)量指數(shù)（20.25±1.06）kg/m2。

1.2 主要試劑

（1）四色T淋巴細胞亞群檢測抗體試劑盒：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC（生產(chǎn)企業(yè)：北京同生時代生物技術(shù)有限公司，型號：Z6410002）。

（2）血細胞分析用溶血劑（生產(chǎn)企業(yè)：北京同生時代生物技術(shù)有限公司，型號：Z6910001M）。

1.3 樣本處理

采用含有EDTA抗凝劑的紫色真空管按照標準流程采集健康體檢者的空腹靜脈血2 mL，保證血液無凝固與溶血。試劑復(fù)溫至室溫，取絕對計數(shù)管1支進行編號，向管底加入CD3/CD8/CD45/CD4試劑20 μL，注意槍尖不能碰到管底微球；采用反向移液技術(shù)吸取50 μL患者混勻全血樣本加入管底，注意血液不沾管壁亦不沾到抗體。蓋上管帽，進行渦旋、混勻，在室溫下，放置在避光環(huán)境中孵育15 min。取一次性塑料試管1支，去離子水將10×原液按1:9（一人份：50 μL:450 μL）稀釋成1×，渦旋混勻。向絕對計數(shù)管管內(nèi)加入450 μL 1×血細胞分析用溶血劑，蓋上管帽，渦旋混勻。室溫避光孵育10 min直至液體變得清亮，渦旋混勻后上機檢測。

1.4 流式細胞儀上機檢測

按照標準流程的順序打開流式細胞儀（生產(chǎn)企業(yè)：BD公司，型號：FACSCanto Ⅱ），待儀器開機成功連接后，進行常規(guī)儀器維護，確保液路通暢，并使用熒光微球標準品上機進行儀器的調(diào)試，調(diào)整光路，對陰性對照進行檢測，調(diào)整電壓至最佳，以確保儀器的正常使用。設(shè)置淋巴細胞門，對淋巴細胞進行圈取，數(shù)量為1 000個，并通過軟件對結(jié)果進行讀取，分析CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+亞群的百分比與細胞絕對數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件處理本研究過程中的數(shù)據(jù)并進行統(tǒng)計分析，計量數(shù)據(jù)用（）表示，兩組之間比較采用t檢驗，三組之間比較采用F檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果

將311例健康體檢者按照性別不同進行分組，比較不同性別健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果，結(jié)果顯示男性總淋巴細胞絕對計數(shù)、總T淋巴細胞絕對計數(shù)、CD8+淋巴細胞百分比、CD8+淋巴細胞絕對計數(shù)高于女性，CD4+淋巴細胞百分比低于女性，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩組總T淋巴細胞百分比、CD4+淋巴細胞絕對計數(shù)、CD4+/CD8+比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同性別健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果 （）

表1 不同性別健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果 （）

檢測項目男（n=207）女（n=104）合計（n=311）總淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L）2 696.39±745.49 2 520.79±713.732 643.35±737.70 t/P1.988/0.048總T淋巴細胞百分比（%）69.00±8.94 69.74±7.57 69.25±8.50 t/P0.734/0.470總T淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L）1 860.35±569.57 1 723.43±507.90 1 827.94±550.80 t/P2.071/0.039 CD4淋巴細胞百分比（%） 33.44±7.35 36.27±6.3834.39±7.16 t/P3.344/0.001 CD4淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L） 900.58±334.84 922.57±317.51907.93±328.80 t/P0.556/0.579 CD8淋巴細胞百分比（%）30.45±8.51 28.16±7.88 29.52±8.02 t/P2.294/0.023 CD8淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L） 823.82±330.81 702.16±275.00 783.13±318.04 t/P3.231/0.001 CD4+/CD8+ 1.21±0.50 1.32±0.46 1.25±0.50 t/P1.879/0.061

2.2 不同年齡健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果

將311例健康體檢者按照不同年齡進行分組，即青年組（年齡≤30歲）、中年組（年齡31～50歲）、老年組（年齡＞50歲），比較不同年齡健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果，結(jié)果顯示三組各項指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同年齡健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果 （）

表2 不同年齡健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果 （）

檢測項目青年組（n=175）中年組（n=113）老年組（n=23）總淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L）2 585.94±845.052 617.24±823.812 392.90±854.48 F/P0.687/0.504總T淋巴細胞百分比（%）69.63±8.2169.45±8.87 69.41±8.19 F/P0.019/0.981總T淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L）1 795.09±577.261 730.38±515.661 774.51±543.55 F/P0.471/0.625 CD4+淋巴細胞百分比（%）34.02±6.61 34.43±7.72 34.93±8.10 F/P0.230/0.795 CD4+淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L） 879.77±353.99 887.08±360.36 880.72±398.96 F/P0.014/0.986 CD8+淋巴細胞百分比（%）29.40±7.20 30.49±8.82 29.66±8.96 F/P0.649/0.523 CD8+淋巴細胞絕對計數(shù)（×106/L） 787.65±358.53 822.12±367.97 798.14±394.70 F/P0.307/0.736 CD4+/CD8+ 1.25±0.45 1.24±0.49 1.31±0.60 F/P0.206/0.814

2.3 311例健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群參考范圍

采用百分位數(shù)法對311例健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群進行分析，并將各項指標的95%可信區(qū)間作為綦江地區(qū)健康成人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍，見表3。

表3 311例健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群參考范圍

3 討論

臨床中各種檢驗項目的的檢測結(jié)果需要根據(jù)其參考區(qū)間作出相應(yīng)的合理解釋。臨床實驗室對于各項指標的檢測基礎(chǔ)就是了解指標的參考區(qū)間，也是臨床醫(yī)生在患者健康體檢后，對其健康狀態(tài)進行評估的主要指標[5]。故臨床實驗室需要給臨床醫(yī)生提供更加準確、更加合適的參考范圍，否則發(fā)生誤診或者漏診的概率較高，若情況嚴重，則會導(dǎo)致患者接受錯誤的治療，從而加重病情[6-7]。國內(nèi)臨床實驗室一般會通過流式細胞術(shù)進行檢查，該檢查方法對于淋巴細胞亞群項目檢查后的數(shù)值參考區(qū)間存在較大的差異，并且相關(guān)試劑以及對應(yīng)的儀器生產(chǎn)企業(yè)較多，而試劑以及儀器生產(chǎn)企業(yè)一般會通過調(diào)查研究對其參考區(qū)間進行確認，同時，調(diào)查人群和實驗室中的檢測人群具有較大的差異[8-10]。受到地域因素、遺傳因素、環(huán)境因素、生活習慣等相關(guān)因素的影響，導(dǎo)致檢查時生理狀態(tài)不同，因此，國際上臨床化學聯(lián)合會建議每個臨床實驗室都需要建立和當?shù)厝巳荷硖卣飨喾臋z驗項目的參考區(qū)間[11-12]。

目前，綦江地區(qū)無健康成人T淋巴細胞亞群參考范圍相關(guān)研究，因此，研究本地區(qū)健康成人T淋巴亞群的正常參考范圍是急需解決的問題。本研究結(jié)果顯示，男性總淋巴細胞絕對計數(shù)、總T淋巴細胞絕對計數(shù)、CD8+淋巴細胞百分比、CD8+淋巴細胞絕對計數(shù)高于女性，CD4+淋巴細胞百分比低于女性，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩組總T淋巴細胞百分比、CD4+淋巴細胞絕對計數(shù)、CD4+/CD8+比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），并且不同年齡組各項指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。說明綦江地區(qū)健康成人的性別對T淋巴細胞亞群的部分指標影響較大。實驗室結(jié)果的準確性、可靠性和適用的參考區(qū)間，能夠?qū)w檢者的健康狀況進行評估、并可有助于診斷疾病、監(jiān)測病情變化以及治療效果、評估預(yù)后效果，意義重大[13]。但因為人們的生理狀態(tài)的影響因素較多，同時，儀器、試劑、標本制備方法、操作的差異性等，都會對CD4+T淋巴細胞以及CD8+T淋巴細胞亞群的檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，但其是否能夠?qū)z測結(jié)果產(chǎn)生明顯因素，尚未可知，需要采用深入研究進行證實[14-16]。在對各項試驗技術(shù)進行完善、對其質(zhì)量進行嚴格控制的基礎(chǔ)上，需要建立不同地區(qū)、不同年齡、不同性別及是否吸煙的健康人群的T細胞CD4+亞群、CD8+亞群的參考范圍，提升實驗室檢測的可定量性，進而使其臨床價值明顯提高[17-19]。采用百分位數(shù)法對311例健康體檢者外周血T淋巴細胞亞群進行分析，并將各項指標的95%可信區(qū)間作為綦江地區(qū)健康成人的參考范圍，具體如下：總淋巴細胞絕對計數(shù)1 520×106/L～3 780×106/L、總T淋巴細胞絕對計數(shù)950×106/L～2 840×106/L、總T淋巴細胞百分比49 %～85 %、CD4+淋巴細胞絕對計數(shù)545×106/L～1 420×106/L、CD4+淋巴細胞百分比26 %～50 %、CD8+淋巴細胞絕對計數(shù)318×106/L～1 255×106/L、CD8+淋巴細胞百分比12 %～42 %、CD4+/CD8+為0.70～2.90。通過本研究建立對應(yīng)的參考區(qū)間，與受檢人群的實際情況更加符合，能夠為免疫狀態(tài)的分析以及臨床對疾病的診斷和治療，能夠提供更加精準的參考依據(jù)。

綜上所述，性別會影響健康成人外周血T淋巴細胞亞群的部分指標參考范圍，建立適合本地區(qū)健康成人外周血T淋巴細胞亞群參考范圍對疾病的診斷具有極其重要的意義。